血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌生长曲线及细胞内钙离子浓度的影响

目的：研究血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis P．g）生长曲线的影响。探讨血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌细胞内钙离子浓度的影响。方法：通过低温高速离心，超声破碎等方法提取血链素，使血链素作用P．g，于37℃厌氧培养：采用微量液体对倍稀释法测定血链素对P．g的最小抑菌浓度（MIC）。选用不同浓度的血链素作用P．g，分别于0、4、8、12、16、20、24、48h时测定各组细菌悬液在590nm波长处的A值，并绘制生长曲线。用Fluo-3／AM负载P．g细胞内钙离子，在激光共聚焦显微镜下观察Ca抖荧光强度变化。结果：血链素对P．g有显著抑制作用，其MIC为0．0625g／L。血链素作用后，P．g的生长曲线在8～16h发生显著改变，对数生长期被延迟了8h。血链素作用后，P．g细胞内钙离子浓度显著降低，与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论：血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌有明显的抑制作用，在本实验范围内，随着血链素浓度的升高其抑制作用逐渐增强。血链球菌细菌素可导致牙龈卟啉单胞菌细胞膜钙离子通透性增强。

血链球菌细菌素对念珠菌菌体细胞膜通透性及超微结构的影响

目的:探讨血链素的抑菌动力学特点;2)检测3种念珠菌菌体细胞内无机磷和大分子物质泄漏情况;3)观察血链素作用3种念珠菌后,菌体细胞超微结构的变化。方法:采用液体培养抑菌法观察血链素分别对C.a、C.t及C.g的抑菌动力学特点;分别检测血链素对C.a、C.t及C.g菌体细胞内磷外泄量及紫外吸收物质渗透率;利用扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)对血链素作用后的C.a、C.t及C.g菌体细胞超微结构进行观察。结果:血链素对C.a、C.t、C.g两两之间的抑菌动力学特点存在相似性,且血链素对3念珠菌的抑制作用均在24h达高峰。经血链素作用的C.a、C.t及C.g菌体细胞内无机磷及大分子物质发生泄漏。通过SEM观察:血链素对C.a、C.t及C.g作用24h时菌体细胞表面出现凹陷、缺损,菌体呈现不规则形态。通过TEM观察:血链素对C.a作用24h时,菌体细胞皱缩,细胞壁及细胞膜结构分界不清,细胞核消失,胞质不均匀;血链素对C.t作用24h时,菌体出现质壁分离,细胞质固缩,细胞壁及细胞膜连续性破坏或断裂,细胞核溶解;血链素对C.g作用24h时,菌体细胞膜及细胞壁呈现凹坑状缺损,胞核消失。结论:血链素对C.a、C.t及C.g具有相似的抑菌动力学特点。血链素可导致念珠菌菌体细胞膜通透性发生改变。血链素可导致念珠菌菌体细胞的超微结构发生改变。

血链球菌细菌素对白色念珠菌及热带念珠菌菌体形态影响的研究

目的:研究血链球菌细菌素对白色念珠菌(C.a)及热带念珠菌(C.t)的抑制作用及形态学影响。方法:通过低温高速离心,超声破碎等方法提取血链素,使血链素分别作用于单独及混合培养的C.a及C.t,于37℃下80r/min振荡培养。培养12h时,以平板菌落计数法测定不同浓度血链素的抑菌活性;每2h测1次各组菌悬液的A值,并绘制生长曲线,观察血链素对C.a及C.t生长曲线的影响。在血链素对C.a及C.t的作用过程中,利用光学显微镜及扫描电镜对菌体形态进行观察。结果:单独及混合培养的C.a及C.t在1g/L血链素作用后菌落数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血链素作用后,C.a及C.t的生长曲线在6～14h发生显著改变,对数生长期被推迟8h。血链素作用后,C.a及C.t的孢子及菌丝表面出现"盘状凹陷"形态。结论:血链素对单独及混合培养的C.a及C.t具有显著抑制作用。血链素使C.a及C.t的对数生长期推迟。血链素可导致念珠菌C.a及C.t的菌体形态发生改变。

