注射用丹参多酚酸联合血栓通对缺氧复氧损伤血脑屏障紧密连接蛋白表达的影响

血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通过精密控制血液与脑实质之间的物质交换维持脑内微环境,保证神经系统功能。脑微血管内皮细胞作为组成BBB的核心,通过细胞间紧密连接蛋白(tight junction protei,TJs)来维持BBB的屏障完整[1-2]。研究表明[3-4],BBB的破坏是造成缺血性卒中出血转化及加重脑损伤的重要因素。因此,维持BBB的完整可能是缺血性卒中的重要治疗策略。

缺血再灌注对血脑屏障紧密连接蛋白的影响

紧密连接是血脑屏障的结构功能基础,它是一个复杂的、具有主动调节性的细胞系统。近来的研究表明缺血再灌注通过各种途径影响紧密连接的结构和分布。探讨血脑屏障连接复合体的分子结构、在脑损伤时的变化以及对血脑屏障通透性调节的可能机制为脑损伤的临床防治提供了一个全新的思路。

伪狂犬病病毒感染小鼠基质金属蛋白酶-9介导紧密连接蛋白损伤血脑屏障的研究

旨在探究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)对小鼠血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性的影响及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与紧密连接(tight junction, TJ)的相关性。将昆明SPF小鼠96只,随机平均分为对照组和3个试验组,24只对照组小鼠滴鼻生理盐水,72只试验组小鼠滴鼻感染PRV,将试验组分为感染24 h组、感染48 h组和感染72 h组,每组24只。观察临床症状并采用H&E染色观察病理损伤情况;通过改良型神经学评分和脑组织病毒载量测定评价PRV感染后神经损伤情况与病毒载量的关系;通过干湿重法和伊文斯蓝染色法探究血脑屏障的通透性;通过mRNA和蛋白表达差异水平探究MMP-9和TJ的相关性。结果显示,攻毒后脑组织病变程度随时间延长而加剧,在攻毒48 h后,脑组织病毒载量出现显著性差异;神经功能损伤评分在第72小时达到最高;干/湿重值及脑组织伊文斯蓝浓度呈时间依赖性;MMP-9与TJ的相关性结果表明,PRV攻毒后MMP-9表达量增加,TJ表达量减少。结果表明,PRV感染通过MMP-9介导的TJ蛋白表达量的降低损害BBB的完整性及通透性。综上所述,PRV感染可能通过MMP-9介导的破坏来损害BBB,为进一步阐明PRV入侵机制奠定基础。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

脑出血后血脑屏障紧密连接蛋白occludin的表达变化

目的探讨脑出血后血脑屏障微血管内皮细胞间紧密连接蛋白occludin的表达变化。方法将SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常对照组和脑出血组．再按时间因素将脑出血组分为出血后6h、24h、48h、72h、7d、14d6个亚组。采用脑内注入自体血法制作脑出血模型。HE染色观察脑出血后血肿周围脑组织的形态学改变：透射电镜观察脑出血后血肿周围紧密连接的超微结构改变；免疫荧光染色检测脑出血后血肿周围紧密连接蛋白occludin的表达分布状况：定量RT—PCR检测脑出血后血肿周围脑组织中occludinmRNA的表达状况。结果与正常对照组相比，脑出血组血肿周围脑组织出现水肿，在48h左右尤为明显，局部可见明显脑细胞坏死及炎细胞浸润。脑出血后血肿周围紧密连接发生明显破坏，内皮细胞间出现裂隙。免疫荧光染色结果显示：正常对照组紧密连接蛋白occludin呈强阳性表达。脑出血后6hoccludin的表达即开始下降，呈阳性表达；脑出血后24～72hoccludin的表达维持在较低水平，呈弱阳性表达。定量RT-PCR结果显示：脑出血后血肿周围脑组织中occludinmRNA相对含量明显降低，在6—72h持续维持在较低水平，与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑出血发生后，紧密连接蛋白occludin的表达下降，这可能是脑出血发生后血脑屏障破坏及脑水肿发生发展的重要分子基础之一。

