骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力。整合素α_vβ_3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI_3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI_3K/Akt信号转导通路。Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达。OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用。结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI_3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力。

SOCS3基因在人类疾病发生中的作用

细胞因子信号通路抑制因子3(SOCS3)是多种细胞因子(如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子等)信号通路的负反馈调节因子。SOCS3主要通过酪氨酸激酶信号转导与转录活化因子(JAK-STAT)通路执行其在信号转导过程中的抑制作用。近年研究发现,SOCS3与糖尿病、多囊卵巢综合征、肿瘤、炎症和过敏反应等多种疾病有关。SOCS3或许可以作为某些疾病诊断及评估预后的分子指标,以及作为特定疾病的靶基因。

接头蛋白Gab1的结构与功能

Gab1作为一种分布广泛的接头蛋白,几乎能连接所有类型的受体(如酪氨酸激酶受体、G-蛋白偶联受体、细胞因子与抗原受体等)与含SH2区下级信号蛋白之间的信号转导,介导多种生长因子,胰岛素、非T细胞依赖性抗原2等信号通道,促进细胞生长和分化、控制凋亡,调节免疫。最新研究表明Gab1与糖尿病、某些心血管疾病的发生、发展有关。

P62蛋白在常见神经变性病中的表达观察

目的评价P62蛋白在临床常见神经变性病特征性病理改变中的表达变化,探讨其病理诊断意义。方法收集1994年6月至2017年10月经临床和病理明确诊断的神经变性病脑组织标本共11例,包括阿尔茨海默病5例(其中2例合并嗜银颗粒病)、帕金森病3例、进行性核上性麻痹2例、多系统萎缩1例;另以3例无神经变性病的脑组织标本为对照。分别进行HE、卢卡斯快蓝及Gallyas-Braak银染,以及β-淀粉样蛋白、AT8、α-突触核蛋白和P62抗体免疫组织化学染色,显微镜下观察不同神经变性病的特征性病理改变和P62蛋白表达变化。结果阿尔茨海默病神经原纤维缠结、帕金森病路易小体和路易轴索、进行性核上性麻痹丛状星形细胞、嗜银颗粒病的嗜银颗粒,以及多系统萎缩少突胶质细胞内包涵体均表达P62蛋白,且形态特征与其特异性抗体染色结果相一致;另外,阿尔茨海默病神经炎性斑仅少量表达P62蛋白,而弥散斑表达阴性;淀粉样小体P62蛋白表达亦呈阳性;正常对照脑组织不表达P62蛋白。结论P62蛋白在阿尔茨海默病、帕金森病、进行性核上性麻痹、多系统萎缩等疾病特征性病理改变和淀粉样小体中均表达阳性,且形态与各种神经变性病组织学及相应特异性蛋白表达结果一致,推荐P62抗体作为神经变性病的辅助病理诊断。

骨桥蛋白与基质金属蛋白酶2在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,其死亡率在妇科三大恶性肿瘤中居首位。具有起病隐匿、发展迅速及化疗耐药等特点,多数患者预后不良。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)是新型肿瘤标志物,近年发现OPN和MMP-2在卵巢癌组织中高表达。OPN是一种分泌型磷酸化糖蛋白,可通过核因子κB(NF-κB)等途径抑制卵巢癌细胞凋亡,激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径及改变细胞骨架,并且可通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)途径诱导卵巢癌细胞生长和增殖,促进细胞黏附及转移。MMP-2是一种Ⅳ型胶原酶,主要通过降解细胞外基质蛋白并参与细胞信号转导,与卵巢癌发生、发展、侵袭和转移密切相关。另外,OPN可通过多种信号途径激活MMP-2表达,加快卵巢癌细胞周围细胞外基质降解,二者联合检测能够提高卵巢癌诊断的敏感度和特异度,且对于评估卵巢癌的治疗预后方面也有应用价值。本文综述OPN与MMP-2在卵巢癌的转移、侵袭等生物学行为中的作用及其分子机制。

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在肝胆恶性肿瘤发生发展中的作用

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路参与调节细胞代谢、生长、增殖、血管生成等多种重要生物过程,其高度激活的状态与多种恶性肿瘤的发生、发展相关。对PI3K/Akt/m TOR信号通路及m TOR蛋白进行了简单的介绍,并阐述了其在肝细胞癌、胆管细胞癌、胆管癌及胆囊癌发生发展中的作用机制,进一步简述了m TOR抑制剂在肝胆恶性肿瘤治疗中的作用。认为PI3K/Akt/m TOR信号通路为晚期肝胆恶性肿瘤提供了新的治疗靶点,新型m TOR抑制剂的不断研发将为晚期肝胆恶性肿瘤患者带来新的希望。

