补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用

背景:补骨脂素具有很强的抗骨质疏松活性,可能对化疗导致的骨质疏松具有恢复作用。目的:探讨补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用及机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,以MTT法检测补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力的影响,以成骨诱导结合碱性磷酸酶染色确定补骨脂素对环磷酰胺抑制骨髓间充质干细胞成骨分化恢复作用的最佳剂量。采用RT-qPCR法检测补骨脂素干预不同时间点成骨分化标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt1、Wnt4、Wnt10b、β-catenin、c-MYC的mRNA表达;采用Western blot法检测补骨脂素干预不同时间点成骨特异性转录因子Runx2及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Activeβ-catenin、DKK1、c-MYC、Cyclin D1的蛋白表达。结果与结论:(1)不同浓度补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力没有显著影响;200μmol/L补骨脂素干预后对环磷酰胺诱导骨髓间充质干细胞成骨分化抑制的恢复作用最佳;(2)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞成骨标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素mRNA表达和Runx2蛋白表达的降低;(3)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin通路相关基因Wnt4、β-catenin、c-MYC mRNA表达和Activeβ-catenin、c-MYC、Cyclin D1蛋白表达的降低以及DKK1蛋白表达的升高;(4)结果表明,环磷酰胺能抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,补骨脂素对其具有恢复作用,且200μmol/L补骨脂素干预效果最佳,而这种保护作用可能与补骨脂素激活Wnt4/β-catenin信号通路有关。

五指毛桃不同部位补骨脂素合成酶基因的表达及其代谢产物含量

为探究五指毛桃(Ficus hirta Vahl)不同部位补骨脂素合成酶基因(psoralen synthetase,PS)表达与补骨脂素含量的关系,本研究分别采用实时荧光定量PCR法和高效液相色谱法测定来自广西和福建的五指毛桃根、茎、叶和果实PS基因的表达量及补骨脂素含量,分析不同五指毛桃种质不同部位PS基因表达及其代谢产物含量的差异。结果显示:PS基因在广西和福建五指毛桃的根、茎、叶和果实中均有表达,且其表达量具有组织特异性,在根中的相对表达量最高(侧根高于主根),叶中次之(全缘叶高于缺刻叶),茎和果实的表达量极低。使用高效液相色谱测得广西和福建的五指毛桃中补骨脂素含量存在差异,在2个五指毛桃种质的主根、侧根、缺刻叶、全缘叶、茎、果实中均有积累,侧根中的含量最高,分别为3.206、2.947 mg/g,主根次之(2.136、0.419 mg/g),缺刻叶中的含量分别为0.022、0.028 mg/g,全缘叶中的含量分别为0.069、0.035 mg/g,茎(0.003、0.003 mg/g)和果实(0.002、0.001 mg/g)中含量较低。五指毛桃PS基因表达与补骨脂素含量具有相关性,该研究结果为解析PS基因在五指毛桃补骨脂素合成中的作用提供参考。

