补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究

目的比较研究中药补骨脂中两种重要组分——补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat cal-varial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响。方法取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养。以1×10-5mol.L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况。West-ern blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素。结论异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。

高效液相色谱法测定药材及中成药中补骨脂素与异补骨脂素含量

用高效液相色谱法测定补骨脂及其中成药中补骨脂素和异补骨脂素含量。用甲醇－水（6：40，v／v）作流动相，在μ－BondapakC18柱上，两成分能较好地分离。用甲醇作提取溶剂，超声振荡提取30min，分析了市售补骨脂及3种含补骨脂的中成药，方法简便，精密度较高。

用荧光法研究补骨脂素与异补骨脂素的药代动力学

补骨脂素和异补骨脂素是补骨脂的主要有效成分。为了研究补骨脂素和异补骨脂素的药物代谢动力学，本文采用胶束荧光法对补骨脂素和异补骨脂素在兔体内的血药浓度进行２４ｈ监测，求出系列药动学参数。结果表明：补骨脂素的Ｋａ为３．２２５１ｈ－１，ｔ１／２（α）为 ０．１８４９ｈ，ｔ１／２（β）为１０．７０６５ｈ，Ｔ为０．８２００ｈ，ＡＵＣ为２１．６１０４ｍｇ·ｈ／Ｌ；异补骨脂素的Ｋａ为４．４３２９ｈ－１，ｔ１／２（Ｋａ）为０．１５６４ｈ，ｔ１／２（Ｋｅ）为２．１７７７ｈ，Ｔ为１．０９５５ｈ，ＡＵＣ为７．２４１８ｍｇ·ｈ／Ｌ。

RP-HPLC测定益肾补血胶囊中淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素

目的:建立反相HPLC法测定益肾补血胶囊(淫羊藿、补骨脂、龙血竭、杜仲等)中淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素的方法。方法:采用RP-HPLC法,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为270nm,测定制剂中淫羊藿苷的含量;以甲醇-水(52∶48)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为246nm,测定制剂中补骨脂素与异补骨脂素含量。结果:在各自分离条件下,淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素峰形良好,且无其他成分干扰,进样量与峰面积呈良好的线性关系,其中淫羊藿苷线性范围为0.1104～0.8832μg,回归方程为Y=1996.7X-41.99,r2=0.9998(n=8),样品平均回收率为97.49%,RSD为1.47%(n=6);补骨脂素线性范围为0.04104～0.45144μg,回归方程为Y=7×106X-140960,r2=0.9990(n=6),样品平均回收率为104.51%,RSD为1.58%(n=6);异补骨脂素线性范围为0.03752～0.41272μg,回归方程为Y=8021X+15.999,r2=0.9999(n=6),样品平均回收率为103.01%,RSD为1.01%(n=6)。结论:该方法分离效果好,分析快速、准确、灵敏度高、重现性好,且样品稳定,可用于益肾补血胶囊中淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素的含量测定。

高效液相法测定补骨脂生品和炮制品中补骨脂素与异补骨脂素含量

目的:建立补骨脂中主要成分含量的HPLC测定方法,为评价补骨脂质量标准打下基础。方法:色谱柱填料为Kromasil-C18,4.6×250mm,流动相为甲醇-水-冰醋酸(50:50:1),检测波长246nm。结果:测定方法的回收率分别为99.83%、102.57%。结论:该方法准确、稳定、简单,可以作为补骨脂饮片的质量控制方法。测定结果表明,不同产地的生、制品中,两类成分相差很大。

玄胡索散及其拆方对补骨脂素与异补骨脂素溶出量的影响

目的研究玄胡索散及其拆方对补骨脂素与异补骨脂素溶出量的影响。方法将玄胡索散拆方提取后,采用HPLC法,ES Industries Epic Polar C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(55∶45)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长246 nm,柱温25℃进行测定,分析补骨脂素与异补骨脂素的溶出量。结果玄胡索散拆方前后补骨脂素与异补骨脂素的溶出量变化明显,单因素方差分析与SNK检验结果显示,各拆方组与全方组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论当归、牛膝有助于补骨脂素与异补骨脂素的溶出,而延胡索抑制二者的溶出。

补骨脂微乳液中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定

目的建立高效液相色谱法测定补骨脂微乳液中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法采用KromasilC18柱,以甲醇-0.6%醋酸溶液(50∶50)为流动相,检测波长246 nm。结果补骨脂素在4.24～50.88μg.mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.3%(RSD=1.51%);异补骨脂素在4.48～53.76μg.mL-1浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.6%(RSD=1.65%)。结论该方法简便可行,重复性好,可用于补骨脂微乳液中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。