Abl相互作用蛋白3的生物学功能及与疾病关系的研究进展

Abl相互作用蛋白3(ABI3)属于ABI蛋白家族,参与WAVE复合体的组成,但不同于家族其他成员,ABI3是一种磷蛋白,磷酸化后的ABI3失去活性,因而不促进c-Abl介导的WAVE磷酸化,而是与F-肌动蛋白结合参与细胞骨架重组。既往研究表明ABI3参与多种肿瘤的发生发展,具有抑制肿瘤细胞迁移、增殖以及促进细胞凋亡的生物学作用。最近又发现ABI3与阿尔茨海默病及Nasu-Hakola病的发病机制相关,甚至还参与了衰老的相关过程。ABI3作为治疗多种临床疾病潜在的新靶点,具有广阔的研究前景。

干扰素基因刺激蛋白信号通路与HBV感染的相互作用

干扰素基因刺激蛋白(STING)是新发现的天然免疫系统中的重要接头蛋白,在细胞质DNA介导天然免疫反应中发挥重要作用。胞内双链DNA识别受体均通过STING介导产生Ⅰ型干扰素以及其他细胞因子。天然免疫和抗HBV特异免疫应答不足是HBV慢性感染的关键原因。介绍了STING的发现及其结构研究的最新进展,并简要阐述了STING信号通路的活化机制。总结了国内外研究团队在STING信号通路与HBV相互作用方面的研究进展,并指出了其在临床治疗方面的潜在价值。

稳定表达Keap1的H460-N5细胞株的建立及增敏抗肿瘤药物作用的研究

目的:建立野生型Keap1过表达的H460细胞株降表达Nrf2,检测Nrf2-ARE信号通路对肿瘤细胞耐药性的影响。方法:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后经过长期筛选得到稳定表达Keap1蛋白质的细胞株,通过Western blotting和荧光定量PCR的方法进行检测;并通过多次继代培养,细胞株H460-N5稳定表达mKeap1,Nrf2及其调控基因均显著降表达;用MTS法检测抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对细胞增殖抑制率。结果:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后筛选建立Nrf2降表达的稳定细胞株H460-N5。MTS数据显示,与对照组相比,抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对H460-N5细胞的抗增殖作用更显著。当奥沙利铂和依托泊苷分别在93μmol/L和100μmol/L浓度作用于对照组细胞株H460-N0时,药物作用接近半数抑制率(IC50);而在H460-N5细胞株中,两种抗癌药物的IC50分别为42μmol/L和30μmol/L。阿霉素对H460-N0细胞的IC50>3 mg/L,而对H460-N5细胞的IC50约为2 mg/L。结论:Keap1过表达的H460-N5细胞Nrf2及调控基因显著降低并增敏抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用。

Livin与肿瘤研究新进展

Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,具有凋亡抑制蛋白家族的特征性结构——BIR结构域。这一结构域介导了Livin与Caspase-3、7、9的直接结合,从而阻断caspase凋亡作用的发挥,达到抑制细胞凋亡的作用。Livin基因定位于染色体20q13,编码Livinα和β两种蛋白。亚细胞定位显示,在细胞质和细胞核均有表达,羧基末端的RING结构域介导了Livin的亚细胞定位。目前的研究表明,Livin可表达于消化系统的胃癌、泌尿系统的膀胱癌、呼吸系统肺癌和血液系统的淋巴细胞性白血病等多个系统的肿瘤中,也存在于乳腺癌及黑色素瘤中,在肿瘤的细胞系中也有较广泛的表达,但在各系统的正常组织中却很少表达。研究还表明,在药物诱导凋亡时,Livin的表达有明显升高。用RNA干扰技术对Livin基因的表达进行干预后,细胞对诱导凋亡药物和放射线的敏感性增加。根据Livin设计的抗原肽可以特异性诱导肺癌患者杀伤性T细胞的活化。目前的研究已表明,Livin在肿瘤的发展和耐药中都有重要作用。Livin特异表达于肿瘤组织的特性有可能为肿瘤的早期诊断、基因治疗和细胞治疗提供新靶点。

黄芪注射液调节一氧化氮合酶抗再灌注损伤作用

目的:研究黄芪注射液抗培养乳鼠心肌细胞再灌注损伤的作用与一氧化氮合酶(NOS)表达的关系。方法:采用培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型,实验分为5组:A组为正常对照组,B组、C组、D组、E组均为缺氧-复氧组。各组培养液组成:B组缺氧液,C组缺氧液加黄芪,D组缺氧液加NOS抑制剂L-NAME,E组缺氧液加黄芪加L-NAME。缺氧4 h,复氧2 h。比较缺氧-复氧后培养液中心肌酶含量,并进行心肌细胞NOS蛋白表达检测。结果:复氧2 h后,B组、C组、D组、E组与A组比较心肌酶谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)均有升高(P<0.05)。C组与B组比较GOT升高减轻(P<0.05),但无统计学意义。黄芪增强缺氧-复氧引起的心肌细胞NOS表达增加,L-NAME对黄芪引起的NOS表达增加有一定抑制作用。结论:黄芪能够减轻缺血再灌注损伤,其机制涉及了NOS信号转导途径。

PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在肝细胞癌发生发展中的作用

PI3K/Akt/mTOR信号转导通路可以通过调控基因表达,在肝细胞癌肿瘤细胞生成、增殖、转移和凋亡等过程中发挥重要作用。简述了PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成及功能,对PI3K/Akt/mTOR通路在肝细胞癌进程中的作用机制及相关抑制剂的研究进展进行了综述,揭示阻断PI3K/Akt/mTOR通路可以成为肝细胞癌治疗新的靶点方向。

瘦素信号传导机制的研究进展

脂肪分泌的瘦素通过细胞膜瘦素受体发挥作用，目前为止发现的受体有6种亚型。瘦素及其受体在多种肿瘤组织中表达增高。瘦素结合不同的受体亚型激活包括酪蛋白激酶／信号传导及转录激活因子（janus kinase／signal transducers and activators of transcription，JAK／STAT）、

E-cadherin和C-erbB2在非小细胞肺癌中的表达及其临床病理意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)中E-cadherin和C-erbB2蛋白的表达状况,分析其临床病理意义。方法:用免疫组化方法对82例非小细胞肺癌标本和20例正常肺组织进行免疫组化检测。结果:正常肺组织E-cadherin表达;4例C-erbB2+表达,无C-erbB2过表达。NSCLC中E-cadherin表达率为(49%),低分化组NSCLC E-cadherin表达率为30%,明显低于中高分化组表达率60%(P=0.010);中晚期(+)NSCLC表达率为31%,明显低于早期(+)NSCLC表达率62%(P=0.007);淋巴结转移组NSCLC表达率为39%,低于无淋巴结转移组表达率65%(0.026),均有统计学意义。肺腺癌C-erbB2表达率为45%,高于鳞癌过表达率17%(P=0.017);中晚期NSCLC(+)过表达率为51%,高于早期(+)过表达率21%(P=0.004);淋巴转移组过表达率为41%,高于无淋巴转移组过表达率23%(P=0.028)。E-cadherin的低表达和C-erbB2过表达无相关性。结论:E-cadherin低表达和C-erbB2过表达在肺癌的发生、发展和淋巴结转移中可能扮演重要的角色,联合检测对判断NSCLC生物学行为有病理临床意义。

微小RNA-9-5p调控脂多糖诱导小鼠树突状细胞免疫功能的机制研究

目的研究微小RNA-9-5p(miR-9-5p)对脂多糖炎性损伤小鼠树突状细胞(DCs)免疫功能的影响,并探讨其机制。方法该研究于2019年1—9月完成。小鼠树突状细胞DC2.4购于美国模式培养物中心。运用脂多糖(LPS)处理DC2.4细胞,建立炎性树突状细胞损伤模型;将miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)、miR-9-5p模拟物(mimics)、miRNA抑制物阴性对照(antimiR-NC)、miR-9-5p抑制剂(anti-miR-9-5p)、小干扰RNA无序对照(si-NC)组、信号转导和转录激活因子6(STAT6)的小干扰RNA(si-STAT6)、miR-9-5p mimics+空载体质粒(pcDNA)、miR-9-5p mimics+STAT6过表达质粒(pcDNA-STAT6)均用脂质体法转染至LPS诱导的DC2.4细胞;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-9-5p、STAT6、白细胞分化抗原80(CD80)、白细胞分化抗原86(CD86)、白细胞介素-12(IL-12)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中STAT6的蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与正常DC2.4相比,脂多糖炎性损伤的DC2.4细胞中miR-9-5p表达(0.16±0.01)比(1.00±0.08)降低,STAT6表达(3.02±0.26)比(1.00±0.07)升高(P<0.05);过表达miR-9-5p可降低LPS诱导的DC2.4细胞中CD80(0.31±0.03)比(1.00±0.08)、CD86(0.29±0.02)比(1.01±0.06)、IL-12(0.46±0.04)比(1.00±0.05)的表达;敲减STAT6可降低LPS诱导的DC2.4细胞中CD80(0.42±0.04)比(1.00±0.08)、CD86(0.34±0.03)比(0.99±0.07)、IL-12(0.29±0.02)比(1.01±0.08)的表达;miR-9-5p明显的抑制野生型STAT6细胞的荧光活性,并负向调控STAT6的表达水平;重要的是,过表达STAT6可逆转过表达miR-9-5p对LPS诱导的DC2.4细胞中CD80[(1.68±0.13)比(1.00±0.06)]、CD86[(1.79±0.15)比(0.99±0.08)]、IL-12[(1.82±0.18)比(0.98±0.09)]的抑制作用。结论miR-9-5p抑制LPS诱导的DC2.4细胞的免疫功能,其机制可能与靶向STAT6有关,将可为炎性疾病的治疗提供新靶点。