黄芪对创伤性脑损伤大鼠脑紧密连接相关蛋白表达及血脑屏障通透性的影响

目的探讨黄芪对创伤性脑损伤后紧密连接相关蛋白(claudin-5)表达和血脑屏障通透性的影响。方法 70只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和黄芪组各35只,两组各30只采用自由落体致伤原理造模成功。黄芪组在制作大鼠脑损伤模型前7 d至处死时,每隔12 h腹腔注射黄芪,对照组用等量生理盐水腹腔注射。两组分别于大鼠脑损伤模型制成后6 h、1 d、3 d、5 d、7 d各取2只大鼠,用Western Blot法测定脑组织claudin-5的表达,采用伊文蓝(EB)法测定血脑屏障通透性。结果脑损伤后各个时间点黄芪组脑组织claudin-5蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),脑组织EB含量均明显低于对照组(P<0.05)。结论调节claudin-5的表达,进而调节血脑屏障的通透性可能是黄芪抑制脑水肿形成的机制。

铅诱导血脑屏障体外模型中紧密连接相关蛋白的信号调控

目的研究铅损伤体外血脑屏障(BBB)模型的紧密连接过程中,MAPK、AKT通路的改变,并观察相关通路的抑制剂的调节作用。方法利用TranswellTM小室培养系统将ECV304人脐静脉内皮细胞系与C6大鼠胶质瘤细胞共培养建立体外BBB模型。共培养实验组按照加入醋酸铅(PbC4H6O4)浓度的不同分组。测量跨内皮阻抗(TEER)和FITC-葡聚糖通过量,以动态TEER峰值和FITC-葡聚糖通过量作为判断ECV304细胞紧密连接形成的标准。Western blot法检测铅暴露对细胞紧密连接相关蛋白表达的影响;利用免疫荧光细胞化学染色检测紧密连接相关蛋白的细胞定位;染铅细胞MAPK、PI3K/AKT通路抑制作用。结果铅对ECV304细胞的生长具有抑制作用,且具有时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05);随着培养时间延长,TEER的测定值不断下降,而FITC-葡聚糖通过量显著上升(P<0.05);Western blot法检测发现,在2.5μmol/L铅作用条件下,ECV304细胞和C6细胞共培养体系中ECV304细胞中的紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达水平逐渐下降;p38、ERK、AKT的磷酸化水平逐渐增强;采用免疫荧光细胞化学染色发现ECV304细胞紧密连接相关蛋白表达减弱,信号通路抑制剂抑制铅诱导的信号通路活化,ERK1/2抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY2940021可抑制铅诱导的紧密连接相关蛋白表达降低。结论铅可诱导BBB通透性增强,MAPK、AKT通路抑制剂可抑制BBB通透性。

紧密连接蛋白与血脑屏障

血脑屏障是机体内最重要的器官防御结构之一,紧密连接蛋白是血脑屏障重要的组成部分。血脑屏障结构和功能的改变多与其紧密连接蛋白的表达变化有关。该文主要对影响血脑屏障结构和功能的各种紧密连接蛋白进行综述,为研究药物影响血脑屏障结构功能改变的机制及新药筛选提供借鉴。

紧密连接Occludin蛋白在缺血性脑卒中肠屏障改变中的作用

目的 研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障功能改变以及紧密连接蛋白Occludin在其中的可能机制.方法 杂种犬20只,随机分为实验组和对照组（即假手术组）,每组10只.实验组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型.实验前及实验后12、24 h行血浆内毒素脂多糖（LPS）浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜紧密连接Occludin蛋白的表达.结果 实验组动物均形成脑梗死.与对照组比较,实验组实验后12、24 h 血浆LPS浓度显著增高,紧密连接蛋白Occludin蛋白平均光密度显著降低（P均〈0.01）.相关和回归分析显示,Occludin蛋白平均光密度与实验后12、24 h 血浆LPS浓度均呈负相关（P均〈0.05）.光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时肠道屏障功能有明确的损害.血浆LPS能反映缺血性脑卒中时的肠屏障损伤.缺血性脑卒中时肠黏膜紧密连接蛋白Occludin表达降低,从而导致紧密连接破坏,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一.