补骨脂素通过PCSK9/LDLR信号通路抗高脂饮食诱导的高脂血症研究

目的基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)探讨补骨脂素对高脂血症的影响及作用机制。方法首先使用分子对接法对补骨脂素与PCSK9蛋白结合能力进行预测。随后分别采用高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型和HepG2细胞红色荧光标记低密度脂蛋白(Dil-LDL)摄取法考察补骨脂素对模型小鼠血脂水平和HepG2细胞Dil-LDL摄取的影响。C57BL/6J 50只小鼠适应性喂养1周,未造模小鼠作为正常组,造模后的高脂血症小鼠随机分为模型组和20、40、80 mg/kg补骨脂素组,每组10只。全自动生化仪检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,以及总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high densit lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。20μg/mL Dil-LDL观察补骨脂素对HepG2细胞脂质摄取的影响,分为对照组和10、20、40、80μmol/L补骨脂素组。酶标仪检测各组荧光强度;Real-time PCR和Western blot法检测补骨脂素对PCSK9和低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)基因和蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示补骨脂素与PCSK9对接结合能为-6.04 kcal/mol,提示补骨脂素可能与PCSK9结合。进一步在在体动物模型验证中发现,与高脂饮食诱导的模型组相比,20 mg/kg补骨脂素可显著降低高脂血症小鼠血清中ALT、TC和LDL-C水平(P<0.05),40 mg/kg补骨脂素显著降低高脂血症小鼠血清ALT、AST、TC、TG和LDL-C水平(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,与对照组相比,10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L补骨脂素可显著增强HepG2细胞Dil-LDL摄取能力(P<0.01)。与对照组相比,40μmol/L…补骨脂素可显著提高LDLR mRNA和蛋白表达(P<0.05),并降低PCSK9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。…结论补骨脂素具有抗高脂饮食导致的高脂血症作用,机制可能与下调PCSK9/LDLR信号通路有关。

石榕树中补骨脂素分离鉴定及其抗真菌活性

[目的]分离出石榕树中能够有效抑制植物病原真菌的活性单体化合物并探索其抗真菌活性。[方法]采用生物活性追踪和化学分离相结合的方法对石榕树甲醇提取物进行分离,运用质谱、核磁共振氢谱和碳谱并结合相关文献数据鉴定活性单体化合物。采用菌丝生长速率法测定活性单体化合物对7种植物病原真菌的抑菌活性。[结果]石榕树(叶)甲醇提取物对甘蔗凤梨病菌具有良好抑菌活性,在10 mg·mL^(-1)浓度下,抑菌率为100%。在浓度为1.5 mg·mL^(-1)时,石榕树(叶)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物和水层萃余物对甘蔗凤梨病菌的抑菌率分别为58.73%、100.00%、39.49%和6.63%。表明石榕树(叶)乙酸乙酯层萃取物对甘蔗凤梨病菌的抑制作用最高,其EC_(50)值为0.430 7 mg·mL^(-1)。石榕树(叶)乙酸乙酯层萃取物进行柱色谱分离后得到对甘蔗凤梨病菌有较高抑菌活性的是LMNO1bc1a活性组分,0.1 mg·mL^(-1)的LMNO1bc1a活性组分对甘蔗凤梨病菌的抑菌率为100.00%。LMNO1bc1a组分经结晶、重结晶纯化后命名为SRS-1,SRS-1经NMR和MS技术鉴定为补骨脂素(psoralen)。SRS-1对甘蔗凤梨病菌、甘蓝黑斑病菌、玉米大斑病菌、罗汉果白绢病菌、柑橘砂皮病菌、茶轮斑病菌、烟草黑胫病菌这7种植物病原真菌都有一定的抑菌活性,其EC_(50)值分别为0.018 2、0.038 8、0.040 9、0.051 2、0.080 7、0.092 7、0.115 4 mg·mL^(-1)。[结论]从石榕树中分离出抑菌活性单体化合物SRS-1,鉴定为补骨脂素,其对甘蔗凤梨病菌、甘蓝黑斑病菌、玉米大斑病菌、罗汉果白绢病菌、柑橘砂皮病菌、茶轮斑病菌、烟草黑胫病菌这7种植物病原真菌都有一定的抑菌活性。

