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肠道病毒71型衣壳蛋白1(VP1)单克隆抗体制备 被引量:2
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作者 朱盈霏 陈雅婧 +9 位作者 李越香 叶伟 刘赫 张慧 党品香 王思雨 吕欣 雷迎峰 张芳琳 姚敏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期268-274,共7页
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白1(VP1)小鼠源性单克隆抗体(mAb)。方法表达并纯化VP1蛋白;以灭活并纯化的EV71病毒免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71 VP1的mAb;使用间接ELISA进行抗体效价检测、抗体亚类鉴定,Western blot法... 目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白1(VP1)小鼠源性单克隆抗体(mAb)。方法表达并纯化VP1蛋白;以灭活并纯化的EV71病毒免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得抗EV71 VP1的mAb;使用间接ELISA进行抗体效价检测、抗体亚类鉴定,Western blot法检测EV71感染的RD细胞VP1蛋白表达,免疫荧光细胞化学技术检测EV71感染的RD细胞VP1的表达和分布,体外中和试验测定抗体的中和活性。结果共获得6株可分泌针对EV71 VP1的mAb的杂交瘤细胞株,获得的6株抗体中3株为IgG2a亚型,3株为IgG2b,可用于ELISA、Western blot法、免疫荧光细胞化学染色,其中2D7具有中和活性,半数抑制剂量(IC_(50))为9.892μg/mL。结论获得6株具有较好反应性的mAb,为后续EV71鉴定、诊断和VP1蛋白功能研究等奠定了基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型(EV71) 单克隆抗体(mAb) 衣壳蛋白1(VP1) 中和活性
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人乳头瘤病毒11型L1主要衣壳蛋白的B细胞表位多肽作为疫苗的研究 被引量:2
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作者 李元朝 吕凤林 +3 位作者 曹伟 左国伟 艾军华 胡承香 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期15-20,共6页
分析了人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,并以此为基础研制表位多肽疫苗。研究中采用Goldkey和PC/Gene软件系统,分析HPV11的L1主要衣壳蛋白的二级结构、抗原性、B细胞表位,并引入氨基酸抗原性指数,综合评估其B细... 分析了人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,并以此为基础研制表位多肽疫苗。研究中采用Goldkey和PC/Gene软件系统,分析HPV11的L1主要衣壳蛋白的二级结构、抗原性、B细胞表位,并引入氨基酸抗原性指数,综合评估其B细胞优势表位。Fmoc固相合成表位多肽,高效液相层析方法纯化,毛细管电泳分析其纯度。与0.2ml佐剂完全乳化后,按50μg/只的剂量免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价。取免疫小鼠血清,与HPV11DNA阳性的尖锐湿疣患者的疣体上清液结合,鉴定免疫后小鼠所产生抗体的特异性。发现HPV11的L1主要衣壳蛋白的第426~439位和第487~501位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣的疣体组织上清液呈阳性反应。说明所选这两个肽段为HPV11的L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,但是否具有功能特异性,尚需进一步研究。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒11 L1衣壳蛋白 B细胞表位 多肽疫苗 尖锐湿疣
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柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定 被引量:1
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作者 张向颖 刘芳 +4 位作者 谢立 陈堃 戴振华 修冰水 张贺秋 《生物技术通讯》 CAS 2012年第3期386-388,共3页
目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化... 目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 衣壳蛋白VP1 原核表达 抗原性
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Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及免疫效果评价 被引量:3
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作者 曹永生 高明春 +4 位作者 曹翀 张润祥 李迪 王欢 王君伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期73-80,共8页