血链球菌细菌素对牙龈卟啉单胞菌形貌及力学性质的影响

目的:研究血链球菌细菌素(简称血链素)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)形貌特征及力学性质的影响。方法:1)复苏、传代并鉴定血链球菌标准菌株ATCC10556、牙龈卟啉单胞菌标准菌株ATCC33277。2)将血链球菌低温高速离心、细胞破碎等方法提取血链素,使之作用于P.g,于37℃厌氧培养48h。3)采用原子力显微镜(AFM)的接触模式,观察血链素作用前后P.g菌体的形貌变化。4)利用AFM测定血链素作用前后P.g的力-距离曲线,并计算黏附力及杨氏模量。结果:1)通过AFM的观察:P.g在血链素的作用下,菌体直径缩小、平均粗糙度及平均峰高度增加(P<0.05)。2)通过AFM的观察:血链素作用后,P.g的黏附力、杨氏模量显著降低(P<0.001)。正常P.g的黏附力平均值为(0.70±0.10)nN、杨氏模量平均值为(5.54±0.16)MPa;经血链素作用后P.g的黏附力平均值为(0.50±0.10)nN、杨氏模量平均值为(3.97±0.64)MPa。结论:1)血链素可引起牙龈卟啉单胞菌形貌特征发生改变。2)血链素可导致牙龈卟啉单胞菌的黏附力及杨氏模量降低。

血链球菌细菌素对念珠菌细胞表面疏水性和细胞膜钙离子通透性的影响

目的:研究血链球菌细菌素对单独及混合培养的白色念珠菌(C.a)及热带念珠菌(C.t)细胞表面疏水性的影响。研究血链球菌细菌素对单独及混合培养的白色念珠菌(C.a)及热带念珠菌(C.t)细胞膜钙离子通透性的影响。方法:复苏并传代血链球菌标准株ATCC10556,通过低温高速离心,细胞破碎等方法提取血链素,使其作用于1×106 cfu/mL单独及混合培养的C.a及C.t,于37℃,80r/min振荡培养。1)采用二倍稀释法,测定血链素对C.a及C.t最小抑制浓度(MIC);2)运用微生物黏着碳氢化合物的方法[1],用紫外分光光度计测A值,计算C.a及C.t的疏水率;3)分别向单独及混合培养的C.a及C.t菌悬液中装载钙离子荧光探针(Fluo-3AM),利用激光共聚焦显微镜观察血链素作用后的C.a及C.t细胞内钙离子浓度的变化。结果:血链素对单独培养的C.a及C.t的MIC为0.25g/L;血链素对等量混合培养的C.a及C.t的MIC为0.5g/L。2)血链素作用后,单独及混合培养的C.a及C.t细胞表面疏水率均明显降低,与对照组相比具有显著差异(P<0.05)。在血链素的作用下,单独及混合培养的C.a及C.t的细胞内钙离子浓度均明显降低,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论:血链素可以导致白色念珠菌及热带念珠菌细胞表面疏水性降低。血链素可以导致白色念珠菌及热带念珠菌细胞膜钙离子通透性增强。

血链球菌细菌素对伴放线聚集杆菌和白色念珠菌生物膜作用的研究

目的:研究血链球菌细菌素分别对单独培养及混合培养的伴放线聚集杆菌(A.a)和白色念珠菌(C.a)生物膜的最小抑菌浓度(MIC)。利用激光共聚焦显微镜研究血链球菌细菌素对A.a及混合培养的A.a和C.a生物膜活性的影响。方法:通过低温高速离心,细胞破碎,盐析等方法提取血链球细菌素—血链素。采用二倍稀释法,测定血链素对单独和混合培养的A.a及C.a的MIC;血链素作用于A.a及混合培养的A.a和C.a后,利用激光共聚焦显微镜分别在2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h观察生物膜活性的变化。结果:血链素对单独培养的A.a的MIC为0.25 g/L;血链素对单独培养的C.a的MIC为0.125 g/L;血链素对混合培养的A.a及C.a的MIC为0.5 g/L。通过激光共聚焦显微镜观察,血链素对A.a生物膜活性有较强的抑制作用,最显著的时间在72 h;血链素对混合培养的A.a及C.a生物膜活性同样具有较强的抑制作用,最显著的时间在48 h。结论:血链素对A.a及混合培养的A.a及C.a生物膜活性均有抑制作用。