补骨脂素对人牙周膜干细胞增殖、成骨分化的促进作用及其机制

目的观察补骨脂素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、成骨分化的促进作用,并探讨其机制。方法将第三代hPDLSCs分为6组,5、10、25、50、100μmol/L补骨脂素组加入5、10、25、50、100μmol/L补骨脂素,对照组正常培养,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色检测成骨诱导矿化结节。另取第三代hPDLSCs并分为两组,25μmol/L补骨脂素组加入25μmol/L补骨脂素,对照组正常培养,采用RT-PCR法检测转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)mRNA。结果与对照组比较,5、10、25、50、100μmol/L补骨脂素组细胞增殖能力和ALP活性增加,25μmol/L补骨脂素组细胞成骨矿化结节增加(P均<0.05);与5μmol/L补骨脂素组比较,25、50、100μmol/L补骨脂素组细胞增殖能力及10、25μmol/L补骨脂素组细胞ALP活性和25μmol/L补骨脂素组细胞成骨矿化结节增加(P均<0.05);与10μmol/L补骨脂素组比较,25、50、100μmol/L补骨脂素组细胞增殖能力增加(P均<0.05);与25μmol/L补骨脂素组比较,50、100μmol/L补骨脂素组细胞ALP活性降低(P均<0.05)。与对照组比较,25μmol/L补骨脂素组Runx2、OPN mRNA相对表达量增加(P均<0.05)。结论5~100μmol/L补骨脂素均能促进hPDLSCs的增殖和成骨分化,在5~25μmol/L呈剂量依赖性增强,在50~100μmol/L变化不明显;补骨脂素促进hPDLSCs的增殖和成骨分化的机制可能与调节Runx2信号通路有关。

高效液相色谱测定温肾暖脾颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量

目的建立温肾暖脾颗粒补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,为质量控制提供实验依据。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(40:60);检测波长246 nm;结果峰面积和质量浓度之间线性关系良好,补骨脂素R^(2)=0.9992,异补骨脂素R^(2)=0.9993;精密度、稳定性均符合要求;补骨脂素平均回收率为98.25%,RSD为0.89%,异补骨脂素平均回收率为95.90%,RSD为1.18%。结论本试验研究并建立了高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,可以作为温肾暖脾颗粒质量控制的依据。

基于代谢组学的补骨脂素在2D和3D培养模型的肝毒性差异研究

中药补骨脂具有温肾助阳,纳气等作用,主治阳痿遗精,腰膝冷痛,肾虚作喘等。补骨脂及其方剂的不当使用有造成肝损伤的风险。补骨脂素是补骨脂药材的主要活性成分之一,同时也是导致补骨脂肝毒性的主要成分之一[1]。体外毒性实验具有速度快、成本低、通量高等优势。

补骨脂素对溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障及继发性肝损伤的改善作用

研究补骨脂素(psoralen,PSO)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的肠道屏障及继发性肝损伤的改善作用。40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(control,Con)、模型组(model,Mod)、阳性药柳氮磺吡啶组(sulfasalazine,SASP,200 mg/kg)、PSO低剂量组(PSO-L,20 mg/kg)和PSO高剂量组(PSO-H,40 mg/kg),通过自由饮用2.25%的葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)7 d构建UC模型。实验期间记录小鼠的体重,疾病活动指数(disease activity index,DAI)。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)检测结肠中带状闭合蛋白-1(zonula occludens-1,ZO1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)和闭锁蛋白(Occludin)的表达。生化试剂盒检测肝脏中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肝脏脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)、C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量。蛋白印迹(Western blot)法检测肝脏Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)以及磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)的表达。结果显示,与Mod组相比,经PSO治疗后,UC小鼠体重下降得到缓解、DAI评分下降、缓解了结肠长度的缩短;ZO1、Claudin-1和Occludin的mRNA的表达均上调;肝脏AST、ALT、AKP和LDH含量均下降;肝脏LPS、CRP、PCT、IL-6以及TNF-α含量均下降;下调了肝脏TLR4、MyD88以及p-NF-κB蛋白的表达。以上结果表明,PSO可以改善DSS诱导的小鼠肠道屏障功能,并通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善继发性肝损伤。

