血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究

目的 :对原有的血虚模型进行改进 ,并观察当归补血汤的作用。方法 :采用乙酰苯肼 6 0mg/kg和环磷酰胺16 0mg/kg联合造成小鼠的血虚状态。取血测定小鼠的外周血象 ,取股骨测定骨髓有核细胞数量 ,及以电镜观察骨髓超微结构 ,观察模型小鼠的游泳时间、体温及放免法测定血浆cAMP、cGMP的比值。同时观察了当归补血汤改善血虚证的作用。结果 :当归补血汤能显著增加模型小鼠的红细胞、白细胞、骨髓有核细胞的数量 ,改善网织红细胞在外周血中的比例及骨髓超微结构 ,并能延长模型小鼠的游泳时间、升高体温、提高血浆cAMP/cGMP比值。结论 :实验制备的血虚动物模型属于血虚证的范围 ,反映了血虚证的主要特征 ,可作为血虚证模型之一。

八珍汤对血虚模型小鼠造血调控因子影响的实验研究

探讨八珍汤对由环磷酰胺引起的小鼠骨髓造血功能抑制的调控作用。采用环磷酰胺致小鼠血虚模型 ,测定八珍汤对骨髓抑制小鼠外周血象及其细胞因子产生的影响。结果表明 ,八珍汤对环磷酰胺所致血虚模型小鼠骨髓细胞有促进增殖作用 ;经八珍汤诱导制备的巨噬细胞、脾细胞、肺条件培养液和骨骼肌条件培养液能促进血虚模型小鼠骨髓细胞增殖 ,促进血虚模型小鼠骨髓基质细胞分泌肿瘤坏死因子 (TNF)。八珍汤对环磷酰胺所致化疗损伤的造血调控作用可能与直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌正性和负性造血生长因子有关。

熟地黄多糖对血虚模型小鼠的影响

目的 :观察熟地黄多糖 (RGP)对模型小鼠外周血象、骨髓造血干细胞、骨髓有核细胞的影响。方法 :各组小鼠连续灌胃 8～ 9d ,腹腔注射环磷酰胺 (CY)致化学损伤血虚模型 ,取全血测外周血象、骨髓有核细胞计数 ;各组小鼠尾静脉注射同种供体小鼠骨髓细胞悬液 ,取脾脏固定 ,观察外源性脾结节形成 ,各组小鼠以60 Coγ全身照射7 2 5Gy ,取脾脏观察内源性脾结节形成 ;各组小鼠60 Coγ全身照射 7 5Gy ,复制出放射性损伤模型 ,测外周血象和骨髓有核细胞数量。结果 :RGP各组对CY血虚模型小鼠外周血象、骨髓有核细胞下降均有拮抗作用 ,与模型组比较 ,有显著差异。对小鼠脾结节的形成有明显的促进作用 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,对于小鼠外周血象的放射性损伤 ,RGP高剂量组可明显抑制小鼠全血细胞减少 (P <0 0 5 ) ,RGP低剂量组虽可提高损伤小鼠血细胞数量 ,但无统计学意义。结论 :熟地黄多糖对于不同血虚模型小鼠外周血象、骨髓有核细胞下降均有拮抗作用 ,对小鼠造血干细胞具有促进增殖、分化作用。

大鼠慢性失血性血虚模型造模方法的研究与评价

目的通过对慢性失血性血虚模型的研究,筛选出最适宜评价养血补血中药的血虚模型。方法 3种血虚模型组大鼠分别每天于眼底静脉丛采血2.5、5.0和7.5 ml.kg-1,共持续15 d,建立3种慢性失血法血虚模型。同时每种模型均设当归补血汤给药组,各组大鼠造模的d 3、d 6、d9、d 12、d 15所采的血样用来检测血常规,以观察模型的变化和当归补血汤的补血作用。结果采血量为2.5 ml.kg-1组的大鼠于实验的d 12、d 15模型组与正常组相比差异均有显著性,但给予当归补血汤后对d 12各指标的改善作用无显著性,对d 15的各指标则有明显改善作用,说明该模型于d 15造模成功。采血量为5.0 ml.kg-1组的大鼠于实验的d 12和d 15均造模成功,其中d 12的改善作用优于d15。采血量为7.5 ml.kg-1组的大鼠于实验的d 9和d 12均造模成功,但该模型组大鼠的炎症反应程度较强,实验d15模型组与正常组相比差异有显著性,但给予当归补血汤后对各指标均无明显改善。结论结合动物的炎症反应程度、受试药物的补血作用和减少对实验动物的伤害等综合考虑,优选大鼠每天采血5.0 ml.kg-1且持续12 d的慢性失血性血虚模型为可靠的大鼠慢性血虚模型。该方法为研究中药养血补血作用提供了借鉴和参考。

