抗EB病毒衣壳抗原IgG抗体亲合力诊断儿童传染性单核细胞增多症的价值及患儿免疫状态的变化

目的探讨抗EB病毒衣壳抗原(EBV-CA)IgG抗体亲合力对EB病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)的诊断价值及患儿免疫状态的变化。方法选取行抗EBV-CAIgG抗体亲合力及抗EBV-CAIgM抗体检测的儿童5882例,其中IM500例、非IM5382例,检测抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA载量、外周血异型淋巴细胞(简称异淋)比例和外周血淋巴细胞亚群。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA单项及联合检测诊断IM的效能,并观察IM患儿的免疫状态。另选取临床诊断为IM并检测EBVDNA和淋巴细胞亚群的患儿502例,探讨EBVDNA阳性及阴性IM患儿的细胞免疫状况。结果在5882例儿童中,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、EBVDNA和异淋比例4项指标任意1项阳性的患儿为1031例(17.53%),其中IM的发生率最高(38.1%)。ROC曲线分析结果显示,抗EBV-CAIgG抗体亲合力、抗EBV-CAIgM抗体、异淋比例和EBVDNA诊断IM的曲线下面积(AUC)分别为0.883、0.729、0.788和0.664,4项指标联合检测的AUC为0.847。依据年龄将1031例患儿分为婴儿组(<1岁)、幼儿组(1~3岁)、学龄前期组(4~6岁)和学龄期组(7~17岁)。除婴儿组外,其他3组中的IM患儿CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3-CD19+B细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞比例、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01)。婴儿组中的IM患儿CD3-CD19+B细胞比例显著低于非IM患儿(P<0.01),CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例显著高于非IM患儿(P<0.01),而CD3-CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例、CD3+CD4+T细胞比例、CD4+/CD8+比值IM患儿与非IM患儿之间差异无统计学意义(P>0.05)。EBVDNA阳性IM患儿与阴性IM患儿比较,上述变化更明显。结论抗EBV-CAIgG抗体亲合力对IM的诊断价值优于异淋比例、抗EBV-CAIgM抗体和EBVDNA。IM患儿细胞免疫功能明显紊乱,EBVDNA阳性的IM患儿紊乱程度更严重。

重组巨细胞病毒多肽检测特异性IgG抗体及抗体亲合力指数的评价

目的探讨大肠杆菌重组巨细胞病毒(CMV)多肽是否适合于检测CMV特异性IgG抗体以及IgG抗体亲合力指数(AI)。方法利用分子克隆技术克隆CMV的pp150、pp28、pp52和g B这4种基因,大肠杆菌分别表达这些基因,重组蛋白多肽纯化后,建立检测特异性IgG抗体的ELISA方法,与进口ELISA试剂盒同时检测126例CMV IgG阳性和74例CMV IgG阴性血清。根据重组抗原ELISA检测CMV IgG的结果,选取阳性和阴性符合率均相对较高的重组抗原pp150/2、pp150/3和pp150/4,进一步检测8例明确原发感染的婴幼儿血清、7例确定为潜在感染的儿童血清的CMV IgG AI,并与进口试剂检测结果比较。结果制备了8种CMV重组抗原,包括pp150/1、pp150/2、pp150/3、pp150/4、pp28、pp52/1、pp52/2和g B。与进口试剂盒相比,检测CMV IgG抗体时重组抗原pp150/4的阳性符合率最高(90.9%),其次为多肽pp150/3(89.7%)、pp150/2(88.9%)和pp150/1(80.2%)。与进口ELISA试剂盒比较,重组多肽pp150检测CMV IgG抗体的阳性率差异无统计学意义(P均>0.05)。8例经进口试剂确定为原发感染血清的AI值为15.3%~29.8%;以重组抗原pp150/4检测时,4例AI值<30%,4例AI值>30%(39.0%~60.4%),与进口试剂检测值比较差异有统计学意义(P均<0.05)。7例明确为潜在感染的血清进口试剂AI值为59.6%~92.3%,2例经重组抗原检测AI值分别为22.9%和25.1%,与进口试剂检测结果比较差异有统计学意义(P均<0.05)。同样,利用重组抗原pp150/2和pp150/3检测的IgG AI值与进口试剂盒检测值比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论重组多肽pp150具有良好的抗原性,可用于检测CMV IgG抗体,但不适合于CMV IgG AI检测。

人巨细胞病毒IgG抗体亲合力指数在诊断宫内感染中的价值

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染极为普遍,孕妇有活动性感染时,HCMV可通过胎盘循环或孕妇生殖道传染给胎儿、新生儿,对其造成以中枢神经系统受损为主的多种损害。本研究采用尿素变性试验对活动性感染孕妇血清HCMV-IgG抗体亲合力指数(AI)值测定,探讨应用PCR技术、ELISA法及尿素变性试验,在诊断HCMV宫内感染中的价值。

