补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的血清药理学研究

【目的】采用血清药理学方法探讨补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。【方法】补肾健脾方低、中、高剂量(分别为30.2、60.4、120.8 g.kg-1)灌胃正常大鼠制备血清,将含药血清直接添加于体外培养的2.2.15细胞中,培养10 d,观察含药血清对2.2.15细胞HBV表面抗原(HBsAg)、HBV e抗原(HBeAg)分泌的影响。【结果】补肾健脾方经体内代谢后能抑制2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌,并呈一定的量效与时效关系。低剂量组服药后3 h 1:4稀释度含药血清的HBeAg抑制率最高,为97.91%;而中剂量组服药后3 h 1:2稀释度的含药血清则达到抑制HBsAg的饱和量,其抑制率为86.84%。【结论】补肾健脾方具有一定的体外抗HBV作用。

补肾方含药血清对软骨细胞增殖的影响

[目的]观察补肾方含药血清对白细胞介素1(IL-1)抑制软骨细胞增殖及诱导软骨细胞产生一氧化氮(NO)作用的 影响。[方法]新西兰兔4只,每只均灌服1.15 kg/L的补肾方2.5 mL,连续3 d,制备含药血清;取体外培养的兔软骨细 胞,分别加入含1、10、20 μg/LIL-1的培养液,确定IL-1对软骨细胞增殖的抑制浓度;补骨方组分别加入20μg/L的IL-1和 不同浓度的补肾方含药血清,模型组加入20 μg／L的IL-1及不同浓度的空白血清,培养3 d后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法 检测软骨细胞的增殖,Griess法检测NO的产生。[结果]选择20μg/L浓度的IL-1抑制软骨细胞的增殖;不同浓度的补肾方 含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用,抑制IL-1诱导软骨细胞产生NO。[结论]补肾方能直接拮抗或通过NO 介导间接拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用,这可能是补肾方治疗骨性关节炎(OA)的机制之一。

补肾益智方改善Alzheimer病模型大鼠的学习记忆能力

为观察补肾益智方对D -半乳糖合并Meynert基底核损毁的Alzheimer病 (Alzheimerdisease,AD)模型大鼠学习记忆的影响 ,分别用高、低剂量补肾益智方灌胃治疗 4周后 ,进行Morris水迷宫学习记忆检测 ,并与正常组、模型组和阳性对照组比较。结果显示 :补肾益智方高、低剂量灌胃组大鼠逃避潜伏期比模型组缩短(P<0 .0 5 ) ,原平台象限游泳时间及围绕平台 40cm环内游泳时间较模型组明显延长 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,与正常组和阳性对照药石杉碱甲灌胃组无明显差异 (P >0 .0 5 )。提示补肾益智方对AD模型大鼠的学习记忆能力障碍有改善作用。

补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢形态学的影响

目的:观察补肾助孕方对SD大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢的形态学变化,探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全性不孕症的机理。方法:将SD雌性大鼠随机分成空白组、模型组、西药组和中药补肾助孕方低、中、高剂量组,西药组及中药低、中、高剂量组均预防性用药2个性周期,然后按雌、雄比例为2:1配以同种雄鼠合笼,于妊娠第3d灌服米非司酮1mg/100g(10mg/kg),妊娠第5d颈总动脉取血3ml后处死,光镜观察子宫内膜及卵巢的形态,透射电镜观察卵巢黄体细胞的超微结构。化学发光法测定血清E2、P、LH、FSH的水平。结果:中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及子宫内膜腺体的增生和发育;中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比,能明显促进胚胎着床期卵巢黄体细胞的发育。结论:中药补肾助孕方通过促进子宫内膜的生长、促进子宫内膜腺体的发育,使腺体和间质发育同步;促进卵巢黄体细胞的增生和改善黄体细胞的结构,从而提高子宫内膜的容受性、提高黄体功能,有利于胚胎着床和发育。

补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨HIRA、ASF1a表达的影响

【目的】探讨补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨衰老信号分子HIRA、ASF1a表达的影响。【方法】选用雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和中药组;采用切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带法复制骨关节炎动物模型,术后第4周开始灌服补肾活血中药,模型组、假手术组灌服等量的生理盐水,分别于术后8、12、16周取材,采用骨关节炎软骨病理变化评价系统(OARSI)评价关节软骨的病变,运用western blot法检测HIRA、ASF1a表达水平。【结果】术后8、12、16周,模型组OARSI评分较假手术组显著升高,差异有显著性意义(P<0.01),中药组OARSI评分较模型组显著降低,差异有显著意义(P<0.05);HIRA、ASF1a在模型组中表达明显增强,补肾活血中药能下调HIRA、ASF1a的表达。【结论】补肾活血方可通过下调HIRA、ASF1a表达保护关节软骨。

