补阳还五汤类方对氧化应激PC12模型细胞CDK5及凋亡因子的影响

目的观察补阳还五汤类方对氧化应激模型细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及凋亡因子的影响。方法以0.3 mmol·L^-1的H 2O 2与PC12细胞共同作用2 h,成功复制脑缺血体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分成正常组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。酶联免疫法检测胞外培养液中L-LDH的含量和胞内GSH的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量,细胞免疫荧光法检测胞内CDK5、Tau、Bax、Bcl-2蛋白的表达,qPCR法检测胞内凋亡因子caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果补阳还五汤类方能有效降低氧化应激模型细胞培养液中L-LDH的含量,增加胞内GSH、降低胞内ROS、抑制模型细胞内CDK5和Tau蛋白的过表达,下调凋亡因子caspase-3和Bax/Bcl-2。结论补阳还五汤类方可能通过CDK5信号转导途径有效抑制神经细胞凋亡,对脑缺血后神经细胞的损伤发挥保护作用。

补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激损伤模型凋亡与自噬的调控

目的从凋亡与自噬的调控探讨补阳还五汤类方提取物对PC12细胞氧化应激模型的保护机制。方法以不同浓度H2O2刺激PC12细胞制备不同损伤程度的氧化应激模型,采用MTT法确定补阳还五汤类方提取物对氧化应激损伤初期和加剧期发挥保护作用的有效浓度,流式细胞术和TUNNEL法检测细胞凋亡情况,透射电镜和mRFP-GFP-LC3腺病毒双标法检测细胞自噬情况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)与自噬相关蛋白(Beclin1、LC3A和LC3B)的表达。结果分别以0.5、2.0 mmol/L H2O2处理PC12细胞制备氧化应激损伤的初期模型和加剧期模型;与对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,自噬程度加剧,Bax/Bcl-2比例增加,Beclin1和LC3B表达上调,LC3A表达下调(P<0.05);与氧化应激损伤初期的模型1组比较,补阳还五汤类方提取物均能下调Bax/Bcl-2,抑制凋亡率,并一定程度上调Beclin1和LC3B/LC3A的表达,激活自噬(P<0.05);当氧化应激损伤程度加剧时,模型细胞中出现较高水平的凋亡与自噬,此时,两方则通过抑制凋亡和降低自噬,共同发挥保护作用。结论补阳还五汤类方提取物可通过对凋亡与自噬的交互动态调控对不同程度损伤的氧化应激模型细胞挥发保护作用。

补阳还五汤类方对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症的保护作用

目的:探究补阳还五汤类方对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)炎症的保护作用。方法:建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,随机将大鼠分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(4.11g·kg^(-1)·d^(-1))、养阴通脑颗粒组(3.25g·kg^(-1)·d^(-1))和脑心通胶囊组(0.15g·kg^(-1)·d^(-1)),造模结束后灌胃给药,24h后进行神经功能评分;TTC染色测定大鼠脑梗死体积;HE染色观察大鼠海马CA1区病理状态改变;ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量变化;Western blot和免疫组化法检测TLR4/NF-κB信号通路中关键蛋白、TLR4、IκBa、NF-κB p65的表达。结果:与模型组比较,补阳还五汤类方均可改善大鼠的神经功能缺损现象(P<0.05)和海马CA1区的病理状态,减小大鼠脑梗死百分比(P<0.01),抑制小胶质细胞的激活(P<0.01),升高IκBα(P<0.01),降低TLR4、NF-κB p65等关键蛋白的表达量和炎症因子TNF-α、IL-1β的释放(P<0.01)。3种中药复方对比发现,脑心通胶囊对大鼠炎症的改善效果较为明显。结论:补阳还五汤类方均可改善CIRI大鼠的炎症反应,其中脑心通胶囊在大鼠炎症急性期炎症损伤的药物治疗效果相对显著,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

补阳还五汤类方对氧糖剥夺再复糖复氧海马神经元细胞的体外保护作用及其机制研究

目的探讨补阳还五汤类方(补阳还五汤、脑心通胶囊、养阴通脑颗粒)对乳鼠氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)海马神经元细胞的体外保护作用及其机制。方法原代培养海马神经元细胞,建立海马神经元OGD/R模型,CCK-8法确定补阳还五汤类方含药血清于海马神经元细胞的作用浓度。实验设对照组、模型组、补阳还五汤含药血清组(10%)、脑心通胶囊含药血清组(10%)、养阴通脑颗粒含药血清组(10%)、补阳还五汤含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)、脑心通胶囊含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)、养阴通脑颗粒含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)共8组。倒置相差显微镜下观察海马神经元生长形态,试剂盒检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的含量,Hoechst 33358染色荧光显微镜观察神经元细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测TLR4/NF-κB信号通路上关键蛋白的表达情况。结果补阳还五汤类方均可以降低海马神经元细胞TNF-α和IL-1β的释放量,显著降低细胞凋亡数,抑制TLR4/NF-κB信号通路中TLR4和NF-κB蛋白的表达,对OGD/R海马神经元细胞的炎症反应起到了保护作用。TLR4特异性抑制剂TAK-242的加入,阻断了该信号通路的传导,降低了补阳还五汤类方的保护作用。结论补阳还五汤类方对OGD/R致海马神经元细胞发生的炎症反应具有保护作用,其作用机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关,且脑心通胶囊的抗炎保护作用相对明显。