沙眼衣原体热休克蛋白60抗体的测定

为了了解泌尿生殖道沙眼衣原体感染者对沙眼衣原体热休克蛋白６０（ＨＳＰ６０）的血清学反应，应用细胞培养、免疫印迹试验和微量免疫荧光试验（ＭＩＦ）对１７５例非淋菌性尿道炎（宫颈炎）（ＮＧＵ）、７３例盆腔炎（ＰＩＤ）、５２例不育症及３６例健康对照者进行检查。３组患者的沙眼衣原体感染率有显著差异（Ｐ＜０．０１）。１７．８％的ＰＩＤ、１３．５％的不育症和１．７％的ＮＧＵ患者出现ＨＳＰ６０抗体，而健康对照组则未检出此抗体（Ｐ＜０．０１）。ＭＩＦ高滴度者（≥１∶１６０）出现ＨＳＰ６０抗体的机率（３１．３％）明显高于低滴度者（＜１∶１６０）（２．８％）（Ｐ＜０．０１）。提示在有并发症的患者中ＨＳＰ６０抗体常见。检测ＨＳＰ６０抗体对预测沙眼衣原体感染慢性发展及并发症的发生有一定意义。

沙眼衣原体热休克蛋白60研究进展

近年沙眼衣原体的研究取得许多进展,特别是沙眼衣原体热休克蛋白60的基因克隆、表达及序列分析,热休克蛋白组成及其高度保守性等研究已逐步深入。此研究有助于探讨沙眼衣原体慢性疾病的发病机理。

沙眼衣原体热休克蛋白60的B细胞表位预测及分析

目的:分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)的二级结构并预测其B细胞优势表位,进一步分析其在沙眼衣原体相关自身免疫性疾病发病中的意义。方法:以CT标准株(E/UW-5/Cx)HSP60的完整氨基酸序列为基础,分别采用SOPMA、GOR、nnPredict和HNN四种方法预测CHSP60的二级结构,并结合其跨膜区域、亲水性、表面可及性、抗原性、极性和柔韧性等参数进行综合分析,预测CHSP60可能的B细胞优势表位,并将B细胞优势表位与人HSP60的氨基酸序列进行比对,分析两者之间的同源性,寻找可能与自身免疫性疾病相关的B细胞表位。结果:四种方法对CHSP60二级结构的预测表明,其二级结构中柔性区域以无规卷曲为主,少见转角。其B细胞优势表位可能位于氨基酸79～85、135～140、433～440和526～532区域,而上述序列与人HSP60氨基酸序列比对后,发现其135～140、433～440和526～532区域与人HSP60氨基酸159～164,457～464、549～556区域有较高的同源性。结论:CHSP60可能的B细胞优势表位中,135～140、433～440和526～532区域可能与CT感染相关自身免疫性疾病的发病有关。

妊娠期糖尿病患者血清分泌性卷曲相关蛋白-5、热休克蛋白60、溶质载体家族16成员11的表达及其与胰岛素抵抗的关系

目的探讨分泌性卷曲相关蛋白-5(sFRP5)、热休克蛋白60(HSP60)、溶质载体家族16成员11(SLC16A11)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达及其与胰岛素抵抗的关系。方法选取2022年1月—2023年12月在本院就诊的120例GDM患者为研究组,另选取同期120例健康孕妇为对照组。检测血清sFRP5、HSP60、SLC16A11表达水平;检测并计算胰岛素抵抗相关指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]的水平;采用Pearson法分析血清sFRP5、HSP60、SLC16A11与胰岛素抵抗的相关性;采用Logistic回归分析法与受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sFRP5、HSP60、SLC16A11与GDM的相关性。结果研究组血清sFRP5表达低于对照组,血清HSP60、SLC16A11、FBG、FINS、HOMA-IR高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清sFRP5与HSP60、SLC16A11、FBG、FINS、HOMA-IR呈负相关(P<0.05);血清HSP60与SLC16A11、FBG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05);血清SLC16A11与FBG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,HSP60、SLC16A11、FBG、FINS、HOMA-IR是妊娠期患者发生GDM的影响因素,sFRP5是保护因素(P<0.05)。血清sFRP5、HSP60、SLC16A11联合诊断妊娠期患者发生GDM的曲线下面积(AUC)为0.924,3项指标联合诊断价值优于各指标单独诊断(P均<0.05)。结论GDM患者血清sFRP5水平降低,HSP60、SLC16A11水平升高;3项指标均为妊娠期患者发生GDM的影响因素,且与胰岛素抵抗相关;3项指标联合对GDM具有较高的诊断效能。