基于转录组测序技术分析补骨脂素对HepG2细胞的作用机制

目的利用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术分析补骨脂素对肝癌HepG2细胞的作用机制。方法利用CCK-8法检测不同浓度的补骨脂素(0、62.5、125、250、500μM)作用HepG2细胞12 h和24 h后存活率的变化;流式细胞术检测250μM补骨脂素对HepG2细胞处理24 h后细胞周期的变化;RNA-seq测序获得对照组和补骨脂素组差异表达基因并进行GO富集分析和KEGG通路分析;实时荧光定量PCR技术验证差异基因表达水平。结果与对照组相比,补骨脂素作用HepG2细胞后,其存活率明显下降(P<0.01),细胞周期在G0/G1期比例提高(P<0.05);RNA-seq测序分析共有286个差异显著基因,其中包括130个上调基因和156个下调基因;GO功能富集和KEGG信号通路主要集中在细胞周期相关生物学过程及信号通路;qPCR结果显示HepG2细胞经补骨脂素处理后p 53和GADD 45B基因上调(P<0.05,P<0.01),CDK 2、RRM2和CCND 1基因下调(P<0.05,P<0.01)。结论补骨脂素对HepG2细胞产生毒性,阻滞细胞周期进程,其作用机制可能与调控细胞周期相关基因(p 53,CDK2,GADD45B,CCND1,RRM2)的表达有关。

补骨脂素通过miR-101/PI3K/Akt轴对骨肉瘤细胞侵袭、转移的影响

目的探讨补骨脂素对骨肉瘤细胞侵袭、转移的抑制作用及可能的作用机制。方法用不同浓度补骨脂素作用于人骨肉瘤细胞(human osteosarcoma cells,MG-63),用CCK-8法检测细胞的存活情况,筛选最佳抑制浓度;用实时荧光定量法检测骨肉瘤组织与正常组织中微小RNA(microRNA,miR)-101的相对表达量。将对数生长期骨肉瘤细胞MG-63随机分为对照组、miR101模拟物阴性对照组(miR-NC组)、miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组。用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]实验检测细胞增殖抑制率;用肿瘤细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭和迁移能力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肌磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)mRNA的表达情况;用蛋白印迹法(Western blotting)检测磷酸化肌磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况。结果与对照组比较,miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP2和MMP9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。与miR-101组和补骨脂素组比较,补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论补骨脂素能够降低骨肉瘤细胞MG-63的增殖能力,并抑制其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节miR-101水平、影响PI3K/Akt信号通路有关。

异补骨脂素通过促进骨形成加快骨折愈合

目的 研究异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠胫骨骨折愈合的影响及其作用机制。方法 取2月龄体质量为(20±2)g雄性C57BL/6小鼠50只,按随机数字表法分为模型(Model)组和异补骨脂素治疗(ISO)组,每组25只,ISO组灌服40 mg/kg的ISO,Model组灌服等体积生理盐水,每日1次。取服药第7、14、21、28天术侧胫骨,采用Micro-CT扫描骨折区域量化骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV),并通过HE染色观察骨折断端愈合及塑形情况。采用ELISA法检测服药14 d小鼠血清中骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)和Ⅰ型前胶原氨基端原肽(procollagen Type I N-terminal peptide,PINP)骨形成指标的变化情况。采用Western blot检测服药7、14 d小鼠胫骨骨痂组织中CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF蛋白的表达含量。通过血管灌注观察服药28 d后骨折区域骨痂微血管,量化分析血管体积分数及血管直径。采用免疫组织化学染色观察服药14 d后胫骨中VEGF表达情况。结果 HE染色结果显示,ISO组的愈合进程快于Model组。Micro-CT量化结果显示,服药7 d后ISO组的BV/TV高于Model组,但差异无统计学意义;14 d后ISO组的BV/TV明显高于Model组(P<0.05);21 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05);28 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05)。血清骨形成生化指标显示ISO组BALP和PINP含量均显著高于Model组(P<0.05)。骨组织蛋白表达检测结果显示,ISO组的CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF表达量均明显高于Model组(P<0.05)。血管造影结果示,ISO组血管体积分数明显高于Model组(P<0.05),ISO组血管直径明显高于Model组(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示ISO组VEGF表达量明显高于Model组(P<0.05)。结论 异补骨脂素可以提高成骨细胞活性,提高相关骨形成蛋白的表达量,加快造血组织进入来促进骨折愈合。