为研究Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及其免疫原性,本研究基于酵母细胞内表达载体pPICZA,利用独立编码三个衣壳蛋白表达盒构建质粒pPICZA-vp031,重组质粒经BglⅡ线性化后进行电转化,获得重组有三个独立表达盒重组酵母菌... 为研究Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及其免疫原性,本研究基于酵母细胞内表达载体pPICZA,利用独立编码三个衣壳蛋白表达盒构建质粒pPICZA-vp031,重组质粒经BglⅡ线性化后进行电转化,获得重组有三个独立表达盒重组酵母菌。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明衣壳蛋白均得到正确表达且具有良好抗原性。重组酵母菌经口服免疫小鼠后,机体能够产生血清特异性IgG抗体和黏膜sIgA抗体,淋巴细胞增殖结果显示免疫小鼠淋巴细胞特异性增殖指数显著高于灭活疫苗组,细胞因子检测结果显示经特异性抗原刺激免疫小鼠淋巴细胞分泌IL-4和IL-10与灭活疫苗组无显著差异,显著高于PBS对照组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。本研究为口蹄疫基因工程疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 Asia1型FMDV衣壳蛋白 毕赤酵母 共表达 抗原性 免疫原性
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人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的纯化
5
作者 孙肖红 佟晓波 《承德医学院学报》 2002年第2期85-87,共3页
目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sephar... 目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。 展开更多
关键词 衣壳蛋白L1 人乳头瘤病毒 纯化 宫颈癌 亲和层析 离子交换层析 重组融合蛋白
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小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备 被引量:6
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作者 周湧超 徐志刚 +3 位作者 杨澜 陈新宇 段志良 文金生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期462-468,共7页
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选... 目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。 展开更多
关键词 肠道病毒71型(EV71) 衣壳蛋白VP1 单克隆抗体(mAb)
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口蹄疫病毒衣壳蛋自前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 韦 婷 郑 敏 +6 位作者 刘 棋 李雪梅 李铁征 张洪勇 郭志儒 夏志平 金宁一 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期134-137,共4页
[摘 要]目的 对口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析,了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理,便于疫苗株的选择。方法 应用RT-PCR方法扩增了 CC-1毒株的衣壳蛋白前体 P1基因... [摘 要]目的 对口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析,了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理,便于疫苗株的选择。方法 应用RT-PCR方法扩增了 CC-1毒株的衣壳蛋白前体 P1基因和蛋白酶 3C基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体上,分别构建含有P1基因和3C基因的两个重组质粒pGEMP1和pGEM3C,并进行核苷酸序列分析。结果CC-1株与相同血清型毒株P1基因核苷酸序列和氨基酸序列存在较高的同源性,与不同血清型毒株P1基因氨基酸序列的同源性差异显著,而不同血清型毒株的蛋白酶3C基因氨基酸序列的同源性均在 90%以上。结论 成功地克隆了 FMDV P1区基因和蛋白酶3C基因,为选择口蹄疫病毒疫苗株提供了背景材料。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白前体P1基因 蛋白酶3C基因 基因克隆 序列分析
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JC病毒衣壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:1
8
作者 白瑞玲 王勤英 +2 位作者 成军 赵龙凤 毛羽 《医学研究杂志》 2009年第5期37-40,共4页
