补肾益髓中药血清孵育骨髓间充质干细胞移植防治缺血性脑血管病的理论探讨

脑是肾精充骨生髓所化,是人体生命活动的主导。中医学认为补肾益髓法是治疗缺血性脑血管病(isehemic cere-bral vaseular disease,ICD)的重要法则,而骨髓间充质干细胞((bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植也起到重要作用。所以用补肾益髓中药联合BMSCs移植成为重塑ICD的重要途径之一。补肾益髓中药血清孵育BMSCs移植可增加缺血脑组织中生长因子和神经营养因子的表达,促进脑功能恢复,使中医未明的机理得以阐释,西医的局限得以系统整体,有利于医学的进步和发展,开拓新的治疗方法。

补肾益髓中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达,探讨绝经后骨质疏松症(Postmenopausal Osteoporosis,PMOP)的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法去卵巢复制骨质疏松症大鼠模型,实验设正常组、模型组、假手术组、补肾益髓中药复方组、钙尔奇D组、骨疏康组。术后7d开始灌胃给药12周。应用XR-36型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,应用OLYMPUS BX51显微镜观察股骨头石蜡切片HE染色显微形态结构,实时定量RT-PCR及Western Blot检测骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达。结果 (1)与正常组、假手术组比较,模型组股骨骨密度明显降低(P<0.001、P<0.05),骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.001)。(2)与模型组比较,补肾益髓中药复方组、骨疏康组股骨骨密度明显升高(P<0.05),补肾益髓中药复方组(P<0.001)、钙尔奇D组(P<0.05)、骨疏康组(P<0.01)骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达明显上调。(3)与钙尔奇D组、骨疏康组比较,补肾益髓中药复方组骨组织Runx2 mRNA(P<0.01、P<0.05)及蛋白(P<0.001)表达均明显升高。(4)股骨头石蜡切片HE染色显微形态结构:与正常组、假手术组比较,模型组骨小梁形态结构完整性差,有些部位破坏、断裂,余留骨重建空间较多;各给药组骨小梁形态结构均改善,结构较紧密,余留骨重建空间减少,其中以补肾益髓中药复方组改善最明显。结论骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达降低可能是PMOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过上调骨组织Runx2 mRNA及蛋白表达有效防治PMOP,其作用优于钙尔奇D、骨疏康。

补肾益髓中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法:肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组,造模及灌胃给药9周。应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及Western Blot检测肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低(P<0.01),肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高(P<0.01),肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论:肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达降低可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过上调肾组织Msx2 mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。

补肾益髓中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达的影响

目的观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠肾组织OsterixmRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组。造模及灌胃给药9周。应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及WesternBlot检测肾组织OsterixmRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低(P<0.01)、肾组织OsterixmRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高(P<0.01)、肾组织OsterixmRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论肾组织OsterixmRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过下调肾组织OsterixmRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。

补阳还五汤加补肾益髓中药治疗中风病的临床观察

目的:探讨补阳还五汤加补肾益髓中药治疗中风病的临床疗效。方法:选取2018年1月~2019年1月在我院接受治疗的60例中风患者作为研究对象,随机分为两组。对照组采取西医基础治疗,观察组采取补阳还五汤加补肾益髓中药治疗。比较两组治疗效果、治疗前后生活活动能力、神经功能及不良反应情况。结果:两组治疗后NIHSS评分均明显下降,且观察组更为显著(P<0.05);观察组治疗有效率为96.67%;对照组为70.00%,差异显著(P<0.05);治疗后两组Barthel指数评分均较干预前显著升高,观察组评分显著高于对照组(P<0.05)。结论:补阳还五汤加补肾益髓中药能够有效改善中风治疗效果,有助于神经功能恢复,提高生活能力,值得临床推广。

“肾藏精生髓主骨”藏象理论研究——肾虚骨质疏松症大鼠转化生长因子相关基因及蛋白表达的异常

目的:依据中医学"肾藏精生髓主骨"、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的藏象理论,研究肾虚骨质疏松症大鼠的相关病理机制以及补肾益髓中药调控作用机制。方法:采用去卵巢造模方法建立肾虚骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型空白组、补肾益髓中药低剂量组、补肾益髓中药高剂量组、补脾中药对照组、盖天力钙片对照组、骨疏康颗粒对照组;给予补肾益髓中药干预12w;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,以RT-PCR法检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1mRNA的表达,以WesternBlot法检测股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型空白组骨、肾组织TGF-β1、TIEG1mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而下丘脑组织明显升高(P<0.01)。用药12w后,与模型空白组比较,补肾益髓中药高剂量组可明显提高股骨头骨密度,明显优于补脾组中药(P<0.01)。补肾益髓高、低剂量组、盖天力组、骨疏康组可明显上调骨、肾组织TGF-β1mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达水平(P<0.01;P<0.05);补肾益髓高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显下调下丘脑组织TGF-β1mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达的表达水平(P<0.01,P<0.05)。结论:肾虚骨质疏松症病理机制之一在于TGF-β1与TIEG1mRNA及蛋白表达异常,并可能存在下丘脑-肾-骨的反馈调节机制,揭示骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的部分生物学依据;补肾益髓中药可以有效地防治该病症,对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用,从而阐明中医学"肾藏精生髓主骨"藏象理论对临床实践的指导意义。

中西医联合诱导大鼠BMSCs增殖、骨向分化能力的研究

目的:探讨补肾益髓中药含药血清、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、骨向分化能力的研究。方法:采用全骨髓贴壁法分离及培养大鼠BMSCs。补肾益髓中药含药血清、TGF-β1及BMP-2的制备并确定最佳促BMSCs增殖、骨向分化添加浓度。实验分组:空白组、血清组、TGF-β1组、血清+TGF-β1组、BMP-2组、血清+BMP-2组、TGF-β1+BMP-2组、综合诱导组,酶联免疫分析检测Coll、BGP浓度。结果:TGF-β1最佳促BMSCs增殖浓度为10 ng/m L,BMP-2最佳促BMSCs骨向分化浓度是40 ng/m L;综合诱导组能明显促进大鼠BMSCs的I型胶原(Coll)、骨钙素(BGP)的表达量。结论:中西医联合诱导能够显著提高大鼠BMSCs增殖、骨向分化能力。