补肾温阳化瘀方联合地诺孕素治疗肾虚血瘀型子宫腺肌病的临床研究

目的:探究补肾温阳化瘀方联合地诺孕素(DNG)治疗肾虚血瘀型子宫腺肌病(AM)的临床疗效。方法:将80例肾虚血瘀型AM患者随机分为对照组和治疗组各40例。对照组给予地诺孕素口服,治疗组在对照组基础上加用补肾温阳化瘀方,疗程均为3个周期。比较2组患者治疗后的痛经疼痛视觉模拟评分表(VAS)评分、中医证候评分、血红蛋白水平、子宫体积、CA125水平及证候疗效。结果:治疗后治疗组证候疗效的总有效率高于对照组(P<0.05);2组患者痛经VAS评分、中医证候积分、血红蛋白水平、子宫体积、CA125水平均较治疗前改善,且治疗组优于对照组(均P<0.05)。结论:补肾温阳化瘀方联合DNG治疗肾虚血瘀型AM有较好的临床疗效,可改善患者痛经程度、中医证候,月经量减少,改善贫血状态,缩小子宫体积及降低CA125水平。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症大鼠PKC信号通路的影响

目的:研究补肾温阳化瘀方治疗子宫内膜异位症(EMs)的作用,探讨其调控蛋白激酶C(PKC)信号通路的机制。方法:将50只SPF级8~10周龄雌性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和西药组,每组10只。采用自体移植法复制EMs大鼠模型,造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方低、高剂量及孕三烯酮灌胃,假手术和模型组灌胃蒸馏水,连续21 d。HE染色观察在位内膜及异位灶的病理形态改变;Western blot测定在位内膜及异位灶磷酸化蛋白激酶C的α亚型(p-PKCα)、蛋白激酶C的α亚型(PKCα)蛋白的表达水平。结果:模型组在位内膜和异位灶p-PKCα蛋白水平升高;给予补肾温阳化瘀方治疗后,p-PKCα的蛋白表达水平降低(P<0.05),PKCα的蛋白表达水平无明显变化。结论:补肾温阳化瘀方通过抑制PKC信号通路来治疗EMs。

补肾温阳化瘀方对肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症FoxO1介导的细胞自噬水平的影响

目的本研究旨在观察补肾温阳化瘀方对大鼠肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)模型的治疗作用,并以FoxO1介导的细胞自噬为切入点阐明其治疗EMs的可能作用机制。方法选择SPF级雌性SD大鼠100只,8-10周龄,随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组,每组20只。采用自体移植法结合冰浴复制肾阳虚血瘀型EMs大鼠模型。造模成功后,中药高剂量组和中药低剂量组给予补肾温阳化瘀方颗粒水溶剂灌胃,西药组给予孕三烯酮悬浮液灌胃,假手术组和模型组给予同体积纯净水灌胃,各组连续灌胃3周。给药结束后采用机械性电子测痛仪测定机械痛阈值,计算脏器指数;HE染色观察在位内膜及异位灶的病理形态学改变;免疫组化检测在位内膜及异位灶组织FoxO1、NF-κB、Beclin-1、LC3的蛋白定位表达;RT-PCR检测在位内膜及异位灶FoxO1、NF-κB、Beclin-1、LC3-I及LC3-II mRNA的表达水平;Western Blot测定在位内膜及异位病灶FoxO1、NF-κB、Beclin-1、LC3-I及LC3-II蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组FoxO1、NF-κB、Beclin-1、LC3-I及LC3-II蛋白表达及mRNA水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,中药高剂量组、中药低剂量组在位内膜及异位灶的FoxO1、NF-κB、Beclin-1、LC3-I及LC3-II蛋白表达及mRNA水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FoxO1、NF-κB及自噬相关因子Beclin-1、LC3参与EMs疾病的的发展并具有协同作用,补肾温阳化瘀方具有改善EMs的作用,这种作用可能与降低FoxO1、NF-κB的表达从而抑制细胞自噬水平有关。

