补肾活血复方调控Wnt通路抑制心力衰竭心肌损伤及细胞凋亡的机制研究

目的 研究补肾活血复方通过抑制Wnt信号通路(Wingless)抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡的分子机制。方法 将45只斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley, SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组。采用结扎冠状动脉配合力竭式游泳构建心力衰竭模型。造模成功后按照实验分组利用补肾活血复方或赖诺普利给予大鼠持续灌胃4周。治疗结束后,采用彩色超声多普勒心动图评价大鼠心功能,称取体质量(body weight, BM)及左心室湿质量(left ventricular wet mass, LVM),计算左心室质量指数(left ventricular mass index, LVMI),苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测心肌病理组织学损伤,蛋白质印迹(Western blot)检测BCL2凋亡调节器(BCL2 apoptosis regulator, Bcl-2)、BCL2相关X,凋亡调节器(BCL2 associated X,apoptosis regulator, Bax)、活化半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)、Wnt家族成员3A(wnt family member 3A,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Wnt3a、β-catenin mRNA表达。结果 与假手术组比,模型组的左心室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter, LVEDD)及左心室收缩末内径(left ventricular end systolic diameter, LVESD)、LVMI、Bax、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著上调,左室短轴缩短率(left ventricular short axis shortening rate, LVFS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、Bcl-2蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比,补肾活血复方组及赖诺普利组LVEDD、LVESD、LVMI、Bax、cleaved-caspase-3、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达显著下调,LVFS、LVEF、Bcl-2蛋白及mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组心肌细胞形态正常,肌纤维排列整齐,结构清晰;模型组心肌纤维紊乱,存在炎性细胞浸润;赖诺普利组及补肾活血复方组心肌损伤及炎症浸润明显改善。结论 补肾活血复方可通过抑制Wnt信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡。

基于Wnt通路研究补肾活血复方对心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化的影响

目的探讨补肾活血复方能否通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。方法将45只SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组,按照实验分组采用结扎左冠状动脉前降支配合力竭式游泳造成慢性心力衰竭模型,在结扎冠状动脉前后进行超声心电图检测,判断手术结扎成功后进行力竭式游泳,并行超声心动图检查,当左室射血分数(LVEF)<45%为造模成功。模型建立完成后采用补肾活血复方或赖诺普利或0.9%氯化钠溶液持续灌胃4周。治疗结束后,称取体质量(BM)、全心质量(HM)和左心室质量(LVM),计算全心质量指数(HWI)和左心室质量指数(LVMI),判断心肌肥厚程度;ELISA检测大鼠中脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)含量;马松染色检测心肌纤维化情况,并测定心肌间质胶原容积分数(CVF)、心肌细胞横截面积(CSA)、血管周围胶原面积(PVCA)变化;Western blot检测心肌组织中Ⅰ型胶原(Col I)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、蓬乱蛋白1(Dvl1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Real-time PCR检测心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达。结果与结扎前比,结扎后大鼠心电图显示T波倒置或低平,ST段较术前明显抬高(绝对值≥0.1 mV)。与假手术组相比,模型组、赖诺普利组及补肾活血复方组的LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均上调,模型组与赖诺普利组HWI升高,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血复方组HWI升高,差异无统计学意义。与模型组相比,赖诺普利组及补肾活血复方组的HWI、LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.01),赖诺普利组与补肾活血复方组比差异无统计学意义。马松染色检测结果显示,假手术组心肌细胞呈红色,结构完整,心肌纤维排列完整,心肌间质可见少量胶原蓝染;模型组心肌细胞数量变少,心肌间质排列松散且无规则,出现大量胶原纤维的增生,呈波状;与模型组相比,赖诺普利及补肾活血复方组心肌细胞排列相对整齐,心肌间质内胶原纤维增生减少。结论补肾活血复方通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。