紧密连接蛋白1与肝性脑病大鼠模型血脑屏障通透性的关系

目的研究肝性脑病(HE)大鼠脑组织紧密连接蛋白(ZO)1水平与血脑屏障通透性改变之间的关系。方法将180只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组HE 4、8和12 h共4组,每组45只。应用D-氨基半乳糖(400 mg/kg)和内毒素(100μg/kg)联合腹腔内注射建立HE大鼠模型。分别于造模后4、8和12 h检测血氨浓度、伊文思蓝(EB)含量、脑组织含水量及real-time Q-PCR法检测血脑屏障ZO-1 mRNA含量。计量资料方差齐时采用LSD检测,方差不齐时采用Dunnett T3法检测。结果造模2 h后HE组大鼠逐渐出现HE症状;造模后4 h与正常组相比,大鼠血氨浓度[(74.27±1.77)μmol/L vs(33.85±1.50)μmol/L]、脑组织EB含量[(4.84±0.43)μg/g vs(3.96±0.48)μg/g]、脑组织含水量[(78.63±0.46)%vs(76.07±0.39)%]即开始升高(P值均<0.001),且随时间延长,血氨浓度、脑组织EB含量、含水量升高更加明显(F值分别为5983.36、111.54、737.25,P值均<0.001);造模后4 h大鼠脑组织ZO-1 mRNA表达的相对含量[(1.282 3±0.057 4)vs(1.457 6±0.065 4)]即开始下降(P<0.001),且随时间延长,脑组织ZO-1 mRNA表达的相对含量下降更加明显(F=135.38,P<0.001)。结论 HE时出现血脑屏障通透性增强及脑水肿,可能与ZO-1 mRNA表达下降有关。

紧密连接相关蛋白对血脑屏障通透性影响的研究进展

血脑屏障作为机体中重要的组织结构,对于维持脑组织的安全及稳定具有十分重要的作用,紧密连接是血脑屏障的重要组成部分,其相关蛋白在维持紧密连接的稳定性和血脑屏障通透性方面同样至关重要。

体外循环对大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白表达的影响

目的探讨体外循环(CPB)对大鼠血脑屏障(BBB)功能及脑血管内皮紧密连接蛋白表达的影响。方法 24只成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)和体外循环组(C组)。S组进行相应的麻醉和手术操作但不进行CPB,C组进行CPB 60 min并继续观察2 h。每组随机取6只测脑组织伊文思蓝(EB)含量,另6只做脑组织含水量测定、紧密连接蛋白Oc-cludin和ZO-1的表达以及大鼠BBB超微结构的观察。结果与S组比较,C组大鼠海马区脑组织EB含量和含水量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,C组大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。S组BBB基膜均匀一致,完整性良好,内皮细胞间的紧密连接完整;C组基底膜变厚,微血管腔狭窄,内皮细胞间紧密连接不清楚。结论 CPB使大鼠BBB的结构发生变化、通透性增加,其机制可能与大鼠脑血管内皮紧密连接蛋白改变有关。