目的构建JC病毒衣壳蛋白VP1基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化该蛋白。方法用PCR方法扩增患者尿液中JC病毒衣壳蛋白VP1的基因,测序正确后将其克隆入pET-32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达VP1融合蛋白。大量表达该融合蛋白... 目的构建JC病毒衣壳蛋白VP1基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化该蛋白。方法用PCR方法扩增患者尿液中JC病毒衣壳蛋白VP1的基因,测序正确后将其克隆入pET-32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达VP1融合蛋白。大量表达该融合蛋白并用镍柱亲和层析法纯化。结果成功构建重组表达载体,30℃,IPTG诱导可见有融合蛋白表达,存在形式为包涵体。该融合蛋白相对分子质量约为59kDa。Western blot证明融合蛋白具有很好的抗原性。用镍柱亲和层析法成功纯化出VP1融合蛋白。结论成功表达VP1融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 JC病毒 衣壳蛋白VP1 原核表达 亲和层析
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HPV E6/E7 mRNA结合HPV L1衣壳蛋白检测诊断子宫颈癌前病变的临床意义 被引量:2
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作者 高坤 《中外医学研究》 2021年第36期58-61,共4页
目的:探究人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA+HPV L1衣壳蛋白诊断子宫颈癌前病变临床价值。方法:选泰安市妇幼保健院2019年1月-2020年12月宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)HPV DNA阳性94例患者为研究对象,根据组织细胞学检查结果将其设为观察组(... 目的:探究人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA+HPV L1衣壳蛋白诊断子宫颈癌前病变临床价值。方法:选泰安市妇幼保健院2019年1月-2020年12月宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)HPV DNA阳性94例患者为研究对象,根据组织细胞学检查结果将其设为观察组(宫颈上皮内瘤变,n=84)、对照组(正常宫颈,n=10);两组均接受HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白检测,以组织细胞学检查结果为金标准,比较两种诊断方式单独、联合诊断价值。结果:观察组HPV E6/E7 mRNA总阳性检出率为67.86%,较对照组的20.00%高,差异有统计学意义(P<0.05);CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率为35.71%,较对照组的10.00%高,差异有统计学意义(P<0.05);CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA+HPV L1衣壳蛋白联合诊断的准确度、灵敏度分别为82.98%、82.14%,较HPV E6/E7 mRNA(69.15%、67.86%)、HPV L1衣壳蛋白(41.49%、35.71%)单独检验高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在对子宫颈癌前病变诊断中,HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白阳性表达均较高,两者联合诊断后可提升诊断灵敏度。 展开更多
关键词 子宫颈癌前病变 HPV E6/E7 mRNA HPV L1衣壳蛋白
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CD44v6与人乳头状瘤病毒L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值 被引量:3
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作者 何苗 洪颖 +1 位作者 蔡良良 谢绮 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第21期18-23,共6页
目的探讨CD44v6与人乳头状瘤病毒(HPV)L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。方法收集2017年1月—2022年1月江南大学附属医院102例手术切除的宫颈鳞癌及癌前病变组织石蜡标本,其中宫颈鳞癌组织石蜡标本41例,癌前病变组织石蜡标... 目的探讨CD44v6与人乳头状瘤病毒(HPV)L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。方法收集2017年1月—2022年1月江南大学附属医院102例手术切除的宫颈鳞癌及癌前病变组织石蜡标本,其中宫颈鳞癌组织石蜡标本41例,癌前病变组织石蜡标本61例[宫颈低级别上皮内病变(LSIL)标本30例,宫颈高级别上皮内病变(HSIL)组织31例],另选取同期49例因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈组织石蜡标本为对照。采用免疫组织化学法检测不同组织中CD44v6与HPV L1衣壳蛋白表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CD44v6、HPV L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。结果正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中CD44v6阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织高于正常宫颈组织、LSIL组织及HSIL组织(P<0.05),HSIL组织高于正常宫颈组织和LSIL组织(P<0.05)。