补肾活血复方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心室重构及心肌和结肠组织AQP4表达的影响

目的观察补肾活血复方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心室重构及心肌和结肠组织水通道蛋白(AQP)4表达的影响,基于“肾藏精主水”理论探析其改善心力衰竭的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白组15只和实验组45只,实验组采用结扎左冠状动脉前降支联合力竭式游泳、饥饿建立心肌梗死后心力衰竭模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、托伐普坦组和补肾活血组,托伐普坦组灌胃托伐普坦溶液1.35 mg/kg,补肾活血组灌胃补肾活血复方煎液15.75 g/kg,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续4周。心脏彩超检测大鼠左心室结构[收缩末内径(ESD)、舒张末内径(EDD)]与功能[射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)],ELISA检测血清N端脑钠肽前体(NT-proBNP)含量,HE染色观察大鼠心肌组织和结肠组织形态,Western blot检测心肌组织和结肠组织AQP4蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠左心室ESD、EDD增加(P<0.05),EF、FS减小(P<0.05),血清NT-proBNP含量增加(P<0.05);梗死区心肌细胞坏死,存活心肌细胞代偿性肥大,心肌纤维化;结肠黏膜上皮排列紊乱,杯状细胞减少,大量淋巴细胞浸润;心肌组织AQP4蛋白表达升高(P<0.05),结肠组织AQP4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,托伐普坦组和补肾活血组大鼠左心室ESD、EDD减小(P<0.05),EF、FS增加(P<0.05),血清NT-proBNP含量减少(P<0.05);心肌纤维排列较整齐,部分心肌纤维断裂、坏死;结肠黏膜上皮相对完整、排列较整齐,杯状细胞较多,少量淋巴细胞浸润;心肌组织AQP4蛋白表达降低(P<0.05),结肠组织AQP4蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾活血复方可能通过下调心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌组织AQP4蛋白表达、上调结肠组织AQP4蛋白表达,减轻心肌与结肠黏膜损伤,改善心功能,延缓心室重构。本研究基于“肾藏精主水”理论揭示补肾活血复方治疗心肌梗死后心力衰竭的作用机制。

基于网络药理学和分子对接探讨补肾活血复方治疗心绞痛机制

目的通过网络药理学方法和分子对接试验来探讨补肾活血复方治疗心绞痛的有效成分、作用靶点及作用通路。方法首先利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)查找补肾活血复方的药物成分和药物靶点,并使用UniProt数据库对检索的药物靶点进行过滤筛选。然后通过GeneCards数据库、pharmGKB数据库、TTD数据库、Drugbank数据库检索来得到心绞痛的疾病靶点。最后将补肾活血复方的药物靶点与心绞痛的疾病靶点取交集,从而得到补肾活血复方治疗冠心病的作用靶点。利用Cytoscape3.9.0软件,构建“药物成分—作用靶点”网络关系图。在String网站绘制蛋白互作网络(PPI)并利用Cytoscape3.9.0软件联合R软件筛选PPI网络核心。对作用靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析。之后通过AutoDock软件完成分子对接验证,在Pymol软件中绘制可视化分子对接图。结果得到补肾活血复方治疗心绞痛的入血成分109个,其中槲皮素、木犀草素、山奈酚、汉黄芩素为关键成分。药物—疾病交集靶点149个。对交集靶点GO富集结果显示,生物过程(BP)主要涉及到主要条目包括对氧气水平的反应、脂多糖的反应、对营养水平的反应、对氧化应激的反应、对细菌来源分子的反应等。得到细胞组分(CC)99条,主要条目包括薄膜阀、膜微区、水泡腔、质膜外侧、分泌颗粒管腔等。得到分子功能(MF)195条,主要条目包括DNA转录结合因子结合、RNA聚合酶II特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活、儿茶酚胺结合性等方面。KEGG分析主要富集在脂质与动脉粥样硬化通路。分子对接试验显示,关键活性成分与核心靶点通过氢键相链接,能够形成稳定的空间结构。结论网络药理学和分子对接结果表明补肾活血复方治疗心绞痛的机制在于应用槲皮素、木犀草素、山奈酚、黄芩素等活性成分,以AKT1、MKPT1等为关键靶点,通过脂质和动脉粥样硬化通路、糖尿病并发症中的衰老信号通路等通路来发挥治疗作用,为深入探究补肾活血复方治疗心绞痛的作用机制提供了依据和参考。