测定抗HCMV-IgG抗体亲合力指数鉴别原发感染和再激活感染

目的通过抗体亲合力指数(AI)鉴别人巨细胞病毒(HCMV)原发感染和再次或再激活感染。方法ELISA测定50例患者血浆(包括8例为系列标本)抗HCMV-IgM和抗HCMV-IgG,温育法测定血浆抗HCMV-IgG抗体AI,同时提取白细胞DNA用巢式PCR检测HCMV DNA。结果高浓度抗HCMV-IgG影响温育法检测AI;4例抗HCMV-IgM强阳性标本中3例AI<30%;DNA和抗HCMV-IgM均阴性组17例标本中15例(88.2%)抗HCMV-IgG为中等或高亲合力;根据8例患者抗HCMV-IgG AI的动态变化,其中2例诊断为原发感染。结论温育法测定血浆抗HCMV-IgG AI能够鉴别HCMV原发感染和再次或再激活感染。

杭州地区巨细胞病毒IgM、IgG抗体双阳性育龄妇女IgG抗体亲合力分析

目的检测杭州地区育龄妇女巨细胞病毒(CMV)IgM、IgG抗体,选取结果为双阳性者进行IgG抗体亲合力分析,探讨其对于CMV原发性感染诊断的临床意义。方法用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测血清中的抗巨细胞病毒IgM/IgG抗体(CMV IgM/IgG),并方便选取2014年1月—2016年12月该院临床送检TORCH抗体检测血清标本中CMV IgM和IgG均为阳性的育龄妇女(15~49岁)共163例,进行IgG亲合力检测,计算亲合力指数(avidity index,AI)。结果 2014—2016年该院育龄妇女CMV IgM、IgG都为阳性的标本共163例,同时检测其CMV IgG亲合力,亲合力指数为10.47%~99.90%,平均为89.49%,其中AI低于50%有4例,占比2.45%,为低亲合力IgG抗体;AI高于60%有158例,占96.93%,为高亲合力抗体;AI介于50%~60%之间有1例,占0.61%,为灰区值。结论杭州地区育龄妇女中CMV IgM阳性的患者大部分不是近期原发感染,结合CMV IgM/IgG检测及IgG亲合力分析可以大大提高检测效率。

ToRCH抗体及IgG抗体亲合力检测试剂临床评价探讨

本文旨在阐述ToRCH抗体及IgG抗体亲合力检测试剂临床评价方法及注意事项。参照我国现行注册申报相关法规要求,在充分考虑本类试剂自身的特点的前提下,对其临床评价中应注意的法规问题和关键点进行了阐述。

巨细胞病毒IgG抗体亲合力分析与IgM抗体检测的评价

目的评估IgM抗体检测及IgG抗体亲合力分析对于巨细胞病毒(CMV)原发性感染诊断的意义。方法 80例标本经间接免疫荧光法检测CMV IgG抗体,免疫捕获法检测CMV-IgM抗体,ELISA法进行CMV IgG抗体亲合力分析,计算亲合力指数(AI)。结果 40例标本的抗CMV IgG抗体阳性、IgM抗体阴性,AI在56%～97%之间,平均为79%。40例标本的抗CMV IgG、IgM抗体均阳性,AI为5%～99.3%,平均61.72%,其中9例(22.5%)标本的AI值低于30%,为低亲合力抗体;4例(10%)AI值介于30%～60%之间,为中等亲合力抗体;其他27例(67.5%)标本的AI值均高于60%,为高亲合力抗体。两组数据的AI均值有显著性差异。结论大部分CMV IgM抗体阳性的患者不是近期原发感染,单纯一项血清学检测不能进行诊断,结合IgM抗体检测及IgG抗体亲合力分析可以大大提高检测效率。