正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中HPV L1衣壳蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织低于HSIL组织、LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05),HSIL组织低于LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断宫颈鳞癌的敏感性分别为70.73%(95%CI:0.543,0.834)、75.61%(95%CI:0.594,0.871)、70.73%(95%CI:0.543,0.834),特异性分别为77.05%(95%CI:0.642,0.865)、73.77%(95%CI:0.607,0.838)、90.16%(95%CI:0.792,0.959),AUC分别为0.746(95%CI:0.648,0.844)、0.742(95%CI:0.638,0.846)、0.907(95%CI:0.848,0.966)。ROC曲线分析结果显示,癌前病变组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断HSIL的敏感性分别为74.19%(95%CI:0.551,0.875)、70.96%(95%CI:0.518,0.851)、70.96%(95%CI:0.518,0.851),特异性分别为76.67%(95%CI:0.573,0.894)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、90.00%(95%CI:0.723,0.974),AUC分别为0.748(95%CI:0.649,0.847)、0.726(95%CI:0.627,0.825)、0.890(95%CI:0.820,0.959)。结论CD44v6在宫颈病变组织中异常高表达,且随着宫颈病变程度的加重,CD44v6表达水平呈升高趋势,HPV L1衣壳蛋白的变化与CD44v6相反,两者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变价值较高。 展开更多
关键词 宫颈鳞癌 癌前病变 CD44V6 人乳头状瘤病毒L1衣壳蛋白 诊断效能
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免疫途径和佐剂对CVB3VP1蛋白免疫效果的影响 被引量:4
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作者 温婵 高志云 +5 位作者 蓝佳明 闫立景 揣侠 李嘉 李伟 王永祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1086-1089,共4页
目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响。方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21(DE3)pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP... 目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响。方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21(DE3)pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP1蛋白的表达并进行纯化。首先采用不同的免疫途径(皮下,腹腔,肌肉)用VP1蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(氢氧化铝、弗氏佐剂、Montanide ISA720),每组18只,采用肌肉注射途径免疫。每次每只小鼠注射50μg,共免疫3次,间隔3周。用ELISA和微量中和试验检测血清特异性IgG抗体和中和抗体。用CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性。用致死量的CVB3攻击后,检测血中病毒的滴度并观察小鼠的存活状况。结果:在大肠杆菌中成功表达CVB3VP1蛋白。三种免疫途径比较,肌肉注射组血清中和抗体和特异性IgG抗体的水平明显高于其他组(P<0.01)。采用肌肉注射免疫时,弗氏佐剂组Montanide ISA 720佐剂组的体液免疫和细胞免疫应答的水平明显高于氢氧化铝组(P<0.05);但血中病毒的滴度低于氢氧化铝组(P<0.05)。弗氏佐剂组小鼠的生存率好于氢氧化铝组(P<0.05)。结论:采用肌肉注射途径,并联合弗氏佐剂或Montanide ISA 720佐剂可以使CVB3VP1免疫获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组3型 衣壳蛋白VP1 佐剂 免疫途径 小鼠
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人乳头瘤病毒58型衣壳蛋白的表达及其抗体制备 被引量:2
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作者 王丽娜 宋文龄 +2 位作者 陈伟 姜艳芳 付艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期283-286,共4页