沙眼衣原体感染患者的衣原体抗体和热休克蛋白60抗体的测定

目的探讨衣原体IgG抗体(CT-IgG)和衣原体热休克蛋白60的IgG抗体(C-HSP60IgG)与生殖道沙眼衣原体感染(GCI)的关系,探求更为准确的GCI初筛指标及其组合。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测40例GCI患者和40例健康体检者的CT-IgG和C-HSP60IgG的表达,并对实验结果进行单个指标和联合指标的分析。结果 GCI患者组的40例患者的CT-IgG阳性为30例(75%),C-HSP60IgG阳性为23例(57.50%),与对照组的40例健康体检者比较,对照组的CT-IgG阳性为2例(5%),C-HSP60IgG阳性为5例(12.5%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CT-IgG+C-HSP60IgG联合组合的临床诊断价值最高,该组合的敏感度达82.5%。结论 CT-IgG和C-HSP60IgG可用于GCI患者的临床检测,联合检测可提高CT检测的敏感度。

盆腔炎衣原体热休克蛋白60抗体和人类白细胞抗原DQ基因关系

目的探讨衣原体引起的盆腔炎与衣原体热休克蛋白60(CHSP60)抗体和人类白细胞抗原DQ(HLA-DQ)基因的相关性,为盆腔炎发病机制提供依据。方法选择2017年1月-2019年1月海南省妇幼保健院收治的沙眼衣原体感染盆腔炎患者142例作为盆腔炎组,再随机抽取医院健康体检的健康妇女103名作为对照组,检测并比较两组受试者CHSP60抗体表达情况及HLA-DQA、B等位基因分型分布。结果盆腔炎组患者CHSP60抗体阳性率、HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阳性率均高于对照组(P<0.05),而其余HLA-DQA、B等位基因分布上两组无统计学差异。在盆腔炎患者中,HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阳性患者CHSP60抗体阳性率高于HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301等位基因阴性患者(P<0.05)。结论 HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301可能是衣原体引起盆腔炎发生的易感基因,且盆腔炎患者HLA-DQA*0501以及HLA-DQB*0301与CHSP60抗体表达密切相关,提示衣原体引起盆腔炎免疫反应受遗传因素的调控。

沙眼衣原体热休克蛋白60抗原基因的克隆和表达

目的对沙眼衣原体热休克蛋白60(Chsp60)进行表达和纯化,以获得高纯度的蛋白抗原。方法应用PCR扩增技术分离Chsp60的基因全长,采用基因工程的方法,应用融合表达载体重组、克隆得到Chsp60特异抗原基因的重组菌株,经诱导表达获得重组融合蛋白,并经亲和层析获得纯品。结果得到了热休克蛋白60重组克隆菌株,成功地诱导表达并纯化了相对分子质量为87000的融合蛋白,纯度达90%以上,产量为2.5mg/L。结论获得的相对分子质量为60000的特异性抗原可用于检测衣原体感染患者血清中的抗体,有助于探讨Chsp60在免疫发病中的作用。

沙眼衣原体热休克蛋白60基因的克隆和表达

目的探讨克隆和表达沙眼衣原体热休克蛋白60（hsp60）基因。方法PCR分离扩增hsp60的基因片段，纯化后双酶切，克隆到原核表达载体pET-28a，构建重组表达载体pET-28a—hsp60，PCR、双酶切及测序鉴定。转染大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS—PAGE、Western印迹检测。结果PCR与双酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆hsp60基因，测序结果与基因库公布的一致。SDS—PAGE检测表达产物，在相对分子量60000处有表达条带。Western印迹鉴定是表达目的蛋白。纯化后纯度达90％以上，产量为17．85mg／L。结论构建pET-28a—hsp60重组体并成功表达可溶性hsp60蛋白。

沙眼衣原体感染后热休克蛋白-60阳性对自然流产的影响

目的探讨沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis,CT)感染后热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)-60的阳性表达对自然流产的影响。方法选取2009年1月至2010年4月在我院及指定外院就诊的流产患者,将沙眼衣原体阳性自然流产患者作为试验组,设立同期就诊的正常妊娠沙眼衣原体阴性要求人工流产患者作为对照(试验组及对照组患者各25例),对两组患者宫内刮出的蜕膜组织进行HSP-60阳性颗粒平均光密度值测定。结果试验组患者蜕膜组织HSP-60颗粒平均光密度值表达明显高于对照组,其HSP-60的表达强度与自然流产呈正相关作用,两组差异具有统计学意义(P<0.01)。结论在拟妊娠的妇女中常规行CT-HSP-60筛查,筛查后进行进一步检查,对确诊感染者进行治疗,可以降低流产率。但其应激强度对自然流产的影响及是否有异常表达等,仍需进一步研究。

