补肾固表方对反复呼吸道感染小鼠Toll样受体4和CD4^+CD25^+foxp3^+调节性T细胞的影响

目的:探讨补肾固表方(Bushen Gubiao Recipe,BGR)对氢化可的松诱导的反复呼吸道感染(recurrent respiratory tract infection,RRTI)小鼠天然免疫Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)和CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+foxp3+regulatory T cell,CD4+CD25+foxp3+Treg)的影响及量效关系。方法:应用氢化可的松连续腹腔注射BALB/c小鼠14 d,作为RRTI肾阳虚模型,随机分为BGR大、小剂量组,核酪组,模型组,分别灌胃BGR大、小剂量煎剂,核酪口服液和蒸馏水,正常组灌胃蒸馏水,干预4周后,评价小鼠外观行为学,免疫组织化学SABC法检测肺组织TLR4和核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)p65的表达,荧光定量聚合酶链反应检测肺组织TLR4 mRNA的表达,流式细胞术检测血CD4+CD25+foxp3+Treg细胞水平。结果:BGR能显著改善RRTI小鼠外观和行为异常,提高肺气道TLR4、NF-κB p65免疫阳性表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),未见中药大、小剂量组间差异(P>0.05),核酪组未见明显变化(P>0.05)。大剂量BGR和核酪能够降低CD4+CD25+foxp3+Treg水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),中药大、小剂量组间未见显著差异(P>0.05)。结论:补肾固表方能够改善小鼠肾阳虚状态;通过上调TLR4/NF-κB信号通路,提高气道天然免疫功能;下调CD4+CD25+foxp3+Treg活性,增强辅助性T细胞(T-helper,Th)1型免疫反应,调节Th1/Th2平衡。

补肾固表方对复感儿Th细胞培养上清液中γ-干扰素与白细胞介素-4蛋白含量的影响

目的:观察补肾固表方对反复呼吸道感染间歇期患儿外周血Th1、Th2特征性细胞因子的影响。方法:采集20例复感儿治疗前后外周血,采用流式细胞仪分选CD4+T细胞,培养36h后,ABC-ELISA法检测其培养上清液中的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)蛋白含量,并与10例健康对照组进行比较。结果:补肾固表方治疗后IFN-γ升高(P<0.01),IL-4下降(P<0.01),与正常组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论:补肾固表方可使患儿IFN-γ含量增加,IL-4含量下降,使Th细胞因子的蛋白表达恢复正常。

补肾固表方对肺肾两虚小鼠模型免疫功能的影响

为探讨补肾固表方治疗小儿反复呼吸道感染的机理及其对免疫功能的影响 ,用小剂量氢化考的松制成肺肾两虚小鼠模型 ,随机分组 ,分别予补肾固表方、玉屏风散、核酪口服液、生理盐水灌胃。 2 8天后取胸腺 ,采集血液 ,测定胸腺指数、红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率、血清IL -2。结果 :补肾固表方和玉屏风散均能明显提高模型小鼠胸腺指数 (P均 <0 .0 1) ,与正常组相比无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,核酪口服液对小鼠胸腺指数影响不显著 (P >0 .0 5 )。补肾固表方能明显提高模型小鼠红细胞C3b受体花环率 (P <0 .0 0 1) ,与正常组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。玉屏风散和核酪口服液虽然也能明显提高模型小鼠红细胞C3b受体花环率 ,但与正常组相比差异显著 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。三种药物对红细胞免疫复合物影响均不显著 (P均 >0 .0 5 )。补肾固表方能明显提高肺肾两虚小鼠的血清IL -2 (P <0 .0 5 ) ,玉屏风散和核酪口服液则对其无明显作用 (P均 >0 .0 5 )。实验结果提示补肾固表方能调节机体免疫功能 。

补肾固表方对肾阳虚小鼠模型细胞免疫功能的影响

为探讨补肾固表方 (主要药物 :菟丝子、黄芪、党参、白术、防风、黄芩、柴胡、乌梅、麻黄根等 )治疗反复呼吸道感染 (复感 )的机理 ,将 60只C57BL雄性小鼠分为 5组 ,即 :正常对照组 (A)、模型组 (B)、补肾固表方组 (C)、玉屏风散组(D)、核酪口服液 (E)。除A组外 ,其余小鼠予腹腔注射氢化可的松 5 0mg·kg- 1 ·d- 1 连续 14d ,以此造成肾阳虚 ,模拟复感发病环境。第 15d起各组小鼠分别以相应药物灌胃 ,用量分别相当于临床的 3 0倍 ,连续 4周。之后处死小鼠 ,观察其细胞免疫功能的变化。结果 :注射氢化可的松后 ,小鼠胸腺指数、血清皮质醇、CD+ 2 、CD+ 3、CD+ 4、CD+ 8、CD+ 4/CD+ 8、NK均降低 ,用药组后各项指标有不同的程度的升高 ,其中C组更为明显。提示提高患儿的细胞免疫功能 。