HPLC法测定复康宝胶囊中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的建立反相HPLC法测定康复宝胶囊中补骨脂素、异补骨脂素的含量。方法液相ODS—C18色谱柱,流动相为甲醇-水(40∶60),柱温35℃,流速1mL/min,检测波长247nm。结果补骨脂素和异补骨脂素分别在1.05～10.50μg/mL,1.02～10.20μg/mL范围内线性关系良好,相关系数分别为r补骨脂素=0.9999,和r异补骨脂素=0.9999。两组分的回收率分别是补骨脂素97.5%,异补骨脂素100.8%,RSD均为0.6%。结论本法可同时测定补骨脂素与异补骨脂素,方法简便,精确,为其限量标准提供了科学依据。

反相高效液相色谱法测定益宫宁血胶囊中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的建立益宫宁血胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18，流动相为甲醇-水-磷酸（53：47：0，2，WV），流速为1，0mL·min^-1，UV检测波长为246nm，柱温为25℃。结果补骨脂素和异补骨脂素的线性范围均为30～300μg·mL^-1，平均加样回收率分别为99．6％，RSD：1，45％和99.3％，RSD：1．15％（n=5）。结论该方法测定益宫宁血胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量，简便、快捷、重现性好．可作为该产品的盾量控制方法。

高效液相色谱法测定壮骨颗粒中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定壮骨颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法色谱柱为 Agilent Zorbax C18柱（4．6 mm ×250 mm ，5μm），流动相为甲醇唱水（45∶55），检测波长为245 nm ，流速为1．0 ml／min ，柱温为25℃，进样量为10μl。采用70％乙醇水浴方法提取壮骨颗粒中的补骨脂素和异补骨脂素。结果补骨脂素与异补骨脂素在3.75-40μg／ml范围内呈良好的线性关系，对方法精密度（n＝6）、重复性（n＝6）和稳定性（12 h）进行考察，相对标准偏差（RSD）均小于2％。加样回收率（n＝6）为94％-105％。结论该测定方法简便、快速、准确，可用于壮骨颗粒的临床快速质量控制。

HPLC法同时测定强肾片中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的：建立强肾片中补骨脂素与异补骨脂素的高效液相色谱分析方法。方法：以Lichrospher C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）为色谱柱,甲醇-水（42∶58）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为245 nm。结果：补骨脂素对照品在6.44~322 ng范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 95,平均回收率为101.1%,RSD=2.8%（n=6）;异补骨脂素对照品在10.42~521 ng范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 99,平均回收率为101.7%,RSD=2.2%（n=6）。结论：该检测方法简便、快速、灵敏、重现性好,可用于强肾片的质量控制。

益肾灵颗粒剂中补骨脂素与异补骨脂素薄层扫描分析

为有效地控制益肾灵的质量,建立了益肾灵颗粒剂中补骨脂异补骨脂素的薄层扫描分析法。方法回收率94.8～98.7％。相对标准差小于5％。测定了益肾灵颗粒剂三批。

HPLC法测定骨质增生散中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的:测定骨质增生散中补骨脂素与异补骨脂素含量。方法:采用HPLC法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-水(45:55),检测波长为206nm,流速为1.0mL/min。结果:补骨脂素在0.02442～0.36624μg(r=0.99998)之间,异补骨脂素在0.02808～0.4212μg(r=0.999995)范围内呈良好的线性关系。补骨脂素平均加样回收率为100.3%,RSD=0.6%(n=6),异补骨脂素平均加样回收率为102.5%,RSD=0.6%(n=6)。结论:该方法简便、灵敏,可用于制剂的质量控制。

高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的:建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法.方法:采用高效液相法,选用Zorbax SB-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.01%磷酸(40∶60);检测波长246 nm;柱温40℃.结果:补骨脂素在0.046 9～0.233 1μg范围内线性良好,r=0.999 9;异补骨脂素均在0.046 6～0.232 8μg范围内有较好的线性关系,r=0.999 9;补骨脂素加样回收率平均为98.44%,RSD为1.19%(n=5);异补骨脂素平均回收率为99.70%,RSD为1.99%.结论:该法简便,快速,可用于补肾酒的质量控制.

