骨肉瘤组织卵巢肿瘤含域蛋白酶-2和胶质细胞系源性神经营养因子受体1表达与临床病理特征及预后的关系

目的:观察骨肉瘤组织中卵巢肿瘤含域蛋白酶-2(YOD1)和胶质细胞系源性神经营养因子受体1(GFRA1)表达情况,并探讨二者表达与病理特征及预后的关系。方法:收集2021年2月至2022年2月130例骨肉瘤患者骨肉瘤组织标本和瘤旁组织(距离肿瘤边缘大于5 cm)标本及临床资料,根据患者1年内死亡情况分为死亡组(40例)和生存组(90例)。采用免疫组织化学法检测组织YOD1和GFRA1表达水平,多因素Cox回归分析骨肉瘤患者预后的影响因素。结果:与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中YOD1阳性率和GFRA1阳性率显著较高,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤最大径≥3 cm、临床分期为Ⅱb~Ⅲ期、有软组织浸润、有远处转移、低分化的骨肉瘤患者YOD1阳性率和GFRA1阳性率高于肿瘤最大径<3 cm、临床分期为Ⅰ~Ⅱa期、无软组织浸润、无远处转移、中/高分化的骨肉瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。与生存组相比,死亡组中YOD1阳性率和GFRA1阳性率显著较高,差异有统计学意义(P<0.05)。YOD1、GFRA1及软组织浸润是骨肉瘤患者1年内死亡的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:YOD1和GFRA1在骨肉瘤组织中高表达,且与肿瘤最大径、临床分期、软组织浸润、远处转移、分化程度及预后有关。

巴戟天含药血清对高糖诱导的血管内皮细胞FOXP2/AGGF1信号通路及增殖、迁移的影响

目的探索巴戟天含药血清对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并初步研究其作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),并建立高糖损伤模型,随机分为空白对照组、对照组、巴戟天低、中、高剂量组;噻唑蓝(MTT)法检测各组HUVEC增殖变化情况;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)法检测各组HUVEC凋亡情况;划痕实验和侵袭实验(Transwell)分别评估各组HUVEC的迁移、侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组HUVEC叉头框蛋白(FOX)P2及G补缀FHA域血管生成因子(AGGF)1 mRNA表达情况;Western印迹分析检测各组HUVEC FOXP2及AGGF1蛋白表达情况。结果30 mmol/L D-葡萄糖浓度为诱导HUVEC损伤的最佳高糖浓度值;与空白对照组和对照组相比,巴戟天低、中、高剂量组HUVEC存活率、划痕愈合率、侵袭数量、FOXP2、AGGF1 mRNA及蛋白表达水平依次明显升高,细胞凋亡率依次明显降低(P<0.05),呈剂量依赖性。结论巴戟天含药血清能够促进人脐静脉血管内皮细胞的增殖、迁移并抑制凋亡,可能与激活FOXP2/AGGF1信号通路相关。

APPL1与胰岛素抵抗及糖尿病肾病关系的研究进展

衔接因子蛋白含p H域蛋白1(APPL1)可作为细胞内衔接蛋白介导胰岛素信号通路、脂联素信号通路等多种信号转导,并且还可参与炎症反应、胰岛素敏感性、胰岛素抵抗、糖尿病肾病(DKD)相关的血流动力学、肾脏纤维化病变等,所以APPL1可能参与了DKD的病理生理反应。另外,胰岛素抵抗与DKD密切相关,高胰岛素血症可通过直接损伤肾脏细胞,可导致体内多种炎性因子的增加。因此,阐明APPL1与胰岛素抵抗及DKD的关系,将为DKD的治疗提供新思路。

脂联素通过A20/NLRP3/caspase-1途径抑制脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应

目的探讨脂联素(adiponectin,APN)抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应的机制。方法以未干预组作为对照,外源性APN干预1 h后LPS刺激小胶质细胞复制小胶质细胞炎症模型,将细胞分为对照组、APN组、LPS组和LPS+APN组。分别采用q-PCR和ELISA法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA的表达和分泌水平;Western blotting检测各组细胞核因子-κB调节蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein 3,TNFAIP3/A20)、含NLR家族PYRIN域蛋白3(NOD-,LRR-and pyrin domain-containing 3,NLRP3)和胱冬肽酶-1(caspase-1)的表达。采用基因沉默技术敲除小胶质细胞A20后,APN干预,再次通过Western blotting检测各组细胞A20、NLRP3和caspase-1的表达。结果APN干预后,LPS+APN组细胞TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平(P=0.018;P=0.009)和分泌量(P=0.0001;P=0.0001)较LPS组明显降低,并且A20蛋白表达明显增加、NLRP3和caspase-1蛋白表达降低(P=0.001;P=0.003;P=0.006)。敲除小胶质细胞A20可以逆转APN对NLRP3和caspase-1的下调作用(P=0.012;P=0.024)。结论APN对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有抑制作用,其作用可能是通过A20抑制NLRP3和caspase-1表达来实现的。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