异补骨脂素对模拟微重力引起的骨质流失的防治作用

目的研究异补骨脂素对模拟微重力导致小鼠骨质流失的治疗作用。方法将C57BL/6J小鼠随机分为5组:地面对照组(CON)、尾吊组(HU)、低剂量给药组(ISO-L)、中剂量给药组(ISO-M)、高剂量给药组(ISO-H),每组12只。给药21 d后,处死所有小鼠,取五脏、血清、股骨、胫骨,用于组织病理学检测、Mirco-CT成像分析、血清指标检测、股骨骨组织蛋白分析以及碱性磷酸酶阳性克隆染色。结果与CON组相比,HU组骨密度(bone mineral density,BMD)和骨小梁厚度(Tb.Th)均呈显著降低趋势(P<0.01),骨体积分数(BS/TV)、骨表面积密度(BV/TV%)明显降低(P<0.05),骨小梁数量(Tb.N)下降,骨小梁分离度(Tb.Sp)升高;与HU组相比,尾吊给药后BMD、BV/TV%、Tb.Th、BS/TV均显著升高(P<0.05),Tb.N升高,Tb.Sp下降,均以高剂量组效果最佳。与CON组相比,HU组血清中骨钙素(OCN)下降(P<0.01),抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)浓度上升(P<0.01);尾吊时给予异补骨脂素,使OCN升高(P<0.01),TRACP-5降低(P<0.01)。与CON组相比,HU组的OPG蛋白表达量降低(P<0.05),RANKL蛋白表达量升高(P<0.05),与HU组相比,给予异补骨脂素后OPG、蛋白表达量升高,RANKL的蛋白表达量降低(P<0.05)。HU组所显示的蓝紫色碱性磷酸酶染液颗粒与地面对照组相比密度低,颜色浅,尾吊时加入异补骨脂素后蓝紫色碱性磷酸酶染液颗粒密度升高。结论异补骨脂素能促进模拟微重力状态下骨形成同时抑制骨吸收有效防治骨质的流失。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中的两种补骨脂素

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定化妆品中8-甲氧基补骨脂素和5-甲氧基补骨脂素含量的方法。以甲醇提取样品,以甲醇和水为流动相,经HPLC分离后以多级反应监测(MRM)测定。两种补骨脂素在2.0～100.0μg/L范围内线性良好,检出限均为0.10mg/kg,回收率分别在96.88%～101.81%和94.25%～101.26%之间,相对标准偏差分别在0.40%～6.02%和0.76%～4.26%之间。

8-甲氧补骨脂素脂质体凝胶对实验性白癜风的药效学

目的 :以 8 甲氧补骨脂素 (MOP)酊剂和凝胶剂为对照 ,考察 8 甲氧补骨脂素脂质体 (LMOP)凝胶对实验性白癜风的作用。方法 :用化学脱色法制备白癜风动物模型 ,分别用等浓度 (0 .1 5 %)MOP酊剂、凝胶剂、脂质体凝胶进行治疗 ,并给予日光照射 1 5min ,考察其对皮肤黑素形成和胆碱酯酶的影响。结果 :LMOP凝胶相对其他剂型对实验性白癜风有良好的治疗作用 ,对皮肤黑色素的影响和对胆碱酯酶的影响与模型组比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1 ) ,与MOP凝胶组和酊剂组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :LMOP凝胶较其他MOP制剂对白癜风有更好的治疗作用 ,为临床应用提供了理论依据。

