补肾养血明目方含药肠吸收液对ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨补肾养血明目方含药肠吸收液对氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化应激损伤的保护作用。方法:采用不同浓度HQ诱导体外培养ARPE-19细胞氧化损伤,确定最佳造模浓度;制备补肾养血明目方含药肠吸收液。采用CCK-8法检测补肾养血明目方含药肠吸收液对ARPE-19细胞活力的影响,TUNEL技术观察其对细胞凋亡的保护作用,以及化学比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性。结果:当HQ浓度达到90μmol/L以上时,ARPE-19细胞活性明显降低。相较于模型组,预防给药时,浓度1%和2%补肾养血明目方含药肠吸收液对HQ损伤具有有显著保护作用(均P<0.01),0.5%和5%含药肠吸收液对HQ损伤有一定保护作用(均P<0.05);治疗给药时,1%和2%含药肠吸收液对HQ损伤有一定保护作用(均P<0.05)。与模型组相比,预防组的细胞凋亡率显著下降(P<0.01),治疗组的细胞凋亡率有一定下降(P<0.05)。抗氧化酶检测结果显示与模型组相比,预防组和治疗组均能明显提高SOD和GSH-Px含量(均P<0.05),其中预防组的作用更为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:补肾养血明目方对HQ诱导的ARPE-19细胞氧化损伤有保护作用,其作用机制可能与增加细胞内抗氧化酶的含量有关。

补肾养血明目方对丙烯醛致ARPE-19细胞氧化应激的干预作用

目的:利用丙烯醛建立ARPE-19细胞氧化应激模型,观察补肾养血明目方含药血清对丙烯醛诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用。方法:制备SD大鼠补肾养血明目方含药血清及空白血清,通过CCK-8检测不同浓度(2.5%,5%,10%,20%,40%)血清对细胞活性的影响,预先加入1.25%,2.5%,5%等不同浓度的含药血清处理24h后,将终浓度为75μmol/L的丙烯醛加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24h,CCK-8法检测含药血清对细胞活力的影响,DAPI染色观察细胞核形态。结果:CCK-8结果示:低浓度(2.5%,5%)血清对细胞活性影响不大(P>0.05),高浓度(10%,20%,40%)血清降低细胞活性(P<0.05),补肾养血明目方含药血清中、高剂量组细胞活性较空白血清组有统计学意义(P<0.05);结论:补肾养血明目方对丙烯醛诱导的ARPE-19细胞损伤有保护作用。

补肾养血明目方对ARPE-19细胞氧化损伤的保护机制研究

目的探讨补肾养血明目方对氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化损伤的保护机制。方法采用HQ制作ARPE-19细胞氧化应激损伤模型,分为正常对照组,模型组,空白肠吸收液组,预防给药组和治疗给药组。分别采用TUNEL技术观察细胞凋亡情况,免疫组化技术检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达情况,化学发光法测定细胞内ATP含量,荧光法测定活性氧(ROS)水平,化学比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与氧化损伤模型组相比,补肾养血明目方可减少ARPE-19细胞凋亡,抑制细胞内ATP的水平下降,减少ROS的生成,减少RPE细胞8-OHdG阳性表达率,提高抗氧化酶(SOD和GSH-Px)的含量。结论线粒体保护是补肾养血明目方发挥抗HQ诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的重要途径。

补肾养血明目方对实验性视网膜变性的干预作用

目的观察补肾养血明目方对实验性视网膜变性的干预作用,为临床应用提供客观依据。方法将碘酸钠腹腔注射诱导的视网膜变性C57BL/6N小鼠按随机数字表法随机分为3组:蒸馏水组,补肾养血明目方组和正常对照组,前两组自造模后第1天分别用蒸馏水、补肾养血明目方煎剂灌胃治疗,正常组小鼠不予造模,常规饲养。分别于治疗后7 d、14 d时采用视网膜电生理检查技术、病理学及TUNEL方法观察各组视网膜的生理功能和病变程度。结果治疗后7 d,3组小鼠的暗适应视网膜电图(d-ERG)、振荡电位(OPs)和明适应视网膜电图(l-ERG)的振幅相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。病理切片显示蒸馏水组及补肾养血明目方组的视网膜色素上皮(RPE)细胞数量均减少,外核层出现排列紊乱和波浪状改变,但补肾养血明目方组的病变程度较蒸馏水组轻,两组病变范围得分分别为3.18±0.603和3.64±0.924,组间差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL法检测补肾养血明目方组和蒸馏水组RPE细胞的凋亡率分别为36.2%和60.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后14 d,3组小鼠视网膜电图d-ERG、OPs、l-ERG间的振幅差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示2组造模小鼠的视网膜外核层细胞数目也减少,但病变的程度和范围较治疗后7 d时轻,补肾养血明目方组和蒸馏水组病变范围得分分别为2.09±0.539和2.73±0.647,2组相比差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL检测显示补肾养血明目方组RPE凋亡细胞数少于蒸馏水组,且外核层未见细胞凋亡现象,补肾养血明目方组和蒸馏水组凋亡率分别为28.8%和51.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾养血明目方对实验性视网膜变性有干预作用,可以减轻视网膜病变程度和减少视网膜色素上皮细胞和感光细胞的凋亡,其作用机制有待进一步探讨。

补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用。方法将ARPE-19细胞分为4组:正常组、模型组、空白肠吸收液组(对照组)、肠吸收液干预组(干预组)。建立氢醌(HQ)诱导的ARPE-19细胞氧化损伤模型。正常组细胞,在常规培养液中培养;模型组细胞,90μM的HQ作用24 h;对照组细胞,空白肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h;干预组细胞,补肾养血明目方含药肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活力,荧光分光光度法分析ARPE-19细胞线粒体膜通透转换孔(mPTP)的开放程度,ELISA技术测定细胞色素C(Cyt-c)含量的变化,TUNEL方法观察细胞凋亡情况。结果(1)RPE细胞活力:与模型组比较,干预组(浓度分别为1%,2%,5%)RPE细胞活力提高(t1%=-4.309,P=0.002;t2%=-9.503,P=0.000;t5%=-4.008,P=0.003),其中,浓度为2%的补肾养血明目方含药肠吸收液保护效果最好。(2)RPE细胞mPTP开放:与模型组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.521,P=0.001),对照组无明显变化(P>0.05);与对照组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.009,P=0.001)。(3)RPE细胞胞浆Cyt-c含量:与模型组比较,干预组ARPE-19细胞胞浆Cyt-c含量降低(t=2.968,P=0.018),对照组无明显变化(P>0.05);与对照组比较,干预组Cyt-c含量降低(t=2.717,P=0.026)。(4)RPE细胞凋亡:与模型组相比,干预组ARPE-19细胞凋亡率下降(t=2.360,P=0.029),对照组凋亡率无明显变化(P>0.05);与对照组相比,干预组细胞凋亡率下降(t=2.932,P=0.008)。结论补肾养血明目方含药肠吸收液可降低氧化损伤ARPE-19细胞mPTP的开放程度,抑制线粒体Cyt-c的释放,减少HQ诱导的ARPE-19细胞凋亡。线粒体保护是补肾养血明目方发挥抗HQ诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的重要途径。