补肾温阳化瘀方调节SIRT1-FoxO1介导的细胞自噬治疗子宫内膜异位症的机制研究

目的:探讨SIRT1-FoxO1介导的细胞自噬在子宫内膜异位症(EMs)发展中的机制以及补肾温阳化瘀方治疗EMs的疗效与可能的作用机制。方法:将12Z细胞分为CON组、DMSO组(+同体积DMSO)及EX527组(+SIRT1抑制剂),采用划痕实验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用免疫荧光及Western Blot分别检测SIRT1、FoxO1及自噬相关因子蛋白定位及含量表达。将100只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、中药+EX527组及EX527组。EMs造模成功后,中药组及中药+EX527组给予补肾温阳化瘀方灌胃,假手术组、模型组及EX527组同体积纯净水灌胃;中药+EX527组、EX527组给予腹腔注射EX527溶剂,其余各组给予腹腔注射同体积0.9%氯化钠溶液,连续3周。免疫组化与Western Blot分别检测SIRT1、FoxO1及自噬相关因子蛋白定位及含量表达。结果:细胞实验中,与CON组或DMSO组比较,EX527组的迁移能力和侵袭能力明显增强,SIRT1水平显著下降(P<0.05),FoxO1及自噬相关因子水平显著升高(P<0.05,P<0.01);动物实验中,与假手术组比较,模型组与EX527组的SIRT1水平显著下降(P<0.05),FoxO1及自噬相关因子水平显著上升(P<0.01),中药组及中药+EX527组的SIRT1水平显著升高(P<0.01),FoxO1及自噬相关因子水平则显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:SIRT1通过介导FoxO1负向调控细胞自噬水平,补肾温阳化瘀方可能通过上调SIRT1,抑制FoxO1介导的自噬,从而起到治疗EMs的作用。

补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症TRPV1及其致敏因子NGF的影响

目的研究补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)简称内异症,瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(transientreceptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)及致敏因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的影响,以探讨补肾温阳化瘀方治疗EMT疼痛的作用机制。方法将近交系BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、孕三烯酮组,每组15只。观察各组扭体反应,并采用酶联免疫法(ELISA)检测血清NGF的含量,采用免疫组化SP法及Western blot法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白的表达,采用Real-time PCR方法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1 mRNA的表达。结果模型组血清NGF含量显著高于假手术组(P<0.01),且与小鼠扭体次数呈正相关(r=0.574,P<0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组血清NGF含量显著下降(P<0.05);模型组子宫NGF、TRPV1蛋白及NGF、TRPV1 mRNA表达均高于假手术组(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白表达均显著降低(P<0.01),NGF、TRPV1 mRNA以中药高剂量组下降最为明显(P<0.01)。子宫及异位灶NGF与TRPV1蛋白及mRNA表达均呈正相关(P<0.01)。结论 TRPV1及致敏因子NGF共同参与了EMT疼痛的发生;补肾温阳化瘀方可通过降低NGF对TRPV1的上调作用从而发挥抑制EMT疼痛的作用。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症肾阳虚血瘀证模型大鼠HIF-1α、PHD2、VHL表达的影响

目的观察补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)肾阳虚血瘀证模型大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)、脯氨酸羟化酶2(proline hydroxylase2,PHD2)、希佩尔-林道抑癌基因(von Hippel Lindau disease,VHL)表达的影响,探讨EM发病机制及补肾温阳化瘀方治疗EM的作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。其中正常组、假手术组常规饲养,模型组、中药组、西药组采用"延长冰箱冷冻加冰水浸泡"30天,再结合"自体移植法"创建EM肾阳虚血瘀证模型。术后中药组给予补肾温阳化瘀方(3.33 g/mL)1mL灌胃,西药组予以孕三烯酮0.5 mg/(kg·d)灌胃,模型组、正常组、假手术组灌服等体积的生理盐水,共给药4周。观察大鼠异位灶大小及形态,放免法检测血清CA125、血浆环磷酸腺苷(cAMP)、血浆环磷酸鸟苷(cGMP)的表达,HE染色光镜观察子宫在位内膜及异位组织形态学的变化,免疫组化SABC法、Western blot法检测HIF-1α、PHD2、VHL蛋白表达及含量,RT-PCR方法检测HIF-1α、PHD2、VHL mRNA表达。结果模型组大鼠异位灶生长明显,中药组、西药组治疗后,异位灶体积明显缩小。与正常组及假手术组比较,模型组CA125及cGMP水平明显升高,cAMP水平明显降低(P<0.05);HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均升高(P<0.05),PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组及西药组CA125及cGMP水平明显降低,cAMP水平明显升高,HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均降低,PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与中药组比较,西药组PHD2蛋白含量更高(P<0.05)。HIF-1α与PHD2呈负相关(r=-0.799,P=0.00),HIF-1α与VHL呈负相关(r=-0.625,P=0.003)。结论补肾温阳化瘀方可有效治疗EM,其作用机制可能与降低HIF-1α、CA125、cGMP含量,上调PHD2、VHL、cAMP表达有关。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型小鼠BK/BKB1R、PGF2α水平的影响