异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。

酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连接蛋白及血清生化指标的影响

目的:观察酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连结蛋白及血清生化指标的影响。方法:12只雄性大鼠随机平均分为对照组和酸枣仁组。酸枣仁组给予酸枣仁浸膏,3 mg·(kg·d)-1,连续灌胃3 d;对照组给予等量的生理盐水。腹主动脉取血,分离血清;采用MDCK-MDR1细胞模型,培养3 d至融合,体积分数10%含药血清孵育12 h后进行F-actin染色,在倒置荧光显微镜下观察酸枣仁含药血清对MDCK-MDR1细胞紧密连接蛋白的影响;并采用Mindray BS-220全自动生化分析仪对含药血清总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和肌酐等生化指标进行分析。结果:F-actin染色结果显示:对照组细胞紧密连接蛋白F-actin形态完整,形成肌动蛋白丝呈环形分布于细胞周围,提示细胞紧密连接完好,酸枣仁含药血清处理后,F-actin荧光无明显变化,细胞周边肌动蛋白丝带无明显异常。血清生化分析结果显示:酸枣仁组与对照组比较,总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素等指标差异统计学意义(P>0.05);酸枣仁组天门冬氨酸氨基转移酶含量(162.2±3.04)U·L^(-1),高于正常对照组(146.0±4.9)U·L^(-1)(P<0.05);酸枣仁组碱性磷酸酶和肌酐含量较对照组显著下降(P<0.001)。结论:酸枣仁含药血清对于细胞紧密联接蛋白无显著影响,但可显著提高天门冬氨酸氨基转移酶,提示酸枣仁可能通过影响体内天门冬氨酸氨基转移酶的活性而发挥抗焦虑作用。

水蛭素对急性脑出血患者血脑屏障紧密连接蛋白表达和患者颅内压的影响

目的:探究水蛭素对急性脑出血患者血脑屏障紧密连接蛋白表达和患者颅内压的影响。方法:选择120例自发性脑出血患者随机分为治疗组(n=60)和对照组(n=60),其中对照组患者实施常规治疗,观察组患者则在对照组的基础上加用水蛭素治疗。对比分析两组患者血脑屏障紧密连接蛋白claudin-5、蛋白酪氨酸激酶2/信号转导(janus kinase 2/signal transducer,JAK2)、转录激活因子3(activator of transcription 3,STAT3)和细胞间黏附分子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)mRNA的表达水平,同时分析颅内压、临床治疗效果、出血量、血肿周围低密度,以及神经功能缺损(European stroke scale,ESS)和生活质量(The MOS item short from health survey-36,SF36)评分。结果:治疗4d、10d和21d,两组患者claudin-5水平、ESS和SF36评分均较治疗前升高,且治疗组水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);JAK2、STAT3、ICAM-1 mRNA水平、颅内压、出血量和血肿周围低密度均较治疗前降低,且治疗组水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。另外,观察组患者治疗总有效率为96.67%,显著高于对照组的88.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:水蛭素可减轻急性脑出血患者JAK2、STAT3和ICAM-1 mRNA的高表达,提高血脑屏障紧密连接蛋白claudin-5的表达水平,降低颅内压,促进脑出血水肿的吸收,缩小血肿周围低密度区,从而促进患者神经功能恢复,提高生活质量。

缓激肽对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白分布和表达的影响

目的研究缓激肽(BK)对血肿瘤屏障紧密连接相关蛋白(ZO-1)分布和表达的影响,以及蛋白激酶C(PKC)在BK开放紧密连接中的作用。方法将大鼠随机分为对照组和BK 5、10、15、30、60 m in组共6组。建立C6大鼠胶质瘤模型,颈动脉给药,应用W estern b lot法检测脑肿瘤微血管上ZO-1和PKC表达水平的变化;应用免疫组织化学法检测脑肿瘤微血管上ZO-1的分布和表达水平变化。结果与对照组相比,BK组紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平显著降低,BK 15 m in组降低最明显(P<0.01);BK作用后PKC表达水平明显增加,BK 10 m in组增加最显著(P<0.01)。结论缓激肽可通过下调ZO-1的表达开放紧密连接,PKC可能是BK开放紧密连接的调节机制之一。