敲低B7-H4/VTCN1通过抑制JNK磷酸化促进Huh7肝癌细胞凋亡和自噬

目的研究B7同源蛋白4/含V-SET域T细胞激活抑制因子1(B7-H4/VTCN1)对肝癌细胞凋亡和自噬的影响及其可能的信号通路。方法采用小干扰RNA技术敲低Huh7细胞B7-H4,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞白血病/淋巴细胞瘤分子2(Bcl2)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化的JNK(p-JNK)蛋白水平;单丹磺酰尸胺(MDC)法检测自噬体。结果敲低Huh7细胞B7-H4后,肝癌细胞凋亡和自噬增加,细胞增殖降低;c-caspase-3、LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl2、P62蛋白降低;JNK的磷酸化被抑制,可见自噬体形成。结论敲低B7-H4促进Huh7细胞凋亡和自噬,可能与抑制JNK的磷酸化有关。

胃癌患者病灶组织中UHRF-1、KIF2A及HIF-1α的表达与临床病理特征的关系

目的探讨胃癌患者病灶组织中泛素样含PHD和环指域蛋白-1(UHRF-1)、驱动蛋白超家族成员2A(KIF2A)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2010年10月至2017年10月在张家港市中医医院就诊的60例胃癌患者作为研究对象,采集患者病灶组织和癌旁组织,采用RT-PCR法和免疫组织化学法检测UHRF-1、KIF2A及HIF-1α的mRNA和蛋白表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果病灶组织中UHRF-1、KIF2A及HIF-1α的mRNA表达量均显著高于癌旁组织(P<0.05)。病灶组织中UHRF-1、KIF2A及HIF-1α蛋白阳性率分别为85.0%、65.0%和73.3%,均显著高于癌旁组织的45.0%、10.0%和20.0%(P<0.05)。肿瘤大小≥3cm,中低分化腺癌,TNMⅢ、Ⅳ期,有淋巴转移的病灶组织中UHRF-1、KIF2A及HIF-1α蛋白阳性率较高,差异具有统计学意义(P <0.05)。UHRF-1、KIF2A及HIF-1α蛋白阳性率与性别、年龄和肿瘤浸润程度无关(P>0.05)。结论 UHRF-1、KIF2A及HIF-1α在胃癌患者病灶组织中的表达显著增加,且与患者临床病理特征密切相关。

HACE1在恶性肿瘤中的研究进展

含HECT域和瞄蛋白重复序列的E3泛素蛋白连接酶1(HACE1)蛋白属于HECT家族的重要成员之一,其不仅具有保护心脏、抗氧化应激及调节细胞动力学等生物学功能,而且在多种恶性肿瘤(乳腺癌、肝癌、胃癌等)中发挥肿瘤抑制因子的作用。其作用机制是通过靶向活化形式的Rac家族进行蛋白酶体降解及泛素化视神经蛋白,激活细胞自噬,进而发挥抗肿瘤作用。HACE1与多种肿瘤的发生、进展、侵袭及预后密切相关,其有望成为恶性肿瘤诊断和预后的预测标志物及肿瘤治疗的新靶点。

溃疡性结肠炎小鼠血清miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达水平及其作用的研究

目的·探究miR-23a-3p和miR-27a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中的表达及其可能的作用机制。方法·将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组小鼠采用含有5%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)的饮用水诱导7 d,诱导期间观察小鼠一般情况、粪便形态以及隐血状况;7 d后,采集小鼠全血和结肠组织,测量结肠长度并称取湿重。qRT-PCR检测血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达,Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ,coactivator 1α,PPARGC1A)、PH域富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase,PHLPP2)、B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)、细胞色素C(cytochrome c,CYT-C)和胱天蛋白酶3剪切体(cleaved cysteine-containing aspartate-specific proteases,cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果·DSS诱导后,模型组小鼠出现精神萎靡、体质量减轻、腹泻、肉眼血便等症状,结肠长度缩短、湿重减轻(均P<0.05),小鼠UC模型构建成功。与对照组比较,模型组小鼠血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p表达明显下调(均P<0.05),结肠组织中PPARGC1A、PHLPP2、BAX、CYT-C和cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(均P<0.05),而BCL-2表达显著降低(P<0.05)。结论·miR-23a-3p和miR-27a-3p在UC小鼠血清中呈低表达水平,可能通过介导结肠组织中PPARGC1A和PHLPP2表达上调,触发线粒体途径诱导细胞凋亡,从而参与了UC的发生/发展。

