补肾强筋胶囊含药血清对IL-1β刺激的人原代软骨细胞的影响

目的研究补肾强筋胶囊含药血清对IL-1β刺激的人原代软骨细胞的影响。方法采用IL-1β(10 ng/mL)刺激人原代软骨细胞,并且加入不同浓度的补肾强筋胶囊含药血清处理24 h。然后用格式试剂法和酶联免疫法分别检测软骨细胞上清液中NO和PGE2水平,采用RT-q PCR检测软骨细胞COX-2、iNOS、MMP-1、MMP-13、TIMP-1 mRNA表达。结果补肾强筋胶囊含药血清可明显降低软骨细胞NO和PGE2水平,并显著降低COX-2、iNOS、MMP-1、MMP-13 mRNA表达,而对TIMP-1 mRNA表达无明显影响。结论补肾强筋胶囊含药血清对IL-1β刺激的人原代软骨细胞有一定保护作用,其作用机制与降低COX-2、iNOS、MMP-1、MMP-13 mRNA表达有关。

补肾化痰方含药血清对HepG2肝癌细胞增殖、迁移的实验研究

目的:研究补肾化痰方(BHF)对小鼠脏器指数及BHF含药血清对HepG2肝癌细胞增殖、迁移的影响。方法:将小鼠随机分为对照组、BHF高剂量组、BHF中剂量组、BHF低剂量组,灌胃7 d后,采血制备含药血清,处死后取材测定各组小鼠脏器指数。体外培养HepG2肝癌细胞,设置空白组、对照组、BHF高剂量组、BHF中剂量组、BHF低剂量组,每组设3个浓度(20%、10%、5%),3个复孔。各组加入相应的含药血清,培养24、48、72 h后,采用CCK8法测算细胞增殖抑制率。采用Transwell细胞培养24 h后镜下观察各组细胞的形态学改变。进行细胞划痕实验,检测各组HepG2细胞迁移的水平。结果:在20%血清浓度下,与对照组比较,24 h时BHF高、低剂量组细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05)。72 h时BHF各剂量组细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05),且高、低剂量组均高于中剂量组(P<0.05)。在10%血清浓度下,与对照组比较,24 h时BHF低剂量组细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05),72 h时BHF各剂量组细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05),且高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05)。在5%血清浓度下,与对照组比较,48 h时BHF高剂量组显著增加(P<0.05)。72 h时BHF各剂量组细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05),且高剂量组显著高于中、低剂量组(P<0.05)。与空白组比较,72 h时BHF高剂量组划痕迁移率显著降低(P<0.05)。结论:BHF含药血清对HepG2肝癌细胞增殖、迁移具有抑制作用,且高剂量组表现最优。

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。

补肾壮筋汤含药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响

目的探讨补肾壮筋汤含药血清对力学刺激诱导软骨细胞凋亡的影响。方法提取兔补肾壮筋汤含药血清,将软骨细胞培养基分为普通培养基组、空白兔血清培养基组(空白培养基组)及补肾壮筋汤培养基组(含药培养基组),对各组软骨细胞进行四点弯曲机械应力加载诱导凋亡。收集软骨细胞,流式细胞仪测定软骨细胞的凋亡率,并测定相应培养基中的IL-1β和NO的含量。结果含药培养基组中软骨细胞的凋亡[(19.55±7.98)%]比普通培养基组[(39.32±13.45)%]及空白培养基组[(37.87±9.67)%]低,差异有统计学意义(P<0.05);含药培养基组IL-1β和NO含量也低于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾壮筋汤含药血清对应力加载诱导软骨细胞的凋亡具有保护作用。

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。

补肾益精方含药血清对D-半乳糖致原代培养神经元损伤影响的研究

目的:探讨补肾益精方含药血清对D-半乳糖致原代培养神经元损伤的保护作用机制。方法:将培养第6天的原代神经元分成5组(空白组、D-半乳糖模型组和补肾益精方低、中、高剂量组),分别加相应药物处理后检测各组的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、NO含量,并用MTT法检测各组细胞活性。结果:补肾益精方高、中、低剂量组SOD、GSH-Px水平明显高于D-半乳糖模型组(P<0.01,P<0.001),而LDH、MDA和NO水平明显低于D-半乳糖模型组(P<0.001)。MTT检测细胞活性,补肾益精方各剂量组也明显高于D-半乳糖模型组(P<0.05,P<0.001)。结论:补肾益精方含药血清通过抑制D-半乳糖引起的神经细胞氧化应激,减轻其神经毒性作用。

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

【目的】探讨补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外成骨细胞分化的能力。【方法】用不同浓度的补肾活血汤含药血清干预BMSCs,7 d后应用4-硝基苯基磷酸二钠盐(PNPP)偶氮法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,21 d后行茜素红染色(ARS)观察钙盐沉积情况判定成骨能力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测Runx相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的基因表达以评估成骨能力。【结果】与空白血清组比较,补肾活血汤低、中、高剂量血清组BMSCs的ALP活性、茜素红染色面积及Runx2、OCN、OPN基因表达水平均升高(P<0.05或P<0.01)。【结论】补肾活血汤可促进BMSCs向成骨细胞分化,其机制可能与上调Runx-2、OCN、OPN表达有关。