1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达

目的观察1型糖尿病大鼠肾脏衔接蛋白p66Shc的表达及活性氧的水平。方法以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，分为糖尿病组和正常对照组。采用双缩脲法检测24h尿蛋白；免疫组化、Westem blot方法检测肾脏p66Shc表达；二氢乙啶染色检测肾组织活性氧。结果与对照组相比，糖尿病大鼠24h尿蛋白明显增高（P〈0．01），肾脏特别是肾小管p66Shc的表达显著增高（P〈0．05），活性氧含量明显增高。结论糖尿病大鼠肾脏p66Shc表达增强，活性氧含量增加，p66Shc可能在糖尿病肾病肾组织氧化损伤的发生发展过程中扮演重要角色。

红景天苷药理作用的分子机制研究进展

红景天是生长于北半球海拔1 800-2 500 m高寒、干燥、缺氧、昼夜温差大、强紫外线照射、无污染环境中生命力旺盛的珍稀野生植物,是我国传统藏医临床中的常用药和国际公认植物适应原之一。明代李时珍《本草纲目》记载＂红景天,本经上品,祛邪恶气,补诸不足,已知补益药中所罕见＂。《现代实用本草》记载红景天的主要药理作用有中枢兴奋、抗疲劳、强心、抗炎、抗过氧化、抗微波辐射、降血糖等。

宫颈癌组织STAT3和MMP-2表达及意义

目的探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）与基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在宫颈癌组织表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法分别检测16例正常组织、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）、50例宫颈癌组织中STAT3与MMP-2的表达水平。结果正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中STAT3、MMP-2表达水平逐渐增高,各组间差异均有统计学意义（χ2=6.417~27.097,P〈0.05）。STAT3异常表达与宫颈癌的病理分级和临床分期及淋巴结转移有关（χ2=4.778~13.651,P〈0.05）;MMP-2的异常表达与临床分期及淋巴结转移有关（χ2=9.039、5.003,P〈0.05）,而与病理分级无关;两者与病人年龄、肿瘤大小及肿瘤类型均无相关性。宫颈癌组织STAT3与MMP-2的表达呈正相关（r=0.398,P〈0.05）。结论宫颈癌组织STAT3与MMP-2表达密切相关,两者表达水平可能与宫颈癌浸润转移有关,STAT3可能通过调控其下游靶基因MMP-2的表达影响宫颈癌的浸润转移。

环境理化因素对表皮生长因子受体及其信号通路的影响

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)为典型的受体酪氨酸激酶,能够与多种配体结合,在细胞增殖、存活、黏附、分化和凋亡等生命活动中发挥重要作用。EGFR及其介导的信号通路的异常与肿瘤的发生发展密切相关。很多环境理化因素可通过影响EGFR磷酸化、或其结构功能和细胞分布、或其配体和其它相关分子表达,干预EGFR信号转导过程、影响靶基因的表达从而最终影响细胞生命活动。文中就此做一简要综述,以期更好地理解环境理化因素引起的细胞应激以及致突变致癌的表遗传分子机理。

高强度聚焦超声通过TRIF介导的ERK通路增强乳腺癌的顺铂化疗敏感性

目的探究高强度聚焦超声(HIFU)通过β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)介导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路增强乳腺癌顺铂(DDP)化疗敏感性的作用机制。方法依次增加DDP浓度间歇作用的方法诱导乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)/DDP耐药细胞;将MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP细胞分为control组、HIFU组、HIFU+二甲基亚砜(DMSO)组、HIFU+漆黄素(fisetin)组。CCK-8检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞TRIF蛋白、耐药相关蛋白及ERK通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤生长情况;免疫组化染色法检测肿瘤组织Ki-67的表达。结果与亲本MDA-MB-231及MCF-7细胞相比,在相同浓度DDP处理下MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞活力更高,且半数抑制浓度(IC50)显著增加(P<0.05),成功建立了稳定的DPP耐药细胞系;与control组相比,HIFU组MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、TRIF、p-糖蛋白(p-gp)、多药耐药基因1(MDR1)、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著增加(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、Bcl-2、TRIF、pgp、MDR1、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05)。与control组相比,HIFU组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著降低(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著增加(P<0.05)。结论HIFU通过抑制TRIF表达来抑制其介导的ERK通路,从而增强乳腺癌DDP化疗敏感性。