补肾固表方治疗小儿反复呼吸道感染作用机理的实验研究

目的:探讨补肾固表方治疗小儿反复呼吸道感染(RRTI)作用机理。方法:选择雄性C57BL小鼠,用氢化可的松腹腔注射建立免疫功能低下(肾阳虚)小鼠模型,随机分为生理盐水组、补肾固表方组、玉屏风散组、核酪口服液组。观察胸腺指数、脾指数、体重、血清皮质醇、RBC-C3bR、RBC-IC、血清IL-2、NK、CD3+、CD2+、CD4+CD8+、CD4+/CD8+变化。结果:补肾固表方可明显提高免疫低下小鼠上述指标,作用明显优于玉屏风散、核酪口服液。结论:补肾固表方具有调节免疫系统多方面功能作用。

补肾固表法治疗小儿反复呼吸道感染脾肾两虚证

反复呼吸道感染(RecurrentRespiratoryTractInfections,RRTI)是目前儿科临床的常见病,其发病率还在呈逐年上升的趋势。西医多采用免疫增强剂(如左旋咪唑、胸腺肽等)治疗,疗效欠佳。有研究用特异性免疫的原理,研制减毒疫苗进行预防,虽有一定疗效,但因病毒种类太多且多变异,故临床实用价值受限。近20年来,中医药防治小儿反复呼吸道感染的研究取得了不少成果,为了集中展示这些研究成果,特约请国内著名中医儿科专家分别就各自在临床及科研基础上总结的相关经验撰文,以飨同道。发挥中医药调节整体、辨证论治的特色,因时、因病、因人制宜,防治儿童疾病,保障儿童健康成长,具有广阔的研究和发展空间。小儿反复呼吸道感染的防治研究,已经为此提供了一个典范。希望能藉此专栏进一步加强中医药在儿科领域的研究,推动中医儿科学在新时代更快地发展。

补肾固表方防治小儿反复呼吸道感染的临床观察

为了观察补肾固表方防治小儿反复呼吸道感染(RRTI)的临床疗效。采用随机对照方法,以补肾固表方为治疗药,槐杞黄颗粒为对照药,自服药开始连续观察6个月。结果,补肾固表方治疗RRTI“肺脾不足、肾气亏虚、余邪未尽”型的总有效率达85．3％,与槐杞黄颗粒相当(P>0．05);中医证候疗效91．2％,高于槐杞黄颗粒(P<0．05);对语声无力、腹胀腹痛、小便短黄、四肢欠温、舌苔异常等临床证候的改善,优于槐杞黄颗粒(P<0．05);患儿身高和体重增长速度、复感次数、疾病种类、疾病病程、病情程度、用药途径和给药时间等均得到改善,与槐杞黄颗粒相比,差异无显著性(P>0．05)。说明补肾固表方能明显改善复感儿间歇期不适症状,减少复感发病次数,减轻病情,缩短病程,改善给药时间和途径,促进生长发育,提高患儿的生活质量,治疗过程中未发现不良反应,是间歇期防治复感的有效方药。

补肾固表方对复感儿T细胞亚群、免疫球蛋白、NK、皮质醇的影响

目的:探讨补肾固表方防治复感的部分作用机制。方法:采用随机对照方法,以补肾固表方为治疗药,以槐杞黄颗粒为对照药,无菌采取复感儿治疗前后外周血,流式细胞术测定T细胞亚群(CD3、CD4、CD8)和自然杀伤细胞(NK),免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM),电化学发光法测定血皮质醇(Cor)和免疫球蛋白IgE。结果:复感儿CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM、NK均在正常范围波动,IgE及Cor高于正常水平;补肾固表方治疗后,CD3升高(P<0.01);CD4、CD4/CD8比值升高,CD8下降(P>0.05);IgG、IgA、IgM升高(P>0.05),IgE下降(P<0.01);NK升高(P>0.05);Cor下降(P<0.01);与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05)。结论:补肾固表方可使复感儿T细胞亚群、免疫球蛋白、自然杀伤细胞及皮质醇分泌保持在正常水平。