补肾益精方含药血清对β-淀粉样蛋白干预血脑屏障体外模型渗透性的影响

目的:以Aβ1-42干预血脑屏障大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养模型,评价补肾益精方含药血清对该模型的渗透性的影响。方法:体外分别培养胚胎鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞,鉴定并测定跨内皮细胞电阻,利用Transwell细胞培养池,建立内皮细胞和星形胶质细胞共培养的血脑屏障体外模型,将5μmol/L Aβ1-42加入大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞非接触式共培养血脑屏障模型。分为Aβ1-42模型组和Aβ1-42加补肾益精方低、中、高剂量组,另设血脑屏障空白组,分别检测并比较各培养组荧光素钠的渗透性。结果:补肾益精方低、中剂量组荧光素钠的通透性明显低于Aβ1-42模型组(P<0.05)。结论:补肾益精方含药血清对Aβ1-42诱导的血脑屏障渗透性增加有抑制作用。

补肾益智方拆方含药血清保护Aβ25-35损伤NG108-15细胞的研究

目的 :研究中药补肾益智方拆方亚组的含药血清对AD细胞模型生长、分化等方面的影响 ,探讨该方药物的配伍规律。方法 :将补肾益智方拆分为补肾组、益气养血组和去冰片组 (即补肾组 +益气养血组 )等 3个亚组 ,连同原方组共 4组对大鼠灌胃给药分离药物血清。在含各组血清的培养液中 ,加入Aβ2 5 35 ,观察NG10 8 15细胞的生长状态、细胞增殖数、存活率 ,突起率及突起平均长度。结果 :与AD细胞模型组相比 ,补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制Aβ2 5 35对细胞的损伤作用 ,但各组情况有所不同。各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组 >补肾益智方组 >补肾组 >益气养血组。结论 :补肾药配伍益气养血药可增强对Aβ2 5 35损伤NG10 8 15细胞的保护作用 ,其中以补肾药的作用为主 ,方中冰片的功效有待进一步研究。

补肾方和柔肝方含药血清对软骨细胞增殖动力学研究

目的 :探讨补肾方和柔肝方对软骨细胞增殖的影响。方法 :补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞 ,测定 H3 -Td R的掺入量 CPM和 MTT法测定 OD值。结果 :通过 MTT法观察确定补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞观察点在第 5～ 7天 ;采血时间点确定为末次灌胃后 3 h,而血清浓度确定为 5 %为宜 ;采血时间点确定为 1 d～ 3 h,采血灌胃剂量确定为等效剂量 ;通过 H3 -Td R掺入 ,补肾方兔血清和柔肝方兔血清有明显促进 DNA的合成作用。结论

补肾壮骨方剂含药血清调控牙周膜干细胞增殖分化的效能研究

目的探讨补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用。方法采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同剂量的补肾壮骨方剂含药血清处理细胞,通过四唑盐(MTT)比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测补肾壮骨方剂含药血清对细胞体外增殖分化的影响。结果体外实验补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖有明显促进作用,且能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达。结论补肾壮骨方剂含药血清促进牙周膜细胞的增殖活性,可明显促进牙周膜细胞骨向分化。

补肾益精方含药血清对人精子离体质量的影响

目的研究补肾益精方含药血清体外对人精子运动能力和受精能力的影响。方法通过人精子与补肾益精方含药血清共培养,观察补肾益精方对人精子运动能力(精子运动CASA分析)、精子爬高试验的影响。结果含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度[精子运动路径速度(VAP)、精子轨迹速度(VCL)、精子前向运动速度(VSL)](P<0.01)、精子头部侧置振幅(ALH)和鞭毛摆动频率(BCF)及前向运动精子密度(P<0.05),提高精子爬高试验(P<0.01)。结论补肾益精方具有提高人精子离体质量的作用。

尿毒清胶囊含药血清对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的观察正常人的尿毒清胶囊含药血清对尿毒症血清刺激的人肾小管细胞(HK-2)表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法将体外培养HK-2细胞分为6组:正常对照组、5%尿毒症血清组、10%尿毒症血清组、5%尿毒清胶囊含药血清组、10%尿毒清胶囊含药血清组和蒙诺组,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定CTGFmRNA的表达量。结果各尿毒症血清组、含药血清组和蒙诺组CTGF mRNA的表达较正常对照组均有极显著性升高(P<0.01),其中10%尿毒血清组最高,与其它各组比较均有极显著差异(P<0.01),5%含药血清组与5%尿毒症血清组无差异(P>0.05),而10%含药血清组和蒙诺组较5%尿毒症血清组均有显著性下降(P<0.05),5%和10%含药血清组与蒙诺组之间比较差异均无显著性(P>0.05)。结论尿毒清胶囊抗肾纤维化作用的可能机制是抑制参与肾纤维化的肾小管细胞强致纤维化因子的产生。