四种缓解化学药物治疗后骨髓抑制中成药对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血和骨髓象的影响

目的:观察补气养血、健脾益肾的参芪颗粒,补气养血的复方阿胶浆,补气养阴的贞芪扶正颗粒,温肾健髓、益气养阴、生血止血的复方皂矾丸4种中成药对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血及骨髓象的影响。方法:实验于2005-06/09在河南中医学院药理实验室完成。①选用健康昆明种成年小鼠150只,雌雄不拘。按随机数字表法分为15组,每组10只:高、中、低剂量贞芪扶正颗粒组分别按15,10,5g/kg(20mL/kg)剂量灌胃贞芪扶正颗粒混悬液(主要成分:黄芪、女贞子;甘肃扶正药业科技股份有限公司生产,批号040803);高、中、低剂量复方阿胶浆组分别按10,20,30mL/kg剂量灌胃复方阿胶浆(主要成分:阿胶、熟地黄、党参等;山东东阿阿胶股份有限公司生产,批号050446);高、中、低剂量复方皂矾丸组分别按2.4,1.6,0.8g/kg(20mL/kg)剂量灌胃复方皂矾丸混悬液(主要成分:皂矾、西洋参、海马等;陕西郝其军制药有限责任公司生产,批号041014);高、中、低剂量参芪颗粒组按3,2,1g/kg(0.2mL/10g)剂量灌胃参芪颗粒混悬液(主要成分:人参、黄芪、当归等;江西山高制药有限公司生产,批号040702);鲨肝醇组按10g(20mL)/kg剂量灌胃鲨肝醇混悬液;空白组和模型组灌胃同体积的生理盐水(0.2mL/10g)。每天给药1次,连续给药10d。从实验的第6天开始除空白组外,各组小鼠腹腔注射环磷酰胺40mg/kg,连续给药5d。②各组小鼠分别于末次给药后24h,进行血常规检测。另取右侧股骨,镜下计数骨髓有核细胞数。③计量资料符合正态分布、方差齐者用t检验。结果:小鼠150只均进入结果分析。①对外周血的影响:模型组小鼠血白细胞、红细胞和血小板计数及血红蛋白水平、血细胞比容均明显低于空白组(t=2.49～8.19,P<0.05￣0.01)。鲨肝醇组、各剂量参芪颗粒组和复方阿胶浆组及贞芪扶正颗粒组、复方皂矾丸组小鼠血白细胞计数均明显高于模型组(t=3.67～9.12,P<0.01)。中剂量复方阿胶浆组、贞芪扶正颗粒组和复方皂矾丸组和高剂量贞芪扶正颗粒组小鼠血红细胞计数明显高于模型组(t=2.58～3.05,P<0.05￣0.01)。高、中剂量复方阿胶浆组和中、低剂量贞芪扶正颗粒组小鼠血血小板计数明显高于模型组(t=2.48～2.84,P<0.05￣0.01)。各剂量复方阿胶浆组和各剂量贞芪扶正颗粒组和中、低剂量复方皂矾丸组小鼠血血红蛋白水平明显高于模型组(t=2.21～3.28,P<0.05￣0.01)。中剂量参芪颗粒组、各剂量复方阿胶浆组、高剂量贞芪扶正颗粒组,以及高、中剂量复方皂矾丸组小鼠血细胞比容明显高于模型组(t=2.15～2.86,P<0.05)。②对骨髓象的影响:与空白组比较,模型组小鼠骨髓有核细胞数均明显低于空白组(t=8.08,P<0.01)。鲨肝醇组,各剂量参芪颗粒组、复方阿胶浆组、贞芪扶正颗粒组、复方皂矾丸组小鼠骨髓有核细胞数明显高于模型组(t=3.05～5.67,P<0.01)。结论:参芪颗粒、复方阿胶浆、贞芪扶正颗粒、复方皂矾丸对环磷酰胺所致小鼠血虚模型外周血血细胞状况和骨髓象均有改善作用;其中贞芪扶正颗粒和复方皂矾丸对白细胞计数、红细胞计数的升高作用为优;贞芪扶正颗粒和复方阿胶浆对血小板计数升高作用为优;贞芪扶正颗粒、复方阿胶浆和复方皂矾丸对血红蛋白升高作用为优;4种中成药对血虚模型血细胞比容的影响相近;贞芪扶正颗粒对血虚模型有核细胞的升高作用为优。