补肾活血复方介导钙转运蛋白肌浆网上的心肌钙转运蛋白、受磷蛋白调节内质网应激缓解慢性心衰大鼠心肌损伤

目的观察补肾活血复方对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠钙转运蛋白肌浆网上的心肌钙转运蛋白(sarcoplasmic reticulum Ca 2+-ATPase2a,SERCA2a)、受磷蛋白(phospholamban,PLB)的影响,进一步探讨内质网应激与心肌损伤、心衰的相互关系。方法将雄性SPF级SD大鼠60只,随机选取15只为分成空白组,其余45只进行冠脉结扎后力竭式游泳构建CHF造型,再随机分配为心衰组、补肾活血复方组、卡托普利组。空白组与补肾活血复方组,分别应用等剂量的生理盐水与补肾活血复方(9.2 g/kg)灌胃,卡托普利组运用卡托普利(12.5 mg/kg)灌胃,各组干预4周后,运用动物心脏超声仪器记录心率、射血分数、收缩—舒张心室内径等。各组N段脑钠肽前体含量,苏木精—伊红染色观察大鼠心肌损伤情况,同时检测:SERCA2a、PLB。结果与空白组相比,模型组的SERCA2a含量明显降低。与模型组相比,空白组、补肾活血复方组、卡托普利组表达明显升高(P<0.01)。补肾活血复方组、卡托普利组两组相比差异无统计学意义。与空白组相比,模型组的SERCA2a含量明显升高;与模型组相比,空白组、补肾活血复方组、卡托普利组表达明显降低,补肾活血复方组、卡托普利组相比差异无统计学意义。结论补肾活血复方可以有效阻止心肌内质网应激反应,协调心肌细胞中Ca 2+平衡稳态,恢复CHF大鼠显著抑制CHF大鼠心肌组织中的内质网应激反应。补肾活血复方汤对心力衰竭大鼠心功能的改善可能来源于对SERCA2a、PLB蛋白的调控作用。

补肾活血复方含药血清对MSCs增殖和骨向分化影响的时效及量效研究

目的:筛选补肾活血复方含药血清促SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化最佳取血时间和浓度。方法:10月龄SD雌性大鼠30只,随机分为补肾活血复方低(11.6 g/kg)、中(34.8 g/kg)、高(104.4 g/kg)剂量组,每组10只。灌胃1次/d,连续12 d。分别于末次灌胃后的0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h取血,分离血清,然后将上述复方含药血清分别用不同添加浓度干预3月龄SD大鼠MSCs,以MTT法检测细胞增殖情况,以碱性磷酸酶(ALP)确定各组MSCs骨向分化情况。结果:补肾活血复方含药血清促MSCs增殖以复方低剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%的添加浓度为佳;促MSCs骨向分化以复方高剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%～30%的添加浓度为佳。结论:补肾活血复方含药血清能促进SD大鼠MSCs增殖及骨向分化。

补肾活血复方对亚急性衰老大鼠慢性脑缺血模型细胞因子及抗凝因子的影响

目的:观察补肾活血复方对亚急性衰老大鼠慢性脑缺血模型细胞因子及抗凝因子的影响,并探讨其可能治疗机制。方法:健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组、治疗高剂量组、治疗低剂量组、对照组5组,每组12只。用D-半乳糖(D-gal)诱导亚急性衰老大鼠模型,在此基础上永久性结扎其双侧颈总动脉,制备衰老慢性脑缺血大鼠模型。观察补肾活血复方对模型大鼠脑组织形态学及血样中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、睾酮(T)、纤维蛋白原(Fib)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、内皮素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF)、P-选择素(P-selectin)、一氧化氮合酶(NOS)等的影响。结果:模型组脑组织形态学呈缺血性改变,未见明显梗塞灶;模型组大鼠血清中SOD、NOS、T、AT-III降低(P<0.01),ET、TNF、MDA、Fib、P-selectin升高(P<0.01);补肾活血复方能升高SOD、NOS、T、AT-III(P<0.05),降低ET、TNF、MDA、Fib、P-selectin(P<0.01,P<0.05),且高剂量组(除MDA、ET外)优于低剂量组(P<0.01,P<0.05)。结论:补肾活血复方能纠正亚急性衰老大鼠慢性脑缺血后各种细胞因子及抗凝因子的失衡,其治疗机制可能是通过扩张脑血管,清除氧自由基,抗炎、抗凝等作用而多途径、多环节来实现的。