W135群脑膜炎球菌结合物小鼠免疫血清IgG抗体亚类和亲合力的检测

目的通过检测W135群脑膜炎球菌结合物(简称W135群结合物)小鼠免疫血清中IgG抗体亚类及IgG抗体亲合力,判断W135群结合物的免疫应答特征。方法 (1)免疫血清的制备:将NIH雌性小鼠随机分为3组(A组、B组、对照组),每组30只。A组采用含2.5μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、2、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;B组采用含2.5μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;对照组采用含2.5μg多糖的PSW135分别于0、2、4周腹股沟皮下注射小鼠。分别于每次免疫7 d后,经小鼠眼眶静脉采血,分离血清备用;(2)IgG抗体亚类和亲合力的检测:采用间接ELISA分析各组免疫血清中IgG抗体及IgG抗体亚类含量;采用单一浓度的硫氰酸钾溶液作为洗脱液,用间接ELISA测定免疫血清中IgG相对亲合力。结果 A组和B组获得的小鼠免疫血清,IgG抗体均以IgG1为主(占总IgG抗体的80%以上),IgG抗体及其亚类抗体含量均呈典型的剂次加强效应;对照组各针次免疫血清中的IgG3抗体含量所占比例最高,未见免疫剂次加强效应。A组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6%、25.4%、17.6%和47.6%,B组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6%、23.6%和48.3%,对照组IgG抗体的相对亲合力分别是92.4%、81.9%和81.0%。结论 W135群结合物小鼠免疫血清呈现典型的胸腺依赖性(thymus dependent,TD)抗原的免疫应答特征。

抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定

采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×10~6;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛IgG轻链Fab片段,9C6识别牛IgG重链Fab片段;9C6与牛IgG1和牛IgG2反应,与山羊IgG、绵羊IgG、兔IgG、牛IgM、牛乳酪蛋白、牛乳β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、鱼明胶的交叉反应率均小于1%;9C6亲合力常数达牛乳8.92×10~8 L/mol。

3项指标联合检测对儿童EB病毒感染的诊断价值

目的评价抗EB病毒衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、EB病毒衣壳抗原IgG抗体亲合力指数(RAI)、外周血异型淋巴细胞单项及联合检测对儿童EB病毒现症感染的诊断价值。方法收集2016年10月至2018年3月该院儿科收治的,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定EB病毒VCA-IgM为阳性的209例患者作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测EB病毒DNA,ELISA测定RAI,人工计数外周血异型淋巴细胞百分比。将标本分成EB病毒DNA阳性组和EB病毒DNA阴性组,采用SPSS19.0统计软件对各项指标进行非参数检验,通过Logistic回归和ROC曲线比较独立检测和联合检测各项指标在EB病毒感染诊断中的灵敏度和特异度。结果 EB病毒DNA阳性组的VCA-IgM、外周血异型淋巴细胞百分比均高于EB病毒DNA阴性组,RAI低于EB病毒DNA阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。VCA-IgM、RAI、外周血异型淋巴细胞百分比三者均与EB病毒DNA相关(P<0.05)。VCA-IgM、RAI、外周血异型淋巴细胞百分比三者单项检测的曲线下面积(AUC)分别为0.633、0.844、0.870,三者联合检测的AUC为0.875,高于各指标单项检测的AUC。结论诊断EB病毒感染的相关指标中,外周血异型淋巴细胞百分比最具有诊断学意义,优于VCAIgM、RAI,三者联合检测优于单项检测,有助于EB病毒感染及其他合并感染的诊断和防治。

VCA-IgM、RAI和外周血异型淋巴细胞检查对儿童EB病毒感染的诊断效能分析

目的:分析抗EB病毒(Epstein-Bar virus,EBV)衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、IgG抗体亲和力指数(RAI)、外周血异型淋巴细胞百分比实验室检测指标对儿童EB病毒急性感染的诊断效能。方法:回顾性分析2017年3月-2019年6月就诊于随州市中心医院儿科住院部并行EBV-DNA定量检测的233例患儿的VCA-IgM、RAI及外周血异型淋巴细胞百分比资料,以EBV-DNA定量≥1.0×103拷贝/mL为阳性标准将患儿分为EBV-DNA阳性组和EBV-DNA阴性组,比较EB病毒VCA-IgM、RAI及外周血异型淋巴细胞百分比在诊断EB病毒感染过程中的敏感度、特异度和准确度,确定与诊断EB病毒感染有关的阳性指标个数的最佳诊断点。结果:EBV-DNA阳性组VCA-IgM、外周血异型淋巴细胞百分比均高于EBV-DNA阴性组,RAI低于EBV-DNA阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。外周血异型淋巴细胞和RAI诊断EBV感染的准确度均为73.82%,显著高于VCA-IgM的67.38%,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线中诊断EB病毒感染的最佳诊断点对应于每位患儿1.5个阳性检测指标个数。结论:诊断EB病毒早期感染的这三项实验室检测指标中,外周血异型淋巴细胞和RAI的诊断效能高于VCA-IgM,当三者中任意两项指标支持EB病毒感染诊断时,其诊断EBV感染的准确性较单项指标高,与三项指标同时阳性无显著差别,这在临床诊疗工作中既能缩短诊疗时间,减少误诊、漏诊和迟诊,还能避免过度检查,降低患儿的医疗费用,具有实际的临床意义。

