补阴牵正方对帕金森病细胞模型氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的:通过对补阴牵正方抗氧化应激减少帕金森病(PD)细胞模型凋亡的研究,探讨中药治疗PD的作用机制。方法:利用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导构建PD细胞模型,将SH-SY5Y细胞分为正常组、模型组和中药组。采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和活性氧(ROS)水平,酶标仪检测细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达。结果:与正常组比较,MPP+处理后,细胞存活率和SOD活力显著下降(P<0.01),细胞凋亡率、ROS水平、MDA含量及Cyt C蛋白表达水平均显著增高(P<0.01)。与模型组比较,中药干预后,PD细胞模型存活率和SOD活力显著上升(P<0.01),凋亡率、ROS水平、MDA含量及Cyt C蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论:补阴牵正方可以改善氧化应激,减少PD细胞模型凋亡,从而发挥对PD的神经保护作用。

基于Drp1-Ser637磷酸化探讨补阴牵正方对PD小鼠脑线粒体的影响

目的通过帕金森病(PD)小鼠脑动力相关蛋白1(Drp1)和其磷酸化位点丝氨酸637(Ser637)表达的变化及对脑线粒体的影响探讨补阴牵正方防治PD的可能机制。方法选用C57BL/6小鼠72只,随机分为正常组、模型组、补阴牵正方组、美多芭组,每组18只。除正常组外,其余3组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD模型,补阴牵正方组灌胃补阴牵正方水煎剂,每天灌胃2次,连续28 d,美多芭组腹腔注射美多芭,隔天1次,共28 d。爬杆法、抓握法观察小鼠行为学;免疫荧光组化法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目;荧光素酶法测定脑线粒体三磷酸腺苷(ATP);JC-1法检测脑线粒体膜电位;蛋白印迹法(Western blot)检测脑蛋白Drp1及其磷酸化蛋白Drp1-Ser637表达。结果相比正常组,模型组小鼠爬杆时间延长(P<0.01),抓握力度减弱(P<0.01),黑质TH阳性神经元数目减少(P<0.01),脑线粒体膜电位及ATP水平降低(P<0.01),脑Drp1蛋白表达增加(P<0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,补阴牵正方组小鼠在第14天爬杆时间缩短、握力明显增加(P<0.05),黑质TH数目明显增加(P<0.05),Drp1蛋白表达减少(P<0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达增加(P<0.05),脑线粒体膜电位及ATP水平显著升高(P<0.01);而美多芭组除在第14天行为学较模型组有明显改善外(P<0.05),其余指标均无统计学差异;补阴牵正方组与美多芭组比较其黑质TH数目、ATP水平及膜电位均有差异(P<0.05,P<0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达也显著增加(P<0.01)。结论补阴牵正方可能通过下调维持线粒体动态平衡的分裂蛋白Drp1、上调Drp1-Ser637磷酸化位点的表达改善PD小鼠脑线粒体功能,从而保护中脑黑质多巴胺神经元达到防治PD的作用。