补肾活血复方干预klotho蛋白对大鼠慢性心力衰竭心室重构的影响

目的:通过实验观察补肾活血复方对心肌梗死后慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠心室重构的影响。方法:选用80只SPF级健康雄性SD大鼠,从中随机选取20只进行假手术,从中随机抽取15只作为假手术组,其余60只大鼠采用左冠状动脉前降支结扎法配合节食方法及力竭式游泳制备慢性心衰大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为中药组(15只)、西药组(14只)、模型组(14只)。模型组与假手术组给予常规等容积蒸馏水日1次灌胃,西药组按给予赖诺普利生药1.5 mg/(kg·d)日1次剂量灌胃,中药组给予补肾活血复方灌胃按1.5 mg/(kg·d)日1次灌胃。持续给药4周后,禁食不禁水12 h,取心肌组织及血浆:ELISA法检测BNP浓度,Western Blot、实时荧光定量PCR检测大鼠心肌组织中Klotho基因和蛋白的表达。结果:通过4周补肾活血复方的治疗后BNP浓度下降,补肾活血复方升高心肌组织klotho mRNA与蛋白表达的作用明显;电镜下进行心肌组织的观察证明补肾活血复方可起到抑制或逆转心室重构的作用。

补肾活血复方对照非甾体类抗炎药治疗膝骨关节炎的系统评价

膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是一种以关节软骨变性、破坏及骨质增生为病理变化,疼痛、关节僵硬、肿胀畸形等为临床表现的膝关节疾病,在我国患病率高达到18%,且随着年龄增长而升高[1-2]。目前,西医主要采用国际指南推荐[3]的非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)治疗,虽然疗效确切,但大量长期服用存在一定的不良反应[4]。

补肾活血复方对成骨细胞谷氨酸NMDA(N-methyl-D-aspartate)受体信号通路的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清OB增殖、ALP活性、NR1、NR2a、NR2d蛋白表达的影响。方法:(1)取1d龄、5d龄SD大鼠OB、OC,建立OB-OC共育体系;(2)MTT法检测OB增殖;ALP检测试剂盒检测ALP活性;Western-blot检测NR1、NAR2a、NR2d蛋白含量的情况。结果:补肾活血复方血清可增强OB增殖、提高ALP活性、促使OB NR1、NR2a、NR2d蛋白的含量增加。加入MK801降低OB增殖、ALP活性、OB NR1、NR2a、NR2d蛋白的含量。结论:补肾活血复方含药血清可通过谷氨酸NR信号通路促进OB的骨形成作用。

补肾活血复方对心肌梗死后心力衰竭大鼠CaMKⅡ的影响研究

目的:探究补肾活血复方对心梗后心衰大鼠钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响。方法:选取12周龄雄性Wistar大鼠80只,随机取20只为假手术组仅挂线,不结扎。另60只大鼠结扎左冠状动脉前降支,术后予喂食减半配合游泳,造模成功后随机分为模型组、中药组和西药组。西药组给予卡托普利,中药组给予补肾活血复方,正常组和模型组均给予同等剂量蒸馏水。用药4周后,超声检测后计算左心室舒张末期内径(LVEDD)、收缩末期左心室内径(LVESD)、左心室射血分数(EF)和左心室缩短分数(FS),酶联免疫法测定大鼠血清脑利钠肽(BNP)表达水平,免疫组化法检测大鼠心肌组织中CaMKⅡ表达水平。结果:用药4周后,与假手术组相比,模型组LVEDD、LVESD升高,EF、FS降低,血清BNP明显增高,心肌CaMKⅡ表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);和模型组相较,中药组和西药组大鼠LVEDD、LVESD下降,EF、FS增高,中药组、西药组血清BNP明显降低,心肌CaMKⅡ表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血复方对心肌中CaMKⅡ的表达有明显抑制作用,进一步延缓心室重构,改善慢性心衰。