冰片对血脑肿瘤屏障开放程度及紧密连接蛋白表达的影响

目的：探讨冰片对血脑肿瘤屏障（BTB）开放程度和紧密连接蛋白表达的影响。方法建立体外BTB试验模型，分为空白对照组（培养基）、冰片低剂量组（25μg/ml）、冰片中剂量组（50μg/ml）、冰片高剂量组（100μg/ml）。采用辣根过氧化酶（HRP）流量和酶联免疫吸附法（ELISA）测定不同时间点BTB的通透性及紧密连接相关蛋白的表达。结果随着时间延长，低、中、高剂量组各时间点通透率均逐渐升高（P﹤0.01）；低、中、高剂量组10～240 min通透率高于空白组（P﹤0.01）；中、高剂量组30～180 min通透率高于低剂量组（P﹤0.05）；高剂量组10～180 min通透率高于中剂量组（P﹤0.05）；不同时间点间和不同组别间Occludin蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；各组ZO-1和F-actin蛋白表达量均先降低后逐渐升高（P﹤0.05）；低剂量组30 min后，中、高剂量组60 min后蛋白表达量缓慢上升，且均至240 min时基本与给药前水平一致（P﹥0.05）；中、高剂量组在30、60 min时ZO-1和F-actin蛋白表达量最低（P﹤0.01），并存在剂量依赖趋势，即高剂量﹤中剂量﹤低剂量﹤给药前。结论冰片可以增加BTB的开放程度，从而提高化疗药物的透过率，其机制可能是通过调控紧密连接蛋白ZO-1和F-actin的表达而实现的。

紧密连接蛋白occludin在血脑屏障中的研究概述

紧密连接(Tight junction,TJ)是细胞间的重要结构,而occludin是构成TJ的重要跨膜蛋白。血脑屏障(blood brainbarrier,BBB)是中枢神经系统在解剖和生理上重要屏障,而TJ对于BBB的形成具有重要作用。Occludin的表达异常和位置改变,可以影响BBB的功能,是研究BBB的重要手段。本文将介绍TJ相关蛋白occludin的基本结构和功能,并简述occludin在BBB中的作用。

紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的表达及意义

目的通过观察大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑皮层紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的变化及JNK抑制剂SP600125对其表达的影响,探讨SAH后早期脑损伤的机制。方法成年雄性SD大鼠75只,随机分成假手术组(sham组)、SAH组、SAH+DMSO组、SAH+SP600125(10 mg/kg)组和SAH+SP600125(30 mg/kg)组5组。采用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,在SAH后24 h时,应用电镜观察各组脑皮层微血管血脑屏障形态学变化;应用Western blot检测各组中脑皮层Claudin-5、ZO-1表达的变化。结果 SAH后早期脑皮层微血管发生明显损伤改变;与sham组相比,SAH组出血后24 h Claudin-5、ZO-1的表达水平明显降低(P<0.05),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125明显改善了脑皮层微血管形态学损伤程度,并抑制了Claudin-5、ZO-1表达水平的降低。结论大鼠SAH后早期血脑屏障结构破坏是早期脑损伤关键性机制之一;SP600125可能通过抑制细胞凋亡、保护血脑屏障发挥SAH早期脑损伤的神经保护作用。

血脑屏障紧密连接在脑转移癌和胶质细胞瘤中的变化和意义

目的探讨血脑屏障紧密结构在胶质瘤及脑转移瘤中的变化及对瘤周水肿的影响。方法该院2006~2012年收治的脑转移癌患者16例和随机调取同时期脑胶质瘤术后标本16例作对照,采用免疫组化的方法检测S-100、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。同时对两种标本进行电镜和磁共振成像方法检查,观察两组标本中血脑屏障紧密连接的变化。结果 S-100、GFAP在脑转移癌和低分化的脑胶质瘤中无阳性表达,高分化的脑胶质瘤中表达降低;电镜检查脑转移癌和低分化的脑胶质瘤有窗孔样结构,脑转移癌和高分化的脑胶质瘤无窗孔样结。强化磁共振影像结果,脑转移癌和低分化胶质细胞瘤的增强作用非常明显,而高分化胶质细胞瘤没有明显增强作用。结论脑转移癌和高分化胶质细胞瘤的血脑屏障紧密连接已经破坏,为靶向治疗脑转移癌提供新的思路。