红毛鸡干燥体醇提物对血虚模型小鼠的补血作用研究

目的:研究红毛鸡干燥体醇提物对血虚模型小鼠的补血作用。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(复方阿胶浆,0.1 ml/10 g)和红毛鸡干燥体醇提物低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 g/kg),每组10只。除正常组外,其余各组小鼠于实验第2、5天sc乙酰苯肼溶液,第6~9天ip环磷酰胺溶液以复制血虚小鼠模型。从实验第1天起,正常组、模型组小鼠ig等体积蒸馏水,各给药组小鼠ig相应药物,每天1次,连续9 d。给药结束后,采用全自动血细胞分析仪测定各组小鼠外周血中白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)含量、血细胞比容(HCT),计算小鼠胸腺指数、脾脏指数和肝脏指数,采用相应试剂盒测定小鼠红细胞膜Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力以及肝脏总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与正常组比较,模型组小鼠WBC、RBC、HGB、HCT、胸腺指数,Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力,T-AOC和SOD活力均显著降低,脾脏指数和肝脏指数显著升高(P<0.01)。与模型组比较,红毛鸡干燥体醇提物各剂量组和阳性对照组小鼠WBC、RBC、HGB、HCT、胸腺指数,Na^+-K^+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力,T-AOC和SOD活力均显著升高;红毛鸡干燥体醇提物中、高剂量组及阳性对照组小鼠脾脏指数、肝脏指数均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:红毛鸡干燥体醇提物能改善血虚模型小鼠外周血象和脏器功能,具有一定的补血作用。

四物汤中不同组分对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤中不同组分对血虚小鼠模型造血功能的作用及其机理。方法:实验各组采用3.5Gy60Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型,造模后连续灌胃7d,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养。结果:四物汤的多糖部分及非多糖部分均有补血作用。60～80醇沉物、80醇沉上清部位正丁醇萃提物、80醇沉上清部位乙酸乙酯、正丁醇萃提后剩余物均能升高辐射损伤性血虚证小鼠外周血中白细胞、红细胞数;但20～40醇沉物、40～60醇沉物及60～80醇沉物的补血作用均不及20～80醇沉物。芍药苷具有补血作用。结论:四物汤通过多成分、多环节改善血虚证小鼠的造血功能。

血虚模型的建立及当归对其作用的研究

选取健康雏鸡80只,随机分为8组,第1组为正常对照组;第2、3、4组为正常低、中、高剂量用药组,分别灌服1∶1当归煎剂1、2、3mL/kg,连续给药7d;第5、6、7、8组以80mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,约1周左右便可造出典型的血虚模型,第6、7、8组在造模后同样以低、中、高剂量用药组,分别灌服1∶1当归煎剂1、2、3mL/kg,连续给药7d。各组鸡心脏采血进行红细胞总数计数及血红蛋白含量的测定。同时观察了当归改善血虚证的作用。结果表明,制备的血虚模型组(5组)反映了血虚证的主要特征,且红细胞数和血红蛋白含量较正常对照组(1组)显著降低(P<0.01),可作为血虚证模型之一。当归给药组(3、4组)与正常对照组(1组)能显著增加红细胞数量和血红蛋白含量(P<0.01)。血虚给药组(7、8组)与血虚组鸡(5组)能显著增加红细胞数量和血红蛋白含量(P<0.01),而且能够回升至正常水平。表明由环磷酰胺制造的鸡血虚模型可以作为血虚证模型之一,当归可以显著提高血虚鸡的红细胞和血红蛋白含量。

黄芪、当归及其配伍对正常和血虚模型大鼠全血比粘度和血浆比粘度的影响

大鼠用乙酰苯肼造成血虚模型后,全血比粘度(高切和低切)明显降低,而血浆比粘度无变化。给予药物后,黄芪、黄芪加当归(1:1)能使模型组的全血比粘度(高切和低切)升高;黄芪加当归(1:1)、阿魏酸、当归能升高模型组的血浆比粘度。所有给药组均能增加正常大鼠的全血比粘度,其中以黄芪、黄芪加当归、黄芪多糖的作用最显著;黄芪、黄芪加当归能减低血浆粘度,而阿魏酸则使血浆粘度升高。本实验为中医“气能生血”的理论提供了一定的药理学依据。