基于“肾藏精起亟”理论观察补肾活血复方通过干预klotho改善心梗后心衰大鼠心肌纤维化

目的:从"肾藏精起亟"出发观察补肾活血复方对klotho蛋白的干预情况,以及进一步对心梗后心衰大鼠心肌纤维化的影响。方法:选取60只雄性WKY大鼠,从中随机选45只行左冠状动脉前降支结扎术,构造心肌梗死的大鼠模型,再将其随机分为Model组、BSHX组、Captopril组。剩下的15只作为Sham组仅挂线,不结扎。BSHX组给予模型大鼠补肾活血复方(9.2g·kg^(-1)·d^(-1)),Captopril组给予模型大鼠卡托普利(12.5mg·kg^(-1)·d^(-1)),Model组和Sham组同时给予等量的去离子水。用药28d后,使用超声检测并计算左室舒张末期内径(LVDD)、收缩末期内径(LVSD)、短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF),免疫印迹法(Western Blot)测定心、肾klotho蛋白及心肌Ⅰ型胶原蛋白(Col 1a1)的水平,HE染色观察心肌细胞纤维化的程度。结果:造模成功并药物干预28d后,与Model比较,BSHX组、Captopril组LVDD、LVSD、FS、EF明显改善(P<0.05)。与Sham组比较,Model组肾、心组织klotho蛋白浓度明显降低,心肌Col 1a1表达上升;与Model组比较,BSHX组、Captopril组肾、心klotho蛋白水平升高,心肌Col 1a1表达下调,以上检验结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血复方(BSHX)可能是通过调控klotho对心梗后心衰大鼠,下调了Col 1a1的表达,达到减轻心肌纤维化的结果,以此来改善心衰。

补肾活血复方治疗帕金森病轻度认知功能障碍疗效及对血浆磷脂的影响

目的观察补肾活血复方治疗帕金森病轻度认知功能障碍(PD-MCI)患者的疗效及对血浆磷脂(PLs)含量的影响。方法选择2016年8月—2018年7月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的126例PD-MCI患者,随机分为2组各63例,对照组采用多巴丝肼片联合盐酸多奈哌齐片治疗,观察组在此基础上辅以自拟补肾活血汤治疗,2组均连续治疗3个月。采用《统一帕金森病评分量表(UPDRS)》中的第二分量表(UPDRSⅡ)、第三分量表(UPDRSⅢ)评估2组患者治疗前后日常生活能力和运动功能,采用MMSE量表、MoCA量表评定认知功能障碍程度,检测2组患者治疗前后血浆PLs含量,记录2组治疗安全性。结果2组治疗后的UPDRSⅡ、UPDRSⅢ评分均明显降低(P均<0.05),且观察组治疗后的UPDRSⅡ、UPDRSⅢ评分均明显低于对照组(P均<0.05)。2组治疗后的MMSE和MoCA评分均明显升高(P均<0.05),且观察组均明显高于对照组(P均<0.05)。观察组治疗后的PLs含量低于对照组(P<0.05)。2组药物不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对PD-MCI患者辅以补肾活血复方治疗效果满意,有助于改善病情及认知功能,可能与降低血PLs含量有关。