小儿补肾固表颗粒成型工艺研究

目的优选小儿补肾固表颗粒最佳成型工艺。方法将干膏粉与6种辅料分别按同一比例湿法制粒,以颗粒吸湿率、成型率、溶化率为指标,优选辅料种类。根据干膏得率、一日服用量和口感,确定辅料用量。按相应方法测定3批成品的水分、休止角、堆密度和临界相对湿度。结果小儿补肾固表颗粒最佳成型工艺为:按干膏粉与蔗糖粉1∶0. 68混匀,以88%(ml/ml)乙醇搅拌,用一号筛制粒,70℃干燥,即得。测得3批成品水分分别为4. 7%、3. 3%、3. 6%,休止角分别为36. 9°、35. 0°、36. 3°,堆密度分别为0. 52、0. 53、0. 52 g/ml、临界相对湿度分别为67. 0%、68. 0%、68. 0%。结论优选的小儿补肾固表颗粒成型工艺简便可行,为其中试生产和新制剂报批提供依据。

复感儿T细胞功能性极化状态及补肾固表方的干预作用

目的:观察反复呼吸道感染患儿T细胞功能性极化状态及补肾固表方的干预作用。方法:以复感儿治疗前后外周血及健康儿童外周血为研究对象,采用全血PHA刺激培养,四色荧光标记流式细胞术检测Th1(Tc1)及Th2(Tc2)百分比。结果:复感儿Th1较正常降低(P<0.05),Th2升高、Th1/Th2比值下降(P<0.01);Tc1降低、Tc2升高、Tc1/Tc2比值下降(P>0.05)。与治疗前相比,补肾固表方治疗后Th1升高(P<0.05),Th2下降、Th1/Th2比值上升(P<0.01);与正常组比较,无显著性差异(P>0.05)。与治疗前相比,补肾固表方治疗后Tc1升高、Tc2下降、Tc1/Tc2比值上升,除Tc2外,其余各项均无显著性差异(P>0.05);与正常组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:复感儿间歇期存在Th功能性极化异常,Th2占优势;Tc功能性极化无明显异常。补肾固表方可使Th1(Tc1)升高,Th2(Tc2)下降,Th1(Tc1)/Th2(Tc2)比值上升,明显逆转Th2反应模式。

补肾固表颗粒对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的观察补肾固表颗粒对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨其作用机制。方法将60只ICR雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、玉屏风组和补肾固表高、中、低剂量组,除空白对照组外,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺50 mg/(kg2d),连续3 d,建立免疫抑制动物模型,各给药组给予相应药物,连续28 d。末次给药后眼球取血,脱颈处死小鼠后无菌取出脾脏,MTT法检测脾淋巴细胞增殖,LDH法检测NK细胞活力,ELISA检测血清白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果与空白对照组比较,模型组小鼠脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞活力、IL-2和IFN-γ水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肾固表各剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞活力、IL-2和IFN-γ水平均明显增强(P<0.05,P<0.01,P<0.001),脾脏质量及营养状况亦有改善。结论补肾固表颗粒通过增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞转化和杀伤能力,提高血清IL-2和IFN-γ分泌水平,从而改善机体的免疫功能。

补肾固表颗粒对免疫低下小鼠血清IL-2、IFN-γ及NK细胞活性、脾淋巴细胞增殖的影响

目的探究补肾固表颗粒对免疫低下小鼠血清IL-2、IFN-γ、TNF-α、NK细胞及脾淋巴细胞增殖的影响。方法将60只ICR雄性小鼠随机分成6组,即空白对照组,模型组,玉屏风组,补肾固表颗粒高、中、低剂量组。除空白对照组外,其余各组腹腔注射环磷酰胺50 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续3 d,建立免疫抑制动物模型。各组给予相应药物灌胃,连续28 d。采用MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖情况,LDH法检测NK细胞杀伤活性,ELISA法检测血清IL-2和IFN-γ水平。结果与模型组比较,补肾固表颗粒可增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力(P<0.05),提高脾淋巴细胞杀伤率(P<0.001),使血清IL-2、IFN-γ和TNF-α含量显著升高(P<0.01)。结论补肾固表颗粒可以增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞转化和杀伤能力,提高血清IL-2、IFN-γ和TNF-α分泌水平,从而改善机体的免疫功能。