抑制消减杂交和辐射小鼠血虚模型筛选“四物汤”诱导表达的基因

应用抑制性消减杂交技术构建受辐射小鼠血虚模型在中药四物汤诱导前后消减cDNA文库,并从中克隆鉴定出与四物汤药效相关基因。从受辐射小鼠四物汤诱导前后骨髓细胞中提取mRNA并合成cDNA,分别作为tester和driver进行消减杂交及抑制性PCR,将PCR产物与载体连接构建cDNA文库,高效电转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取其中的克隆进行酶切、测序分析。成功构建了具有高消减效率的受辐射小鼠四物汤诱导前后的消减cDNA文库。文库挑选得到512个阳性克隆。随机挑取30个插入片段测序,生物信息学分析结果显示大部分与红细胞分化、骨髓组织修复、结构重建有密切关系,其中8个为新基因片段。应用抑制性消减杂交技术所构建的受辐射小鼠四物汤诱导前后cDNA消减文库为大批量筛选、克隆四物汤药效特异性相关基因奠定了基础。并从分子水平上发现四物汤对抑制凋亡、促进骨髓组织修复和结构重建、诱导红细胞分化的基因具有调节作用,可能和四物汤补血作用有关。

四物汤对血虚模型大鼠血流变和凝血功能的影响

目的:观察四物汤对血虚大鼠血流变和凝血功能的影响。方法:皮下注射乙酰苯肼制备血虚模型大鼠,观察四物汤对血常规、血流变、凝血时间、凝血酶原时间、纤维蛋白原含量、内皮素、降钙素基因相关肽以及脏器病理组织的影响。结果:四物汤能明显降低血虚模型大鼠的全血黏度、全血还原黏度、聚集指数以及电泳指数,缩短凝血时间,能有效调节内皮素/降钙素基因相关肽比值的平衡,改善组织器官的病理变化。结论:四物汤能改善血虚大鼠的贫血、瘀血和出血反应。

红景天熟地黄合煎液对血虚模型小鼠造血系统的影响

目的:探讨红景天熟地黄合煎液对由环磷酰胺引起的小鼠外周血白细胞下降及骨髓造血功能抑制的影响。方法:连续灌胃小鼠8 d,腹腔注射环磷酰胺(CY)致化学损伤血虚模型,观察对外周血象、骨髓有核细胞增殖的影响。结果:红景天熟地黄合煎液对血虚模型小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞下降均有拮抗作用,与模型组比较,有显著差异(P<0.01)。结论:红景天熟地黄合煎液对于血虚模型小鼠外周血象、骨髓有核细胞下降均有拮抗作用,对小鼠骨髓细胞具有促进增殖、分化作用。

健脾补肾汤对血虚模型大鼠T细胞分泌IL-2的影响

目的观察健脾补肾汤对正常和血虚大鼠脾条件培养液(SCM)中白细胞介素-2(IL-2)产生的影响。方法以ConA活化的小鼠脾淋巴细胞测定正常和血虚大鼠SCM和混合SCM中IL-2水平。结果健脾补肾汤能显著促进正常和血虚大鼠SCM和混合SCM中IL-2产生(P<0.05～0.01)。结论健脾补肾汤能显著促进淋巴细胞分泌IL-2,与其健脾气、益肾精的药效机理有关。

当归补血汤与四物汤对血虚模型小鼠补血作用比较研究

目的观察当归补血汤与四物汤对血虚模型小鼠补血作用以及两个方剂的差异性。方法ICR小鼠40只,随机分成正常组、模型组、当归补血汤组和四物汤组,每组10只,除正常组外,另三组复制失血性血虚小鼠模型,当归补血汤组和四物汤组同时分别灌胃当归补血汤和四物汤,连续给药7天,观察小鼠体征特点,测定各组小鼠给药前及造模给药后血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT)和白细胞(WBC)的值以及第7天出血凝血时间变化。结果给药7天,当归补血汤组小鼠食欲、行为和毛色等体征特点改善直至完全恢复,四物汤组小鼠体征特点改善不明显。与正常组比较,模型组小鼠各指标均降低[RBC:(6.65±0.87)×10^(12)/L比(9.90±0.95)×^(12)/L(P<0.01),HGB:(108.6±11.69)g/L比(134.4±13.55)g/L(P<0.01),HCT:(44.37±4.72)%比(52.01±4.98)%(P<0.01),PLT:(983±7.81)×109/L比(1218±10.27)×^(9)/L(P<0.01),WBC:(6.20±0.22)×^(9)/L比(7.80±0.05)×^(9)/L(P<0.01)];与模型组比较,当归补血汤组与四物汤组小鼠各指标均升高[当归补血汤组:RBC(9.31±0.89)×^(12)/L,HGB:(136.1±11.88)g/L,HCT(53.10±5.24)%,PLT(1005±10.43)×^(9)/L,WBC(8.26±0.31)×^(9)/L,P<0.05,P<0.01;四物汤组:RBC[(9.68±0.99)×^(12)/L,HGB(132.4±14.62)g/L,HCT(53.18±5.89)%,PLT[(1097±6.97)×^(9)/L,WBC(7.63±0.05)×^(9)/L,P<0.05,P<0.01]。结论当归补血汤和四物汤均有较好的补血作用,但两方对模型小鼠的血虚体征特点影响不同。