化妆品中甲氧基补骨脂素同分异构体的液相色谱法分离和测定

建立了用高效液相色谱（HPLC）-二极管阵列检测器（DAD）测定化妆品中两种呋喃香豆素同分异构体-8-甲氧基补骨脂素（8-MOP）和5-甲氧基补骨脂素（5-MOP）的简便方法。样品用甲醇超声提取，高速冷冻离心，经0．45μm滤膜过滤，注入高效液相色谱，用DAD进行扫描检测，并在301nm波长进行分析。用保留时间结合紫外光谱图定性，外标法定量，并且采用液质联用（LC／MS／MS）确证。测试结果对8-MOP的回收率为87．0％-105．0％，RSD为0．41％～5．3％．检出限为5．0mg／kg；5-MOP的回收率为88．0％～105．0％，RSD为0．33％～4．1％，检出限为5．0mg／kg。本文用DAD同时分离和检测了化妆品中的8-MOP和5-MOP，方法可用于化妆品安全性监控。

8-甲氧补骨脂素脂质体凝胶的皮肤渗透性研究

目的 :研究8 -甲氧补骨脂素脂质体凝胶的皮肤渗透性。方法 :以凝胶与敏白灵酊为对照 ,将8 -甲氧补骨脂素脂质体凝胶应用于离体及在体大鼠皮肤 ,用反相高效液相色谱法测定接收介质、皮肤、血液及其它组织中8 -甲氧补骨脂素的含量。结果 :离体条件下 ,脂质体凝胶具有最小的透皮速率和最大的皮内滞留量 ;在体条件下 ,包封于脂质体中的药物在皮肤中滞留量分别是凝胶和酊剂的 (4 37±0 91)倍和 (3 36±0 58)倍。结论 :8 -甲氧补骨脂素脂质体凝胶具有显著的局部皮肤靶向性。

8-甲氧补骨脂素脂质体凝胶的研制

目的 :制备 8 甲氧补骨脂素脂质体 (LMOP)凝胶 ,并评价其质量。方法 :以均匀设计法优化工艺制得LMOP凝胶 ,用透射电镜观察其形态 ,用凝胶柱层析法结合HPLC测定其包封率及该制剂的稳定性。结果 :所制脂质体形态圆整 ,分布较均匀 ,平均粒径为 5 5 0nm ,粒径范围为 15 0～ 10 0 0nm ,平均包封率为 90 .13% ,于 4 0℃贮存 3个月 ,脂质体形态及包封率无显著改变。结论 :该脂质体凝胶制备工艺可行 ,稳定性较好 。

不同炮制方法对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量的影响

目的:用不同炮制方法炮制补骨脂,比较不同炮制品中补骨脂素和异补骨脂素的含量,并考查最佳炮制方法的炮制工艺条件。方法:用甲醇超声提取补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素。HPLC法采用Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇和水为流动相,流速为1.0mL/min,柱温为40℃,检测波长为245nm。正交试验用于炮制方法的工艺筛选。结果:雷公法炮制的补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量均高于其他炮制品中的含量,其最佳炮制条件为:1倍量黄酒浸泡0.5d,水浸泡2d,蒸6h。结论:不同炮制方法对补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素含量有影响。

补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究

目的比较研究中药补骨脂中两种重要组分——补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat cal-varial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响。方法取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养。以1×10-5mol.L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况。West-ern blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素。结论异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。

高效液相色谱法测定中药材补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量

建立了测定中药材补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量的高效液相色谱法。采用的色谱条件为:HypersilODS色谱柱(150mm×4 6mmi d ,5μm),以乙腈 水(体积比为30∶70)为流动相,检测波长为245nm。在此条件下,补骨脂素、异补骨脂素和内标物联苯苄唑获得了较好的分离。补骨脂素和异补骨脂素质量浓度分别为0 50～10 0mg/L时,组分与内标的峰面积比值与质量浓度之间的线性关系良好(r=1 000),最低检测限为10μg/L(S/N=3)。所建立的方法用于不同产地的补骨脂素药材分析,结果令人满意。