VCA-IgM、AI及细胞免疫功能在EB病毒感染患儿诊断中的应用价值

目的:研究衣壳抗原IgM抗体(VCA-IgM)、衣壳抗原IgG抗体(VCA-IgG)亲和力指数(AI)及细胞免疫功能在EB病毒(EBV)感染患儿诊断中的应用价值。方法:选择2016年8月-2019年10月本院诊治的85例EBV感染患儿作为研究组,分为传染性单核细胞增多症(IM)组(47例)和嗜血细胞综合征(HPS)组(38例),另选取同期健康儿童50例作为对照组。比较三组的VCA-IgM、AI水平以及细胞免疫功能指标,并利用ROC曲线分析其诊断价值。结果:IM组和HPS组的VCA-IgM、CD3^+、CD8^+均明显高于对照组,且IM组均明显高于HPS组(P<0.05);IM组和HPS组的AI、CD4^+以及CD19^+均低于对照组,IM组的AI、CD4^+均明显低于HPS组,CD19^+高于HPS组(P<0.05)。联合诊断的AUC为0.942,明显高于各指标单项检测的AUC,敏感度为95.5%,特异度为93.8%。结论:VCA-IgM、AI以及细胞免疫功能指标均可为EBV感染的诊断提供判断依据,联合检测上述指标对于EBV感染具体类型的鉴别诊断有重要的辅助作用。

酶联免疫法检测风疹病毒急性感染结果分析

目的探讨酶联免疫法在诊断风疹病毒急性感染中的应用。方法对2100例无偿献血者血浆样本分别检测风疹病毒IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 2100例样本中,风疹病毒IgM抗体阳性率为0.76%,IgG抗体阳性率为78.67%,447例样本个体风疹病毒IgM抗体和IgG抗体均为阴性。在对IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本进行IgG抗体亲合力检测时,有19例样本为低亲合力,可判定为原发性感染。在对IgM抗体阳性的样本进行IgG亲合力检测时,样本SZ0259和SZ1490IgM抗体为可疑值,IgG抗体阳性,IgG抗体高亲合力,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于风疹病毒急性感染期。最终确定风疹病毒急性感染的样本为33例,感染率1.57%。结论可同时检测风疹病毒IgM抗体和风疹病毒IgG抗体亲合力来诊断风疹病毒感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为风疹病毒急性感染。

酶联免疫法检测弓形体感染初探

目的酶联免疫法正确有效诊断弓形体急性感染。方法对4 500例无偿献血者血浆样本分别检测弓形体IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 4 500例样本中,弓形体IgM抗体阳性率为0.51%,IgG抗体阳性率为1.53%。其中22例为IgM(+)IgG(+),1例为IgM(+)IgG(-),47例为IgM(-)IgG(+),4 430例为IgM(-)IgG(-)。在对69例弓形体IgG(+)的样本进行IgG亲合力检测时,IgM(+)IgG(+)的22例样本中2例为IgG中等亲合力抗体,3例为IgG高亲合力抗体,但这5例样本的IgM抗体均为可疑,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于弓形体急性感染期;IgG(+)IgM(-)的47例样本中,3例为IgG低亲合力抗体,可能由于其中的弓形体IgM抗体在急性感染期后期,IgM抗体滴度太低无法检测到,仍可判定为处于急性感染期。最终确定弓形体急性感染的样本为20例,感染率0.44%。结论可同时检测弓形体IgM抗体和弓形体IgG抗体亲合力来诊断弓形体感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为弓形体急性感染。

不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果

目的研究不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果。方法将重组LTB-VP1和BSA蛋白分别用氢氧化铝吸附后,制备成不同浓度的亚单位疫苗,以100、50、20、10、5和1μg/只的剂量免疫昆明小鼠,共免疫3次。于初次免疫后第14、28、42、56天断尾采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平和特异性IgG1/IgG2a比率,并采用尿素变性法检测小鼠血清中抗体相对亲合力指数(abidity index,AI)。结果 LTB-VP1和BSA抗原激发的抗体水平随免疫次数的增加而不断升高,与抗原剂量呈非线性关系,不同抗原的合适使用剂量也不相同。LTB-VP1抗原以20μg/只剂量产生的抗体水平和抗体的AI值最高;IgG1/IgG2a平均值为1.04,各剂量组Th1/Th2型免疫反应处在一种平衡状态。BSA抗原在5和100μg/只剂量时激发的抗体水平相近,抗体的AI值差异有统计学意义(P<0.05);IgG1/IgG2a平均值为2.4,各剂量组以Th2型免疫反应为主。结论抗体水平不随抗原剂量的增加而增加,低剂量抗原即可产生较好的免疫效果,为兽用疫苗的临床使用提供了数据参考。