枸杞多糖对血虚模型小鼠血细胞的影响

目的观察枸杞多糖对放血和环磷酰胺致血虚模型小鼠血细胞的影响。方法采用腹腔注射环磷酰胺和放血方法复制小鼠血虚模型。将实验小鼠分为6组,每组15只。空白组于第2,4,6,8天腹腔注射生理盐水0.1 m L/10 g;其余各组于第2,4,6,8天腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg,第9天每鼠尾部放血0.6 m L/20 g,制作血虚模型;枸杞多糖大、中、小剂量组第1天按10 m L/(kg·d)灌胃枸杞多糖,剂量分别为26.4,13.2和6.6 g/kg,阿胶组第1天按10 m L/(kg·d)灌胃阿胶3 g/kg。实验过程中,每天称1次小鼠的体质量,观察小鼠的精神活动。用药第10天灌胃2 h后,处死小鼠,摘取眼球取血液,检测红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)及血小板(Plt)计数。结果枸杞多糖大、中剂量组的WBC、RBC、Hb和Plt值均明显高于模型组(P均<0.01)。结论枸杞多糖能够升高血虚模型小鼠的WBC、RBC、Hb和Plt的含量。

西澳菲斯特农场赤桉树蜂蜜对血虚证模型小鼠的影响

再生障碍性贫血(Aplastic amemia,AA),又称血虚证,为中医临床常见症候,是一种以造血功能衰竭为特征的疾病,其发病机制主要与骨髓造血干细胞损伤、造血微环境损伤以及免疫性造血抑制等机制相关。目前,治疗AA的主要药物如环孢素(cyclosporine A,CsA),存在使用后反应率较低且复发率较高的缺点。本研究以西澳菲斯特农场赤桉树蜂蜜为研究对象,通过建立小鼠血虚模型,探究服用不同剂量的TA10+FFJH以及TA30+FFJH对小鼠血虚症状的影响。

人参二醇组皂苷和三醇组皂苷对血虚模型大鼠的治疗作用

目的:比较人参二醇组皂苷(panaxadiol saponin,PDS)和人参三醇组皂苷(panaxatriol saponin,PTS)对环磷酰胺(cyoclphosphnalide,CP)和乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine,APH)诱导的血虚模型大鼠的治疗作用。方法:采用高效液相色谱仪检测皂苷组成;采用CP和APH建立血虚模型,将大鼠随机分为空白对照组、模型组、PDS组和PTS组,血液分析仪检测大鼠血常规指标;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中相关造血因子和炎症因子的含量;采用流式细胞术检测骨髓、胸腺和脾脏的细胞周期。结果:在皂苷分析中,PDS中主要包括Rb1、Rc、Rb2和Rd,原人参二醇型皂苷约占91.58%;PTS中主要包括Re、Rg1和Rf,原人参三醇型皂苷约占77.10%。与空白组相比,模型组大鼠血常规、造血因子和炎症因子水平均显著下降;骨髓、脾脏和胸腺细胞的G0/G1期比例显著降低,同时S期比例显著增加。与模型组相比,PDS组和PTS组以上指标均不同程度改善。结论:PDS和PTS均可改善CP和APH引起的大鼠血虚,且PDS的作用明显优于PTS。

采用化学药物联合致小鼠血虚模型评价四物汤及其配伍组成的作用特点

目的:研究四物汤组方对乙酰苯肼及环磷酰胺致血虚模型小鼠的影响,探讨其组方特点和作用机制。方法:用乙酰苯肼和环磷酰胺造小鼠血虚模型,分别采用全自动血细胞分析仪测定血虚小鼠外周血象,称重法测定肝脾指数,定磷法测定红细胞膜Na+-K+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,流式细胞仪检测骨髓细胞周期。结果:其中药味当归、白芍对模型小鼠的外周血象、肝脾指数、骨髓细胞周期均有较显著的恢复作用,熟地对红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的影响也较显著;含当归的药对对模型小鼠的肝脾指数、红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的影响则较显著;含白芍的药组和含当归的药组则分别对肝指数和红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性有较显著影响;各给药组均能促进G0/G1期阻滞的骨髓细胞向S期转化。结论:四物汤及其组方药对化学损伤血虚模型小鼠均有不同程度的保护作用,作用途径各有特点,可见当归和白芍对血虚症状的改善有重要的作用,是四物汤发挥理血调经功效的重要贡献药味。