沙眼衣原体热休克蛋白60在诊断沙眼衣原体感染相关女性不孕中的应用

目的探索沙眼衣原体热休克蛋白60(cHSP60)抗体水平在女性不孕相关沙眼衣原体(Ct)感染患者中的表达及其诊断应用价值。方法将不孕年限>2年女性患者74例作为不孕组,其中原发不孕组44例,继发不孕组30例,随机选择同期妇产科门诊已生育且发现阴道分泌物异常妇女为对照组37例,采用免疫学方法检测其血清和宫颈分泌物中cHSP60,并观察其宫颈分泌物Ct病原学检查结果。结果宫颈分泌物中,不孕组Ct病原学及cHSP60免疫学检测阳性率为28.4%及40.5%均高于对照组的5.4%及13.5%,并且同组cHSP60免疫学检测检出率高于Ct病原学检出率;其中输卵管阻塞不孕患者cHSP60抗体阳性率73.7%,高于无输卵管阻塞不孕者9.09%;但血清中cHSP60抗体阳性率在不孕组与对照组,分别为12.3%和13.5%,差异无统计学意义。结论不孕组中宫颈分泌物cHSP60抗体阳性率高于对照组,且cHSP60抗体免疫学检查敏感性高于病原学检查,对女性生殖道Ct感染的筛查有更大的预诊价值,可作为女性Ct感染相关性不孕的筛查指标。

沙眼衣原体热休克蛋白60致小鼠宫颈炎的研究

目的研究沙眼衣原体热休克蛋白60（cHsP60）在小鼠宫颈炎发病中的作用。方法50只雌性C3H／HeN小鼠随机分成5组（每组10只），其中一组为空白对照组，其余4组分别设为criSP60组、活体鼠肺炎衣原体（MoPn）组、灭活MoPn组及生长培养基组，该4组通过自制接种器通过阴道内分别接种criSP60、MoPn、灭活MoPn及生长培养基，第5天时，取小鼠宫颈组织行病理检查，观察宫颈局部的组织学变化并评分。结果criSP60组10只小鼠中9只宫颈黏膜可见不同程度的以中性粒细胞为主的炎症细胞聚集及黏膜细胞坏死、脱落等炎症反应，与活体MoPn组病理特征相同。criSP60组小鼠宫颈炎症发生率为90％，中性粒细胞计数为76．00（25．0—80．0），炎症评分为12．5（11．5—14．25），MoPn组分别为80％、25．00（8．75～32．5）和9．00（8．00～11．5），两组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；灭活MoPn组分别为40％、0．00（0．00—15．50）和0．00（0．00—12．50），宫颈黏膜炎症反应较弱，炎症评分及炎症发生率均低于criSP60组及MoPn组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。生长培养基组仅2只小鼠出现黏膜浅层少量中性粒细胞游入。结论cHSP60是沙眼衣原体宫颈炎发病的重要致病物质。

输卵管性不孕病人沙眼衣原体热休克蛋白-60、肿瘤坏死因子-α的免疫组化分析

目的 探讨肿瘤坏死因子 α(TNF α)、热休克蛋白 60(HSP 60)在沙眼衣原体(CT)感染的输卵管性不孕(TFI) 中的作用及CT感染导致粘连的机制。方法 用免疫组化法测定60例TFI者和对照组30例输卵管TNF α、HSP 60的表达, 其中TFI者又按宫颈分泌物CT DNA分为A组(CT DNA阳性)和B组(CT DNA阴性)。并用计算机图像分析系统进行半定量 分析。结果 A组TNF α、HSP 60在输卵管上皮细胞中表达强于对照组,差异有极显著性(P<0.01)。HSP 60的检出率较 CT DNA高,且TNF α、HSP 60的表达强度与输卵管损伤程度呈正相关。结论 TNF α、HSP 60在CT感染的TFI者中对输卵 管损伤和输卵管纤维化起重要的介质作用。

血清沙眼衣原体及其热休克蛋白60抗体反应与输卵管性不孕的相关性

目的:探讨血清沙眼衣原体及其热休克蛋白60抗体反应与输卵管性不孕的相关性。方法:将82例输卵管性不孕女性患者列为研究组,将同期80例生殖检查健康女性列为对照组,所有受试者取静脉血获得血清,检测沙眼衣原体及其热休克蛋白60阳性情况。结果:研究组患者沙眼衣原体IgG、热休克蛋白60IgG、IgM阳性率明显高于对照组。结论:沙眼衣原体感染是输卵管性不孕的主要诱因之一,热休克蛋白60抗体反应参与衣原体感染和输卵管病理学改变的过程中。