补肾通络方对去卵巢大鼠破骨细胞组织蛋白酶K表达的影响

【目的】探讨组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)在骨质疏松症发病中的意义,观察补肾通络方对去卵巢大鼠破骨细胞CK表达的影响。【方法】选用30只雌性SD大鼠随机分成3组:假手术组、模型组及补肾通络方组(中药组,剂量为12.46 g.kg-1.d-1);后2组切除双侧卵巢,4周后中药组给予补肾通络方灌胃。分别于第6、12周测定各组大鼠全身骨密度(BMD),并采用Western blot及逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法测定体外分离培养破骨细胞中CK的蛋白及基因表达。【结果】体外分离培养椎骨来源的破骨细胞具有成熟破骨细胞的表型特征,去卵巢模型大鼠骨密度在时效上与CK的表达呈现负相关;补肾通络方以时效方式下调CK蛋白及CK mRNA的表达水平(均P<0.05)。【结论】CK的过度表达是导致骨密度下降的重要原因,是骨质疏松症发生的潜在危险因子;以时效方式下调CK蛋白及CK mRNA的表达进而治疗骨质疏松症可能是补肾通络方的作用机制之一。

补肾活血方对骨关节炎软骨细胞低氧诱导因子-1α mRNA的影响

【目的】观察补肾活血方对骨关节炎软骨细胞中低氧诱导因子(HIF)-1αmRNA表达的影响。【方法】32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、塞来昔布组(西药组),每组8只,按照Hulth法复制膝骨关节炎模型,取关节软骨,对关节软骨病理切片采用Safranin O染色,光镜下观察,进行Mankin评分,并采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组HIF-1αmRNA的表达。【结果】模型组Safranin O染色的Mankin评分较正常组显著升高(P<0.05);中药组Safranin O染色减少或缺失程度较西药组、模型组轻,差异有显著性意义(均P<0.05)。模型组HIF-1αmRNA表达较正常组升高,差异有显著性意义(P<0.01);中药组HIF-1αmRNA表达低于西药组、模型组,差异有显著性意义(均P<0.05)。【结论】补肾活血方可能通过抑制HIF-lαmRNA上调,从而延缓骨关节炎的发展。

补肾强督治偻方对脂多糖刺激的小鼠RAW264.7细胞炎性细胞因子表达的影响

【目的】研究补肾强督治偻方及其不同萃取成分对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎性模型的细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨其主要的抗炎有效成分。【方法】采用系统溶剂法萃取补肾强督治偻方各成分,体外培养RAW264.7细胞,以LPS(1μg/m L)诱导炎症模型,补肾强督治偻方总方及不同溶剂萃取成分干预24 h,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测细胞TNF-α、IL-1βm RNA的表达。【结果】LPS刺激的RAW264.7细胞的炎症细胞因子TNF-α、IL-1βm RNA表达均显著升高(P<0.05),水与正丁醇萃取的补肾强督治偻方成分均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞炎症模型TNF-α、IL-1βm RNA的表达(P<0.05),且呈一定的剂量依赖关系。【结论】水提取与正丁醇提取的补肾强督治偻方成分可能是其主要的抗炎有效成分部位,抑制炎症细胞因子基因表达可能是补肾强督治偻方治疗强直性脊柱炎的机制之一。

补肾益智方对卵巢切除大鼠海马长时程增强的影响

目的 观察补肾益智方对卵巢切除大鼠海马长时程增强(LTP)的影响。方法 3月龄SD雌性大鼠,随机分为假手术组、模型组、补肾益智方低剂量组、补肾益智方高剂量组、雌激素对照组,模型组行双侧卵巢切除术,补肾益智方高、低剂量组、雌激素对照组分别在卵巢切除术后予补肾益智方灌胃和结合雌激素皮下注射。运用电生理学检测方法,观察大鼠长期雌激素剥夺对大鼠海马长时程增强的影响以及中药补肾益智方的干预作用。结果与结论卵巢切除大鼠海马齿状回产生LTP的幅度明显低于卵巢保留组,并且维持的时间也较短;雌激素替代和补肾益智方高剂量组的LTP增幅和维持时间与卵巢保留组相比均无明显降低。说明二者使卵巢切除大鼠的突触易化机制得以保护和维持。

补肝养髓方对自发老年性痴呆模型认知功能的影响

目的:观察补肝养髓方对自发老年性痴呆模型学习记忆功能的影响。方法:昆明种自发老年性痴呆(记忆障碍)小鼠,随机分为4组,即空白对照组、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组,另设老年学习记忆正常组。分组给药,连续60天。用跳台实验(step-down test)检测学习记忆成绩。结果:补肝养髓法能显著改善自发老年性痴呆模型小鼠学习能力,并显著提高其记忆成绩,其作用呈现一定的量效相关关系。结论:补肝养髓方可显著改善自发老年痴呆模型小鼠的学习记忆障碍。