目的:构建人乳头瘤病毒5 8型(hpv5 8)衣壳蛋白L1的杆状病毒 昆虫细胞表达系统。方法:用杆状病毒 昆虫细胞表达系统大量表达HPV5 8L1蛋白,并用HPV5 8L1病毒相似颗粒(VLP)免疫BALB c小鼠制备特异性抗血清。结果:HPV5 8L1蛋白在SF9细胞中... 目的:构建人乳头瘤病毒5 8型(hpv5 8)衣壳蛋白L1的杆状病毒 昆虫细胞表达系统。方法:用杆状病毒 昆虫细胞表达系统大量表达HPV5 8L1蛋白,并用HPV5 8L1病毒相似颗粒(VLP)免疫BALB c小鼠制备特异性抗血清。结果:HPV5 8L1蛋白在SF9细胞中被高效表达,其相对分子质量为5 5kD ;CsCl超速离心结合蔗糖密度超速离心可纯化此蛋白。在电镜下可见纯化的病毒衣壳蛋白L1形成VLP。用其免疫小鼠制备的相应抗体能与HPV5 8L1特异性结合。结论:成功表达了HPV5 8衣壳蛋白L1,并制备出高滴度的抗体。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58型 主要衣壳蛋白L1 杆状病毒.昆虫细胞表达系统 病毒相似颗粒
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白的克隆及表达 被引量:4
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作者 安静 余黎 +2 位作者 席亮 白慕群 周旭 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期26-29,共4页
采用PCR技术从宫颈癌组织中扩增人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus type16,HPV16)L1全长基因片段,目的片段克隆到pMD18T载体后经酶切鉴定及测序确认。构建重组原核表达质粒pGEX4T1-L1,转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导表达出以非... 采用PCR技术从宫颈癌组织中扩增人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus type16,HPV16)L1全长基因片段,目的片段克隆到pMD18T载体后经酶切鉴定及测序确认。构建重组原核表达质粒pGEX4T1-L1,转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导表达出以非可溶性蛋白形式存在的表达蛋白,该重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的17%,免疫印迹检测表明,表达蛋白与宫颈癌病人血清出现特异性反应。成功构建了重组原核表达质粒pGEX4T1-L1,并且在原核细胞中得到表达,为进一步研究L1蛋白的免疫学活性及疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 衣壳蛋白L1 免疫
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利用昆虫-杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16/18/33/58亚型L1蛋白 被引量:1
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作者 江为 靳彦文 +1 位作者 刘萱 曹诚 《生物技术通讯》 CAS 2012年第4期476-480,共5页
目的:通过昆虫-杆状病毒表达系统获得人乳头瘤病毒(HPV)16/18/33/58亚型的主要衣壳蛋白L1。方法:克隆了HPV16/18/33/58亚型的L1蛋白基因,并采用密码子优化策略进行改造(记为HPV16/18/33/58亚型mL1),将优化基因片段插入pFastBac Dual载... 目的:通过昆虫-杆状病毒表达系统获得人乳头瘤病毒(HPV)16/18/33/58亚型的主要衣壳蛋白L1。方法:克隆了HPV16/18/33/58亚型的L1蛋白基因,并采用密码子优化策略进行改造(记为HPV16/18/33/58亚型mL1),将优化基因片段插入pFastBac Dual载体获得重组载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后得到重组Bacmid,转染昆虫Sf9细胞,Western印迹和SDS-PAGE检测重组蛋白的表达。结果:获得了表达HPV16/18/33/58亚型mL1蛋白的重组杆状病毒;Western印迹和SDS-PAGE分析表明该重组杆状病毒感染昆虫Sf9细胞后表达mL1蛋白,且mL1蛋白主要分布在细胞中;优化了蛋白表达时间和感染复数,获得目的蛋白mL1的高效表达。结论:多个亚型HPV L1蛋白的克隆表达,为中国优势血清型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 衣壳蛋白L1 表达
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HPV L1衣壳蛋白和阴道微生态及酶的改变与高危人乳头瘤病毒感染、宫颈上皮内瘤变演化的关系
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作者 黄月 杨丹 刘晓月 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期442-447,共6页
目的探讨人乳头瘤病毒L1(HPV L1)衣壳蛋白及阴道微生态和酶的改变与高危人乳头瘤病毒(HRHPV)感染、宫颈上皮内瘤变(CIN)演化的关系。方法选取2021年1月至2023年3月在我院治疗的CIN患者182例,其中CINⅠ级患者52例,CINⅡ级患者70例,CINⅢ... 目的探讨人乳头瘤病毒L1(HPV L1)衣壳蛋白及阴道微生态和酶的改变与高危人乳头瘤病毒(HRHPV)感染、宫颈上皮内瘤变(CIN)演化的关系。方法选取2021年1月至2023年3月在我院治疗的CIN患者182例,其中CINⅠ级患者52例,CINⅡ级患者70例,CINⅢ级患者60例,分析比较不同级别CIN患者HPV L1衣壳蛋白、阴道微生态、阴道微生物代谢产物及酶的差异。