HPLC法直接测定三七药酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的:建立测定三七药酒中补骨脂素与异补骨脂素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为依利特Sino Chrom ODS-BP(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为水-甲醇-乙腈(60:37:3),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为25℃,检测波长为246 nm,进样量为10μL。结果:补骨脂素与异补骨脂素的检测质量浓度分别在2.392~191.329μg·mL^(-1)、2.534~202.720μg·mL^(-1)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9和0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.47%;平均回收率分别为99.46%、100.42%,RSD分别为0.15%、0.25%(n=6)。结论:本方法简洁快速、灵敏度高、专属性强、结果稳定,可用于三七药酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定。

超高效液相色谱法同时测定复方紫灵胶囊中的补骨脂素与异补骨脂素的含量

目的建立超高效液相色谱法（UPLC）同时测定复方紫灵胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量。方法采用ACQUITYUPLCBEHCl8色谱柱（2．1mm×100mm，1．7m），流动相为0．05％甲酸-甲醇（50：50），流速：0．2mL·min^-1,检测波长246nm，柱温为35℃。结果补骨脂素在10～200mg·L^-1范围内有良好线性关系（r=0．9996），平均加样回收率为100．69％，精密度良好（RSD=1．38％）。异补骨脂素在10—200mg·L^-1范围内有良好线陛关系（r==1．0000），平均加样回收率为100．67％，精密度良好（RSD=1．29％）。结论本方法测定复方紫灵胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量，方法简便、准确，结果稳定，可为复方紫灵胶囊的质量评价提供科学依据。

补骨脂药材及其制剂中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法研究综述

补骨脂中含有补骨脂素(Psoralen),异补骨脂素(isopsoralen),甲基补骨脂黄酮,异补骨脂黄酮,补骨脂查耳酮,异补骨脂查耳酮,补骨脂酸,挥发油,甲基糖苷,不挥发性萜类,皂苷,磷脂等.

高效液相色谱测定温肾暖脾颗粒中补骨脂素和异补骨脂素含量

目的建立温肾暖脾颗粒补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,为质量控制提供实验依据。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(40:60);检测波长246 nm;结果峰面积和质量浓度之间线性关系良好,补骨脂素R^(2)=0.9992,异补骨脂素R^(2)=0.9993;精密度、稳定性均符合要求;补骨脂素平均回收率为98.25%,RSD为0.89%,异补骨脂素平均回收率为95.90%,RSD为1.18%。结论本试验研究并建立了高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,可以作为温肾暖脾颗粒质量控制的依据。

基于代谢组学的补骨脂素在2D和3D培养模型的肝毒性差异研究

中药补骨脂具有温肾助阳,纳气等作用,主治阳痿遗精,腰膝冷痛,肾虚作喘等。补骨脂及其方剂的不当使用有造成肝损伤的风险。补骨脂素是补骨脂药材的主要活性成分之一,同时也是导致补骨脂肝毒性的主要成分之一[1]。体外毒性实验具有速度快、成本低、通量高等优势。

异补骨脂素通过促进骨形成加快骨折愈合

目的 研究异补骨脂素(isopsoralen,ISO)对小鼠胫骨骨折愈合的影响及其作用机制。方法 取2月龄体质量为(20±2)g雄性C57BL/6小鼠50只,按随机数字表法分为模型(Model)组和异补骨脂素治疗(ISO)组,每组25只,ISO组灌服40 mg/kg的ISO,Model组灌服等体积生理盐水,每日1次。取服药第7、14、21、28天术侧胫骨,采用Micro-CT扫描骨折区域量化骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV),并通过HE染色观察骨折断端愈合及塑形情况。采用ELISA法检测服药14 d小鼠血清中骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)和Ⅰ型前胶原氨基端原肽(procollagen Type I N-terminal peptide,PINP)骨形成指标的变化情况。采用Western blot检测服药7、14 d小鼠胫骨骨痂组织中CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF蛋白的表达含量。通过血管灌注观察服药28 d后骨折区域骨痂微血管,量化分析血管体积分数及血管直径。采用免疫组织化学染色观察服药14 d后胫骨中VEGF表达情况。结果 HE染色结果显示,ISO组的愈合进程快于Model组。Micro-CT量化结果显示,服药7 d后ISO组的BV/TV高于Model组,但差异无统计学意义;14 d后ISO组的BV/TV明显高于Model组(P<0.05);21 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05);28 d后ISO组的BV/TV明显低于Model组(P<0.05)。血清骨形成生化指标显示ISO组BALP和PINP含量均显著高于Model组(P<0.05)。骨组织蛋白表达检测结果显示,ISO组的CollagenⅠ、Runx2、BMP2、OSX和VEGF表达量均明显高于Model组(P<0.05)。血管造影结果示,ISO组血管体积分数明显高于Model组(P<0.05),ISO组血管直径明显高于Model组(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示ISO组VEGF表达量明显高于Model组(P<0.05)。结论 异补骨脂素可以提高成骨细胞活性,提高相关骨形成蛋白的表达量,加快造血组织进入来促进骨折愈合。