补肾益气行血法对人软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响

目的:观察补肾益气行血中药复方含药血清对MMP-13、Ⅱ型胶原表达的调控作用及相关意义。方法:将体外培养的人软骨细胞随机分为5组:对照组(正常血清)、低剂量IL-1组(10μg/ml IL-1β)、高剂量IL-1组(100μg/ml IL-1β)、低剂量IL-1加中药组(10μg/ml IL-1β加含药血清)、高剂量IL-1加中药组(100μg/ml IL-1β加含药血清),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR,比较补肾益气行血中药复方含药血清在不同剂量IL-1β作用下对MMP-13、Ⅱ型胶原表达的调控作用。结果:中药含药血清组均有抑制MMP-13的表达作用,对照组表达阳性强度高于中药组,中药组Ⅱ型胶原表达阳性强度高于对照组,统计学均有明显差异。不同剂量IL-1组均能促进MMP-13的表达,对照组阳性强度低于IL-1组,IL-1组Ⅱ型胶原表达低于对照组,统计学均有明显差异。结论:体外条件下,补肾益气行血中药含药血清能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达;能对抗MMP-13抑制软骨细胞Ⅱ型胶原合成,具有保护软骨细胞的作用。

补肾益气行血方药对人类骨关节炎软骨细胞II型胶原和一氧化氮合酶的影响

目的:观察补肾益气活血法方剂——骨炎定对一氧化氮抑制离体人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响,探讨其保护软骨细胞的作用途径。方法:髋关节炎行关节置换术中获取离体股骨头关节软骨,行软骨细胞分离培养传代,通过设立空白血清对照组,IL-1组、IL-1加NAME组、IL-1加骨炎定方含药血清组,运用逆转录聚合酶链技术检测对软骨细胞一氧化氮合酶(iNOS)和II型胶原的影响。结果:IL-1组、IL-1加NAME组、IL-1加骨炎定方含药血清组iNOS mRNA的表达均明显增加,但IL-1加骨炎定方含药血清组和IL-1组相比,可以抑制iNOS mRNA的表达,和IL-1组相比,有明显差异(P<0.05),和IL-1组相比,3组(对照组、IL-1加NAME组、IL-1加骨炎定方含药血清组均明显增加II型胶原的表达,但各组间无差异(P>0.05)。培养细胞上清液中亚硝酸盐含量测定显示:关节软骨细胞几乎不产生NO,但在IL-1刺激下可产生NO,而加入NO合酶抑制剂后,可部分抑制NO产生,IL-1加骨炎定方含药血清组也显示出可以部分抑制NO的产生,其作用与NO合酶抑制剂NAME统计学处理没有明显差异。结论:骨炎定方可以抑制iNOS的表达,增加II型胶原的表达,这种作用与使用一氧化氮合酶抑制剂得出的结果没有明显差异,可能是其保护软骨细胞作用途径之一。

骨炎定方对一氧化氮抑制人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响

[目的]观察骨炎定方对一氧化氮抑制离体人骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响,探讨中医药补肾益气行血法保护软骨细胞的作用途径。[方法]髋关节炎行关节置换术中获取离体股骨头关节软骨,行软骨细胞分离培养传代,通过设立空白血清对照组,IL-1组、IL-1加NAME组、补肾益气行血法中药骨炎定方含药血清组加入传代软骨细胞,采用MTT法于不同时间测定软骨细胞增殖影响,并运用逆转录聚合酶链技术检测对软骨细胞一氧化氮合酶(iNOS)和Ⅱ型胶原mRNA的影响。[结果]骨炎定方含药血清组在不同时间段均有促进软骨细胞增殖的作用。和对照组相比,3组(IL-1组、IL-1加NAME组、IL-1+骨炎定方含药血清组)均明显了增加iNOS mRNA的表达,但加入NAME组及骨炎定方含药血清组和IL-1组相比,可以抑制iNOS mRNA的表达,和IL-1组相比,有明显的差异性(P<0.05)。和IL-1组相比,3组(对照组、IL-1加NAME组、IL-1+骨炎定方含药血清组)均明显增加了Ⅱ型胶原mRNA的表达,但各组间无差异(P>0.05)。培养细胞上清液中亚硝酸盐含量测定显示:关节软骨细胞几乎不产生NO,但在IL-1刺激下可产生NO,而加入NO合酶抑制剂NAME后,可部分抑制NO产生,骨炎定方含药血清组也显示出可以部分抑制NO的产生,其作用与NO合酶抑制剂NAME统计学处理没有明显差异。[结论]骨炎定方可以促进人软骨细胞增殖、能抑制iNOS的表达,增加Ⅱ型胶原的表达,这种作用与使用一氧化氮合酶抑制剂得出的结果没有明显差异,可能是中医药补肾益气行血法保护软骨细胞作用途径之一。