结果CINⅢ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(20.00±5.92)PU,低于CINⅠ级和CINⅡ级患者(t=12.232、10.223,均P<0.05);CINⅡ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(25.10±6.04)PU,低于Ⅰ级患者(t=9.922,P<0.05)。CINⅢ级患者阴道乳杆菌阳性比例为18.33%,低于CINⅠ级患者(χ^(2)=10.036,P<0.05),而假丝酵母阳性比例为35.00%,高于CINⅠ级患者(χ^(2)=6.892,P<0.05);CINⅢ级患者β-葡萄糖醛酸酶(GUS)、唾液酸苷酶(SNA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))阳性比例分别为86.67%、90.00%和93.33%,高于Ⅰ级和Ⅱ级患者(χ^(2)=32.044、67.608、20.394,均P<0.05)。HR-HPV感染CIN患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(24.12±3.34)PU,低于HR-HPV未感染患者(t=-6.150,P<0.05)。HR-HPV感染CIN患者GUS、SNA、H_(2)O_(2)阳性率分别为65.28%、54.86%、81.25%,均高于HRHPV未感染患者(χ^(2)=18.637、18.440、29.397,均P<0.05)。HR-HPV感染CINⅠ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(28.04±3.01)PU,低于HR-HPV未感染CINⅠ级患者(t=-6.750,P<0.05);HR-HPV感染CINⅠ级患者H2O2阳性率为70.97%,高于HR-HPV未感染CINⅠ级患者(χ^(2)=4.109,P<0.05)。HR-HPV感染CINⅡ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(28.04±3.01)PU,低于HR-HPV未感染CINⅡ级患者(t=-5.165,P<0.05)。HR-HPV感染CINⅡ级患者GUS、H_(2)O_(2)阳性率为50.94%、70.97%,均高于HR-HPV未感染CINⅡ级患者(χ^(2)=3.920、10.758,均P<0.05)。结论HPV L1衣壳蛋白、阴道微生态及代谢产物和酶表达与CIN严重程度有关,同时与HR-HPV感染存在一定的关系。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒L1衣壳蛋白 阴道微生态 代谢产物 高危型人乳头瘤病毒 宫颈上皮内瘤变
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抗O型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
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作者 胡大利 张培因 +3 位作者 尹晓光 卫红飞 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期811-812,815,共3页
目的:制备抗O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以自行构建表达的O型FMDV-VP1表位重组蛋白(VP1epi)为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交... 目的:制备抗O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以自行构建表达的O型FMDV-VP1表位重组蛋白(VP1epi)为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用Westernblot、间接ELISA和斑点免疫测定法对mAb的特异性进行鉴定。结果:成功地获得1株分泌抗VP1epi重组蛋白mAb的杂交瘤细胞株“C7”,其分泌的mAb为IgG1亚类,能特异性地识别VP1epi重组蛋白,其腹水效价可达1∶12800。斑点免疫测定法显示,该mAb能很好地识别灭活的FMDV。结论:VP1epi重组蛋白可代替FMDV制备抗天然FMDV-VP1的mAb。抗O型FMDV-VP1mAb的成功制备,为进一步研究开发新型FMDV的检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白1 重组蛋白 单克隆抗体
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雏番鸭胰腺型鸭1型甲肝病毒分离鉴定及VP1基因分析 被引量:20
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作者 傅光华 陈红梅 +8 位作者 黄瑜 施少华 彭春香 江斌 程龙飞 万春和 傅秋玲 林建生 林芳 《福建农业学报》 CAS 2012年第9期945-950,共6页
采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高... 采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高免血清特异性所中和。该株病毒对7日龄雏番鸭的致死率为38.5%,病死鸭剖检病变与临床发病鸭相同,且从病死鸭脏器中回收分离到的病毒经鉴定仍为鸭1型甲肝病毒。应用鸭1型甲肝病毒VP1基因特异性引物从该株病毒克隆获得的714bp的基因片段,与经典鸭1型甲肝病毒分离株Du/CH/LGD/111239VP1基因的同源性最高,为99.1%,经遗传进化分析表明该株病毒属鸭1型甲肝病毒谱系。以上结果表明,雏番鸭胰腺炎是由鸭1型甲肝病毒感染所致,这一新病型明显不同于经典的鸭1型甲肝病毒感染引起的肝脏出血,鉴于此,建议将本试验分离株命名为胰腺型鸭1型甲肝病毒。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒 胰腺型 雏番鸭 VP1衣壳蛋白
