基于RUNX2、VEGF蛋白研究补骨生髓方治疗老年性骨质疏松症的作用机制

目的 探究补骨生髓方通过调控Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达治疗老年性骨质疏松症(osteoporosis,OP)的作用机制。方法 将雄性快速老化型(senescence-accelerated mouse prone 6,SAMP6)小鼠随机分为模型组,补骨生髓方高、中、低剂量组,阿仑膦酸钠组,以SAMR1小鼠作为空白对照。选用补骨生髓方对雄性3.5月龄SAMP6自发型老年性OP模型小鼠进行灌胃治疗,给药3个月后处死,取小鼠胫骨、股骨进行骨密度检测、HE染色以确定最佳给药剂量,后续通过免疫组化、蛋白免疫印迹方法检测SAMR1组、SAMP6组与补骨生髓方最佳剂量组小鼠骨组织中RUNX2、VEGF蛋白的表达。结果 通过骨密度和HE染色结果,确定补骨生髓方高剂量[40.64 g/(kg·d)]为老年性OP的最佳给药剂量。与SAMR1组比较,SAMP6组小鼠RUNX2、VEGF蛋白的表达均降低,与SAMP6组比较,补骨生髓方高剂量组小鼠RUNX2、VEGF蛋白的表达显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 补骨生髓方能够提高SAMP6小鼠骨组织中RUNX2、VEGF蛋白表达,有效改善小鼠骨密度水平。

补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响

目的 探讨补骨生髓方对去势骨质疏松大鼠Smad/ERK信号通路的影响。 方法 通过采取去性腺法(摘除睾丸法)建立骨质疏松症大鼠实验模型,造模成功后按照实验方案对大鼠进行灌胃治疗,2个月后处死各组大鼠,HE常规染色,并通过免疫组织化学染色的方法检测正常对照组及各中药干预组去势大鼠ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达。 结果 与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组ERK蛋白的表达差异有统计学意义 ( P <0.05), 而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义 ( P >0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组p-ERK蛋白的表达差异有统计学意义( P <0.05),而低剂量组与模型组表达差异无统计学意义( P >0.05);与模型组比较,补骨生髓方高剂量组与中剂量组Smad4蛋白表达差异有统计学意义( P <0.05),而低剂量组与模型组比较差异无统计学意义( P >0.05)。 结论 补骨生髓方在一定程度上能够上调ERK、p-ERK、Smad4蛋白的表达水平,其可能是通过调控ERK蛋白磷酸化介导的Smad/ERK信号通路来发挥作用;ERK、Smad4可能是今后治疗骨质疏松的潜在作用靶点,但仍需要进一步开展更深入的研究。

补骨生髓方对骨质疏松症模型大鼠氧化应激及铁死亡相关指标的影响

目的观察补骨生髓方对骨质疏松症(OP)大鼠氧化应激及铁死亡相关血清学指标的影响,探讨其治疗OP的可能机制。方法42只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组6只和造模组36只,去卵巢法制备OP大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、阿仑膦酸钠组、强骨胶囊组及补骨生髓方低、中、高剂量组,各给药组给予相应药液灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,每日1次,每周连续给药6 d,共12周。取大鼠胫骨组织,双能X射线骨密度仪检测骨密度,HE染色观察胫骨病理变化;ELISA检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、成纤维生长因子23(FGF23)、klotho蛋白、铁蛋白和铁调素含量。结果HE染色结果显示,模型组大鼠胫骨骨小梁结构破坏,排列紊乱;补骨生髓方中、高剂量组及阿仑膦酸钠组、强骨胶囊组大鼠胫骨骨小梁结构较完整,纹理较清晰,连接性较好,壁厚较致密,形态较规则,数目较模型组明显增多。与假手术组比较,模型组大鼠胫骨密度明显降低,血清MDA、FGF23和铁蛋白含量显著增加,SOD活性、klotho蛋白和铁调素含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠胫骨骨密度显著升高,血清MDA、FGF23和铁蛋白含量显著降低,SOD活性、klotho蛋白和铁调素含量显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论补骨生髓方可调控OP大鼠体内氧化应激及铁蓄积水平,并可能通过细胞铁死亡途径发挥抗OP作用。

补肾生髓强骨方对酒精性股骨头坏死模型大鼠炎症因子、氧化应激及TLR4、NF-κB和VEGF蛋白表达的影响

目的观察补肾生髓强骨方对酒精性股骨头坏死模型大鼠炎症因子、氧化应激及toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法将30只烈性白酒诱导的酒精性股骨头坏死模型大鼠随机分为模型组、干预组和阳性组,另选择10只Wistar大鼠作为对照组,模型组和对照组给予生理盐水灌胃,干预组给予补肾生髓强骨汤灌胃,阳性组给予美多芭灌胃,剂量均为10 mL/kg,连续给药4周。HE染色比较各组大鼠的骨组织的病理学改变,比较炎症因子、氧化应激指标,骨组织中TLR4、NF-κB和VEGF基因和蛋白表达。结果模型组股骨头组织结构紊乱,软骨脱落,骨细胞陷窝,脂肪细胞体积增大;干预组和阳性组股骨头组织结构改善,软骨少量脱落,骨细胞陷窝减轻,脂肪细胞体积增大不明显。干预组和阳性组血清TNF-α、IL-6和CRP水平显著降低,且干预组低于阳性组(P<0.05)。干预组和阳性组脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)水平降低,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)水平升高,且干预组优于模型组(P<0.05)。干预组和阳性组TLR4、NF-κB基因和蛋白表达水平降低,VEGF基因和蛋白表达水平升高,且干预组优于阳性组(P<0.05)。结论补肾生髓强骨方对酒精性股骨头坏死模型大鼠具有较好的治疗作用,可抑制炎症因子,改善氧化应激,其机制可能与抑制TLR4、NF-κB和VEGF蛋白表达有关。