补肾益智方含药血清对AD细胞模型保护作用的实验研究

目的:通过利用血清药理学方法观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,并评价其在研究中药药效学中的作用价值。方法:利用细胞计数、MTT方法确立Aβ25-35片段在建立细胞模型时的浓度及筛选含药血清作用的最佳浓度,分别观察5％、10％、20％正常大鼠(Rat)血清和补肾益智方含药血清培养液及不同浓度(0umol/L、5umol/L、10umol/L)Aβ25～35片段处理老年性痴呆细胞模型后的细胞存活率。结果:以上两种血清5％浓度组的细胞存活率均明显高于10％及20％浓度组(P<0.001.P<0.0001),10％与20％浓度组之间则差异无显著性意义;在5％血清浓度条件下,无Aβ及5μMAβ25-35浓度 组,含药Rat血清组细胞存活率均高于正常Rat血清组,差异有显著性意义(P<0.05)。在10μMAβ25-35浓度时两组组间差异无显著性意义。结论:选用5umol/L Aβ5-35及5％血清浓度条件时,建立NG108-15细胞老年性痴呆模型较为合适;补肾益智方含药血清能使该细胞模型细胞死亡率降低,表明该方能有效地保护Aβ片段对细胞的神经毒性作用。

补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞迁移及CXCR4表达的影响

【目的】探讨补肾活血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子受体CXCR4表达的影响。【方法】以大鼠BMSCs为研究对象,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。采用流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD34、CD11b;采用Transwell试验检测不同剂量组补肾活血汤含药血清对BMSCs迁移的影响;采用Western blot法检测细胞CXCR4的蛋白表达水平。【结果】细胞表面抗原标记结果显示所得细胞为高纯度BMSCs。Transwell结果显示,补肾活血汤含药血清可显著增强大鼠BMSCs的迁移能力;Western blot结果显示,高、中、低剂量组补肾活血汤含药血清呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达,与空白血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】补肾活血汤含药血清可促进BMSCs的体外迁移,并影响CXCR4蛋白的表达,其机制可能与上调CXCR4的表达、激活SDF-1/CXCR4轴有关。

温阳补肾方含药血清对破骨细胞凋亡率及RANK蛋白的影响

目的:探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞凋亡率及RANK蛋白的影响。方法:体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7向破骨细胞分化,分别用温阳补肾方低、中、高剂量含药血清和生理盐水血清干预,通过流式细胞术检测各组凋亡率,Western Blot检测各组RANK蛋白水平。结果:与空白对照组比较,温阳补肾方含药血清可诱导破骨细胞凋亡(P=0.000),降低破骨细胞RANK蛋白的表达(P=0.000)。结论:温阳补肾方含药血清可诱导破骨细胞凋亡,温阳补肾方高剂量效果最佳。

补肾安胎冲剂含药血清对复发性流产小鼠胎盘滋养细胞功能、血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察补肾安胎冲剂含药血清对复发性流产(RSA)小鼠胎盘滋养细胞功能、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGF-R1、VEGF-R2表达的影响,探讨其治疗RSA的作用机制。方法RSA模型小鼠(CBA/J×DBA/2)和正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)分离培养胎盘滋养细胞,将细胞分为正常对照组(正常妊娠小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、模型组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)和补肾安胎冲剂组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+最佳浓度补肾安胎冲剂含药血清),CCK8法检测胎盘滋养细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-qPCR检测细胞VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2 mRNA表达,Western blot检测细胞VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组胎盘滋养细胞增殖活力明显降低(P<0.05),S期细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05),VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,补肾安胎冲剂组胎盘滋养细胞增殖活力明显增加(P<0.05),S期细胞比例明显增加,G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05),VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论补肾安胎冲剂含药血清可增强RSA小鼠胎盘滋养细胞增殖活力,上调VEGF及其受体VEGF-R1、VEGF-R2表达,促进母胎界面血管新生,从而提高妊娠成功率。

补肾复方含药血清对骨吸收陷窝影响的时效关系研究

目的 探讨补肾复方用于破骨细胞药效观察的含药血清制备条件之一 (时效关系 )。方法 取体重 2 70± 2 0 g的 SD大鼠 ,雌雄各半 ,每组 10只 ,同等条件下制备补肾复方含药血清和对照血清 ,分别观察不同采血时间、不同喂药时间的含药血清对骨吸收陷窝数量的影响。结果 末次灌胃后 1h采血组的骨吸收陷窝数明显少于其它各组 (P<0 .0 5 ) ;灌胃 1d和 3d、 7d组比较其含药血清的药效无差异 ,而与对照血清差异显著。结论 补肾复方含药血清对破骨细胞骨吸收功能具有明显的抑制作用 ;补肾复方用于破骨细胞药效观察的大鼠含药血清制备条件之一为连续 2次 (间隔 2 h)灌胃、末次灌胃后