补肾固表方合黄芩咳喘敷贴散治疗小儿反复呼吸道感染临床观察

目的观察补肾固表方合黄芩咳喘敷贴散内外合治小儿反复呼吸道感染疗效。方法临床收集2015年5月至7月就诊于上海市中医医院反复呼吸道感染患儿90例,随机分为内治组、外治组和内外合治组各30例。内外合治组给予补肾固表方合黄芩咳喘敷贴散内外合治;外治组于夏季三伏天予黄芩咳喘敷贴散"冬病夏治"敷贴治疗;内治组给予补肾固表方内服治疗。共治疗6周。观察治疗前后患儿日常症状积分及临床疗效;检测患儿唾液SIgA水平异常情况。结果内外合治组临床治疗显效率为56.7%(17/30),显著高于外治组16.7%(5/30)和内治组23.3%(7/30),差异有统计学意义(P<0.017)。在对饮食异常和大便异常的治疗上,外治组日常症状积分高于内外合治组及内治组,差异有统计学意义(P<0.05);在对出汗异常的治疗上,内外合治组日常症状积分均低于外治组及内治组,差异有统计学意义(P<0.05)。内外合治组唾液SIgA异常率为54.2%(13/24),显著低于外治组90.5%(19/21),差异有统计学意义(P<0.017)。结论补肾固表方联合黄芩咳喘敷贴散内外合治或分开单独内治、外治对于反复呼吸道感染治疗均有效,其中内外合治疗效优于其他两者。

高效液相色谱法同时测定小儿补肾固表颗粒中6种成分的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定小儿补肾固表颗粒中6种成分(升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、补骨脂素和异补骨脂素)含量的方法。方法采用C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,DAD紫外检测器,检测波长254 nm和280nm。结果 6种成分的分离度良好且在各自浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r≥0.999 0),升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芩苷、补骨脂素和异补骨脂素的平均加样回收率分别为99.89%、101.86%、103.22%、99.59%、98.37%、98.12%,RSD分别为3.84%、2.80%、3.12%、4.29%、4.53%、4.87%。结论高效液相色谱法准确、简便、重复性好且灵敏度高,可用于小儿补肾固表颗粒中多成分的质量控制研究。

复感儿应用补肾固表方的效果观察及对免疫功能指标与T细胞亚群的影响

目的探讨复感儿应用补肾固表方的效果及对免疫功能指标与T细胞亚群的影响。方法选择我院收治的复感儿124例,随机分为对照组(62例,采用槐杞黄颗粒治疗)与研究组(62例,采用补肾固表方治疗)。观察两组的临床疗效。结果研究组治疗的总有效率为96.77%,高于对照组的85.48%(P<0.05)。研究组治疗后CD3^+、CD4^+、IgG、IgA、IgM水平均高于治疗前及对照组(P<0.05)。结论复感儿应用补肾固表方治疗具有显著的临床效果,可以在一定程度上调节免疫球蛋白指标与T细胞亚群。

补肾固表方合益气固表方治疗反复上呼吸道感染气血不足型疗效分析

目的:观察补肾固表方合益气固表方治疗反复上呼吸道感染气血不足型的疗效。方法:98例随机分为两组各49例。对照组用补肾固表方治疗,观察组用补肾固表方合益气固表方治疗。结果:观察组免疫功能(CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+)高于对照组(P<0.05),观察组发热、流涕、咳嗽等症状评分低于对照组(P<0.05)。结论:补肾固表方合益气固表方治疗反复上呼吸道感染气血不足型能有效提高免疫功能,改善临床症状。

补肾固表方对复感儿外周血Th1和Th2型细胞因子表达失衡的调节作用

目的探讨补肾固表方对复感儿外周血T辅助细胞1(Th1)和T辅助细胞2(Th2)型细胞因子表达失衡的调节作用。方法采集20例复感儿治疗前后外周血,采用流式细胞仪分选CD4+T细胞,提取细胞总RNA,应用实时荧光定量PCR术,检测T-bet、GATA-3、干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)基因表达量,并与10例健康对照组进行比较。结果复感儿T-bet mRNA和IFN-γmR-NA表达下降,GATA-3 mRNA和IL-4 mRNA表达升高,与正常组相比,有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。补肾固表方治疗后T-bet mRNA上调(P>0.05),IFN-γmRNA上调(P<0.01),GATA-3mRNA和IL-4 mRNA下调(P<0.01),与正常组相比,无显著性差异(P>0.05),其中尤以GATA-3mRNA和IL-4mRNA改变程度明显。结论复感儿间歇期存在Th转录因子及细胞因子基因表达失衡,呈Th2优势应答模式。补肾固表方可使T-bet mRNA和IFN-γmRNA表达量增加,GATA-3mRNA和IL-4 mRNA表达量下降,从转录因子及细胞因子基因水平恢复Th平衡。

虞坚尔治疗小儿反复呼吸道感染经验

反复呼吸道感染是儿科一种常见病和多发病。虞坚尔教授系上海中医药大学博士研究生导师,从事中医儿科临床、教学、科研工作20余载,经验丰富。首次提出补肾固表,创制补肾固表方治疗小儿反复呼吸道感染,取得较好疗效。