目的探讨补肾温阳化瘀方干预子宫内膜异位症痛经的作用机制。方法将75只BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组与西药组,每组15只。除假手术组外,其余各组小鼠均采用手术移植法复制子宫内膜异位症痛经模型。造模同时中药高、低剂量组分别每日予补肾温阳化瘀方61.67、15.42g/kg和戊酸雌二醇0.5 mg/kg,西药组每周2次予孕三烯酮0.4 mg/kg和戊酸雌二醇0.5mg/kg。于造模12天腹腔注射缩宫素后观察各组小鼠扭体反应,测量异位灶体积,检测小鼠血清血管舒缓激肽(BK)、前列腺素F2α(PGF2α)含量,免疫组化法和western blotting法检测子宫和异位灶缓激肽B1受体(BKB1R)蛋白表达,RT-PCR法检测子宫和异位灶BKB1R mRNA的表达。结果造模第12天,除假手术组外,其余各组小鼠均成功诱发扭体反应并见异位灶。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组与西药组扭体潜伏期均明显延长、扭体次数显著减少、异位灶体积减小(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、中药低剂量组、西药组血清BK、PGF2α含量显著下降,子宫及异位灶BKB1R蛋白及其mRNA表达显著降低(P<0.01),且中药高剂量组子宫内膜异位灶BKB1R mRNA明显低于西药组(P<0.01)。结论补肾温阳化瘀方能有效防治子宫内膜异位症,其机制可能与降低血清BK及PGF2α含量、抑制BKB1R蛋白及其mRNA的表达有关。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症模型痛经的影响

目的:探讨补肾温阳化瘀方对小鼠子宫内膜异位症痛经模型的作用及对血清E2、PGF2α的影响。方法:实验分为假手术组、模型组、补肾温阳化瘀方61.67g/kg组、补肾温阳化瘀方15.42g/kg组、孕三烯酮组,观察各组扭体反应、异位灶体积,并采用放射免疫法及ELISA法检测各组血清E2、PGF2α的水平。结果:与模型组相比,补肾温阳化瘀方61.67g/kg组、补肾温阳化瘀方15.42g/kg组、孕三烯酮组扭体次数明显减少,扭体潜伏期明显延长,异位灶体积明显示减小;与假手术组相比,模型组血清中E2、PGF2α含量显著升高,与模型组相比,补肾温阳化瘀方61.67g/kg组、补肾温阳化瘀方15.42g/kg组、孕三烯酮组血清E2水平显著下降,PGF2α水平亦显著下降。本实验补肾温阳化瘀方剂量范围15.42g/kg^61.67g/kg,随着剂量增加,药物效果未见增加,因此15.42g/kg为最佳有效剂量。结论:补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症痛经模型诱发的扭体反应有抑制作用,并且能够降低子宫内膜异位症痛经模型血清E2、PGF2α的含量,推测补肾温阳化瘀方可能通过对E2、PGF2α的影响,缓解内异症痛经的发生,对内异症痛经有一定的保护作用。

基于miR-221介导的细胞自噬探讨补肾温阳化瘀方治疗肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症的作用机制

目的:探讨补肾温阳化瘀方治疗大鼠肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症(EMs)的疗效及可能的作用机理。方法:将100只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组,每组20只,肾阳虚血瘀组EMs造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方高、低剂量及孕三烯酮灌胃,假手术组和模型组纯净水灌胃,连续3周。Western blot检测Beclin-1、P62蛋白表达;RT-PCR检测miR-221及Beclin-1、P62 mRNA水平。结果:与假手术组比较,模型组在位内膜的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.01,P<0.05),P62蛋白及mRNA水平显著下降(P<0.01,P<0.05),miR-221水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组在位内膜及异位灶的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著下降(P<0.05),P62蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.01,P<0.05),miR-221水平显著下降(P<0.01,P<0.05)。miR-221与Beclin-1 mRNA呈现正相关,与P62 mRNA呈现负相关,相关系数(r)分别为0.515、-0.796(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾温阳化瘀方能够通过调节自噬基因Beclin-1、P62活性从而抑制细胞自噬水平,其机制可能与在转录水平下调miR-221有关。