口腔鳞状细胞癌患者预后相关基因标志物的生物信息学分析

目的通过生物信息分析方法筛选口腔鳞状细胞癌与癌旁组织之间的差异表达基因,初步确定潜在生物标志物。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中下载口腔鳞状细胞癌相关芯片数据集GSE23558、GSE37991、GSE30784,利用GEO在线分析工具筛选差异表达基因,并对其进行基因本体、京都基因与基因组百科全书分析。利用STRING在线数据库,构建差异基因蛋白互作(protein⁃protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape筛选关键基因。进而使用Kaplan Meier在线软件对差异表达基因进行预后分析,并使用GEPIA(http://gepia.cancer⁃pku.cn/)验证其表达情况。结果共筛选出212个差异表达基因,进一步分析发现16个核心基因,其中与预后相关的核心基因包括:极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)、极光激酶B(aurora kinase B,AURKB)、细胞凋亡抑制因子5(baculoviral IAP repeat containing 5,BIRC5)、细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)、E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)、泛素样含PHD和环指域蛋白1(ubiquitin⁃like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1),这些关键基因与癌旁组织相比在口腔鳞状细胞癌组织呈高表达并且患者生存时间均较短,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论AURKA、AURKB、BIRC5、CDC6、E2F7和UHRF1可作为口腔鳞状细胞癌患者预后潜在的标志物。

TLR2和TIRAP基因多态性与隐性感染性结核的相关性研究

目的 探讨Toll样受体(toll-like receptors, TLR)2和含Toll白细胞介素-1受体域衔接蛋白(toll interleukin-1 receptor domain contain adapter protein, TIRAP)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与隐性感染性结核的相关性。方法 研究纳入健康正常人(对照组)316名和隐性感染性结核患者(病例组)322例,采用SNaPshot微测序技术分析TLR2基因2个位点(rs5743708、rs3804099)和TIRAP基因4个位点(rs595209、rs7932766、rs8177374和rs8177400)的多态性,通过比较基因型和等位基因频率的差异,分析TLR2和TIRAP基因位点多态性与隐性感染性结核的相关性。结果 TLR2和TIRAP基因的6个位点的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。病例组rs5743708、rs3804099和rs8177374的基因型及等位基因与对照组相比,差异均无统计学意义。rs595209位点的等位基因T相对于G发病风险降低21.5%(OR=0.785,95%CI:0.621~0.992),rs7932766位点的等位基因T相对于C发病风险降低78.7%(OR=0.213,95%CI:0.071~0.633),且差异均有统计学意义(χ^(2)=4.102、9.336,P<0.05)。rs595209位点的基因型TT相对于GG发病风险降低43.2%(OR=0.568,95%CI:0.348~0.928),相对于(GT+GG)发病风险降低42.0%(OR=0.580,95%CI:0.363~0.925),且差异均有统计学意义(χ^(2)=5.178、5.321,P<0.05);rs7932766位点的基因型CT相对于CC发病风险降低79.2%(OR=0.208,95%CI:0.070~0.622),且差异有统计学意义(χ^(2)=9.503,P<0.05)。结论 TIRAP基因的rs595209位点的基因型TT及等位基因T、rs7932766位点的基因型CT及等位基因T均为隐性感染性结核的保护性因素。

MCC950对急性胰腺炎大鼠的保护作用及其分子机制

探讨了含NLR家族PYRIN域蛋白3(NACHT,LRR,and PYD domains-containing protein 3,NLRP3)抑制剂MCC950对急性胰腺炎大鼠的保护作用及其分子机制。将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组和MCC950组,20只/组。模型组和MCC950组经手术注射5%牛黄胆酸钠制备急性胰腺炎模型,对照组给予假手术并注射生理盐水。建模后对照组和模型组一次性经腹腔注射生理盐水,MCC950组一次性经腹腔注射MCC95030 mg/kg,4 d后安乐处死大鼠,记录大鼠的生存情况及行为;采用自动生化仪检测血清淀粉酶活性;采用酶联免疫法检测各组血清中白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素18(Interleukin 18,IL-18)等炎症因子水平;采用HE染色观察各组胰腺组织病理学变化;采用TUNEL染色法分析各组胰腺细胞凋亡水平;采用Western blot分析各组胰腺组织NLRP3效应分子胱冬肽酶-1前体(pro-Caspase-1)、胱冬肽酶-1(Caspase-1)表达。对照组未见死亡,状态良好;模型组死亡3只,剩余大鼠少动、精神萎靡;MCC950组未见死亡,大鼠少动、精神萎靡等症状明显改善。与对照组比较,模型组血清淀粉酶活性、IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-18等炎症因子、病理学评分、凋亡水平及Caspase-1蛋白显著增加(均P<0.05),胰腺组织中pro-Caspase-1蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,MCC950组血清淀粉酶活性、IL-1β、IL-6、TNF-a和IL-18等炎症因子、病理学评分、凋亡水平及Caspase-1蛋白显著降低(均P<0.05),胰腺组织中pro-Caspase-1蛋白水平显著增高(P<0.05)。对照组胰腺组织纹理清晰,胰腺腺泡清晰,小叶结构完整,无炎症浸润、坏死和出血等;模型组胰腺组织可见明显水肿、出血和坏死,小叶间隙明显增加,大量炎症细胞浸润;MCC950组胰腺水肿、出血、坏死和炎症浸润明显缓解。MCC950可通过抑制NLRP3炎症小体活性下调炎症因子水平,缓解急性胰腺炎。