补肾活血中草药复方对产蛋后期蛋鸡产蛋性能、血清指标、卵泡发育的影响

为探讨补肾活血中草药复方对产蛋后期蛋鸡的作用效果,选择健康且体重均匀的400日龄罗曼蛋鸡180只,随机分为6组(1个对照组和5个试验组),对照组饲喂基础日粮,试验组在罗曼蛋鸡基础日粮中添加0.2%、0.5%、1.0%、1.5%的补肾活血中草药复方和抗生素枸橼酸氯米芬,进行为期30 d的饲养试验,测定并分析生产性能、血清指标及卵泡发育情况。结果表明:在生产性能上,0.5%~1.5%的补肾活血中草药复方各组产蛋率与对照组相比提高3.70%~6.12%,差异显著(P<0.05);在血清指标上,0.5%~1.5%的补肾活血中草药复方组总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)水平显著提高(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05);同时显著提高了促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)等生殖激素水平(P<0.05)。在卵泡发育上,1.0%和1.5%的补肾活血中草药复方对各级卵泡发育作用明显。以上各组中草药用量普遍较大,低剂量(0.2%)的补肾活血中草药复方对蛋鸡产蛋性能、血清指标、卵泡发育作用不明显。枸橼酸氯米芬无抗氧化作用,但显著提高了FSH、LH、E2等生殖激素水平(P<0.05),促进了各级卵泡的发育(P<0.05)。综上,1.0%、1.5%补肾活血中草药复方对蛋鸡产蛋性能、血清抗氧化指标、生殖激素水平、卵泡发育作用明显,综合考虑,以1.0%的添加水平最好。

复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3调控hBMSCs成骨成脂分化

目的研究复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3调节人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cells,hBMSCs)成骨/成脂分化。方法不同浓度复方补肾活血颗粒含药血清干预hBMSCs,通过CCK8法检测细胞活力,ALP活性、茜素红染色观察hBMSCs成骨分化,油红O染色鉴定脂肪分化。Western blot检测成骨/成脂标志物蛋白表达。Western blot和qPCR检测Trb3蛋白和基因表达。Trb3 siRNA转染hBMSCs后通过Western blot观察成骨成脂相关因子蛋白表达情况。结果复方补肾活血颗粒含药血清以浓度依赖性促进hBMSCs增殖。复方补肾活血颗粒含药血清增强hBMSCs中ALP活性及矿化结节,上调Runx2、Osterix蛋白表达并抑制PPARγ、FABP4蛋白表达和脂质积累。机制研究发现,复方补肾活血颗粒含药血清促进Trb3表达,当内源性Trb3敲低时,逆转了复方补肾活血颗粒含药血清促进成骨分化抑制脂肪分化的作用。结论复方补肾活血颗粒含药血清通过Trb3以牺牲脂肪分化为代价,促进hBMSCs成骨分化。

基于Wnt/β-catenin信号通路的复方补肾活血颗粒对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨复方补肾活血颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨、成脂分化的影响。方法取骨质疏松症患者骨髓,体外培养BMSCs,将细胞分为空白组和含药血清低、中、高剂量组(2%、5%、8%),CCK-8法检测细胞活力,碱性磷酸酶染色、茜素红染色观察成骨分化潜能,油红O染色观察成脂分化潜能,RT-PCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(RUNX2)、Osterix(Osx)和成脂分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γmRNA表达,Western blot检测RUNX2、Osx、C/EBPα、PPARγ、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)5及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果与空白组比较,含药血清各剂量组细胞活力显著升高,其中以含药血清中剂量组效果最佳;含药血清各剂量组可促进BMSCs早期钙化和钙沉积形成,抑制脂滴形成;含药血清各剂量组BMSCsRUNX2、OsxmRNA和蛋白表达升高,C/EBPα、PPARγmRNA和蛋白表达降低,LRP5和β-catenin蛋白表达明显升高,其中含药血清高剂量组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论复方补肾活血颗粒含药血清对BMSCs成骨分化相关因子表达有明显促进作用,并可抑制BMSCs成脂分化,其机制与激活Wnt/β-catenin信号通路,进而调节成骨-成脂平衡有关。