沙眼衣原体热休克蛋白与女性不孕的研究进展

沙眼衣原体为衣原体属中与人类最密切相关的病原体,沙眼衣原体感染所致女性不孕与其热休克蛋白(cHSP)的产生及其免疫学效应密切相关。cHSP60、10、70具有高度的免疫原性,不仅可激发机体产生相应抗体,亦可引起细胞免疫应答,其与女性盆腔炎、输卵管不孕和异位妊娠的发生密切相关。抗cHSP60抗体亦可能影响体外授精-胚移植结果,抗cHSP10抗体更可能与女性输卵管积水相关,而抗cHSP70抗体可能与抗输卵管疾病的保护性免疫相关。

沙眼衣原体热休克蛋白10基因真核表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达(英文)

目的从临床标本中获得沙眼衣原体( C t)热休克蛋白( cH SP)10 基因,构建真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染 H ela细胞,为研究 cH SP10 生物学功能和 C t核酸疫苗的研制做准备。方法用 PC R 技术从 40 例金标法阳性的临床标本中扩增 cH SP10 基因片断,重组入 pM D 18-T 克隆载体。将 pM D 18-T/cH SP10外源基因片断经酶切鉴定后,克隆入 pcD N A3.1(+)中,经过序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将该重组体转染 H ela细胞,ELISA 方法观察目的基因的表达。结果 PC R 扩增得到 cH SP 基因全长,大小为 306bp,序列测定与 G enBan(k M 58027)发布的序列一致;构建得到 cH SP10 基因真核表达载体;该真核表达载体在 H ela细胞表达 cH SP10。结论成功构建 cH SP10 基因真核表达载体,该重组质粒能在 H ela细胞中表达 cH SP10,为进一步研究 cH SP10 生物学功能和 C t核酸疫苗的研制提供了实验基础。

沙眼衣原体感染后热休克蛋白与稽留流产相关性研究

目的探讨沙眼衣原体(CT)感染后热休克蛋白-60(HSP-60)与稽留流产的关系。方法采用荧光定量聚链酶反应(PCR)方法,对72例稽留流产患者和正常人工流产患者进行沙眼衣原体检测,将正常人工流产CT-DNA阴性者随机选择72例作为对照组。再采用免疫组化方法检测蜕膜组织内HSP-60表达,采用HPLAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统检测单位面积中各项免疫组化阳性颗粒平均光密度值。结果HSP-60阳性细胞光密度值,A组:116.36±22.63,B组:139.67±32.26,对照组:221.12±29.87;A组HSP-60表达强于对照组,对比有明显差异(P<0.001)A组与B组对比无明显差异(P>0.005)。结论沙眼衣原体感染后,HSP-60蜕膜组织内表达强度与稽留流产呈正相关性;可认为是稽留流产发生的重要原因之一。

沙眼衣原体热休克蛋白10的克隆和序列分析

目的 :从临床分泌物标本中获得沙眼衣原体热休克蛋白 (cHSP) 10基因。 方法 :用cHSP10特异性引物从 2 0例金标法阳性的临床分泌物样本中扩增cHSP10基因 ,并经测序证实。 结果 :从 2 0例金标法阳性标本中的1例扩增出cHSP10基因全长片段 ,开读框架为 30 6bp ,编码 10 2个氨基酸 ,第 194位核苷酸的改变导致氨基酸发生相应改变。 结论 :从金标法阳性的临床分泌物标本中可以克隆出cHSP10 。

沙眼衣原体感染后热休克蛋白对妊娠的影响

妊娠期间,机体在多种应激原作用下能激活热休克蛋白(HSP)基因转录。其作用:在一定的应激强度范围内,保护胚胎,使胚胎得以存活;另一方面,当应激强度超过一定阈值,HSP则干扰胚胎的生长发育,造成病理妊娠。女性生殖道感染沙眼衣原体(CT)已成为临床常见的疾病之一,可引起一系列并发症,妊娠感染CT还可直接导致妊娠失败,对人类健康构成极大危害。本文对HSP与CT两方面的研究进展进行综述,探讨二者的关系以及对妊娠的影响和作用机制,以期为临床提供预防、诊断和治疗的理论依据。

沙眼衣原体热休克蛋白10基因的克隆及其在真核细胞中的表达

目的:从临床标本中获得构建真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染Hela细胞获得cHSP10。方法:用PCR法从金标法检测为阳性的临床标本中扩增cHSP10基因片断,重组λpMD18-T克隆载体。将pMD18-T/cHSP10中的外源基因片断经酶切鉴定后,克隆入λpcDNA3.1(+)中,经序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将该重组体转染Hela细胞,间接免疫荧光法观察目的基因的表达。结果:PCR扩增得到的306bpcHSP基因全长,序列测定与GenBank(M58027)发布序列一致;构建得到cHSP10基因真核表达载体;该真核表达载体在Hela细胞表达cHSP10。结论:成功构建了cHSP10基因真核表达载体,该重组质粒能在Hela细胞中表达cHSP10。