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EV71 VP1黏膜疫苗制备及其诱导黏膜免疫的实验研究 被引量:4
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作者 李志会 岳盈盈 +2 位作者 李鹏 宋楠楠 孟红 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第43期4-5,共2页
目的研究表面展示肠道病毒71型(EV71)结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃+滴鼻途径免疫BALB/c小鼠(观察组... 目的研究表面展示肠道病毒71型(EV71)结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃+滴鼻途径免疫BALB/c小鼠(观察组和对照组各16只),4周后摘眼球取血,脱臼处死小鼠收集肺泡及小肠冲洗液,采用ELISA方法检测血清、肺黏膜、肠黏膜中VP1特异性IgA抗体水平。结果枯草芽孢杆菌经培养及溶菌酶处理后均以芽孢形式存在;观察组血清及肺黏膜中VP1特异性IgA抗体水平均显著高于对照组(P均<0.01),但两组肠黏膜中抗体水平无显著差异。结论展示EV71结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢可成功制备疫苗,且能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应;此为EV71疫苗的研制提供了新思路。 展开更多
关键词 肠道病毒71 衣壳蛋白VP1 疫苗 枯草芽孢杆菌芽孢
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虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型的初步研究 被引量:6
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作者 张莉 李园园 +4 位作者 史梅 季云 王玉月 王榕 史伟峰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期779-783,共5页
目的检测虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型(EV71)活性,分析其与NF-κB信号通路的关系。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测虎杖苷与白藜芦醇对人横纹肌肉瘤(RD)细胞的毒性以及抗EV71作用;western blot分析EV71感染RD细胞后EV71/衣壳蛋白... 目的检测虎杖苷与白藜芦醇体外抗肠道病毒71型(EV71)活性,分析其与NF-κB信号通路的关系。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测虎杖苷与白藜芦醇对人横纹肌肉瘤(RD)细胞的毒性以及抗EV71作用;western blot分析EV71感染RD细胞后EV71/衣壳蛋白VP1、NF-κBp50、NF-κBp65蛋白表达及磷酸化水平,Luminex流式液相芯片技术检测RD细胞分泌IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-α(IFN-α)和IFN-β的水平。结果虎杖苷与白藜芦醇的50%病毒抑制细胞毒性浓度(CC50)分别为542.76μg/mL和85.73μg/mL,50%病毒抑制浓度(IC50)分别为979.66μg/mL和21.36μg/mL,治疗指数(TI)为0.55和4.01。虎杖苷对EV71的抑制作用较弱,250μg/mL时的病毒抑制率为(23.57±3.64)%。白藜芦醇可抑制RD细胞EV71/VP1合成,作用8、12、24 h的VP1表达量差异具有统计学意义(t值分别为5.968、5.364和4.922,P均<0.05)。与EV71感染组比较,EV71+白藜芦醇组NF-κBp50磷酸化水平降低,差异有统计学意义(8、12、24 h的t值分别为11.642、12.284和28.844,P均<0.05);NF-κBp65磷酸化水平降低,也具有统计学意义(4、8、12、24 h的t值分别为9.017、16.883、10.287和6.922,P均<0.05)。白藜芦醇可显著降低EV71感染的RD细胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β(t值分别为23.589、34.564和13.296,P均<0.05)。结论白藜芦醇可通过抑制RD细胞的NF-κB信号通路干扰EV71复制。 展开更多
关键词 虎杖苷 白藜芦醇 NF-ΚB 肠道病毒71型/衣壳蛋白VP1
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MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制 被引量:4
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作者 王波 丁丽新 +7 位作者 邓娟 张浩 朱萌 易婷 刘静 徐萍 鲁凤民 彭宜红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期538-545,共8页
为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到E... 为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 肠道病毒71 半数组织培养感染量 MEK1/2特异性抑制剂U0126 细胞外信号调节激酶通路 衣壳蛋白VP1
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