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。

补肾活血复方对帕金森病轻度认知障碍的辅助治疗作用

目的：探讨补肾活血复方对帕金森病（Parkinson’s disease，PD）轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI）的辅助治疗作用，以及对PD-MCI患者血浆磷脂（phospholipids，PLs）含量的影响。方法收集2009年5月至2012年1月威海市立医院神经内科就诊PD-MCI患者39例，按照随机数字表法将患者随机分为对照组19例和治疗组20例，对照组采用常规药物治疗，治疗组在对照组治疗基础上加用补肾活血复方，60 ml/次，3次/d，30 d为1个疗程。分别于治疗前后12个月和18个月进行MoCA评测及PLs含量测定。结果治疗后12个月、18个月，治疗组MoCA评分[（19.86±2.58）分，（18.97±4.36）分]与对照组[（16.59±4.06）分，（14.99±3.72）分]比较，差异有统计学意义（t值分别为5.43、6.67，P＜0.05或0.01）；治疗后12个月、18个月，治疗组血浆PLs含量[（5.20±0.74）U、（5.09±0.94）U]较对照组[（6.77±1.01）U、（7.12±1.13）U]显著降低（t值分别为6.89、7.06，P＜0.01）。结论补肾活血复方辅助治疗可延缓PD-MCI患者认知功能下降速率，并能降低其血浆PLs含量，具有神经保护作用。

补肾活血复方促毛发生长的实验研究

目的:探讨补肾活血复方对SD大鼠脱发模型毛发生长、毛囊数及真皮浅层毛细血管的影响。方法:将SD大鼠100只用松香和石蜡混合物(1∶1)制造脱发模型,并随机分为补肾活血高、中、低剂量组,养血生发胶囊组(阳性对照组)和生理盐水组(阴性对照组),每天灌胃1次,每天观察大鼠拔毛区毛发生长情况。第21天用断颈法处死所有大鼠,在光学显微镜下观察皮损区毛囊及真皮浅层毛细血管数,并统计分析。结果:与阴性对照组比较,补肾活血高、中、低剂量组显示出鼠毛显著增长(P<0.05,P<0.01);补肾活血高剂量组毛囊数量显著增多(P<0.05);补肾活血高、中剂量组毛细血管数量显著增多(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾活血复方能促进毛细血管新生,改善局部血液循环,改善毛囊营养,刺激毛囊再生,最终达到促进毛发生长和再生的目的。

补肾活血复方对慢性心力衰竭大鼠心室重构及心肌NF-κB蛋白的影响

目的探讨补肾活血复方对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心室重构及心肌NF-κB蛋白表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组15只和实验组45只。实验组大鼠通过结扎冠脉左前降支联合力竭式游泳、饥饿,建立CHF模型。将CHF模型大鼠分为模型组、补肾活血组及赖诺普利组。补肾活血组灌胃补肾活血中药汤剂15.75 g/(kg·d),赖诺普利组灌胃赖诺普利混悬液1.8 mg/(kg·d),假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水。给药4周后,观察大鼠一般精神状态情况,采用心脏彩超测定大鼠左室收缩末内径(LVIDs)及舒张末内径(LVIDd),并计算左心室射血分数(LVEF)与短轴缩短分数(LVFS),Western blot法检测大鼠心肌NF-κB蛋白表达,HE染色观察大鼠左心室肌细胞形态。结果与模型组比较,补肾活血组和赖诺普利组大鼠心肌纤维排列尚整齐,较少见胞核固缩,少量炎性细胞浸润。与模型组比较,补肾活血组大鼠LVIDd[(6.00±0.58)mm比(6.99±0.90)mm]、LVIDs[(3.96±0.51)mm、(5.14±0.57)mm]降低,LVEF[(54.48±6.75)%比(30.28±4.85)%]、LVFS[(33.86±4.27)%比(26.10±4.96)%]升高,心肌NF-κB[(1.06±0.10)比(1.58±0.29)]蛋白表达降低(P<0.05)。结论补肾活血复方可抵抗CHF大鼠心室重构,改善心功能,发挥治疗CHF的作用,可能与下调心肌NF-κB蛋白表达有关。