道地产补骨脂-肉豆蔻药对中7个指标成分同时测定及其化学成分的初步鉴别

目的：同时测定道地产补骨脂-肉豆蔻药对中7个指标成分含量,并对其化学成分进行初步归属和鉴定。方法：高效液相色谱法测定条件：Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速0.25 m L/min;进样量2μL;柱温30℃;检测波长254 nm。液质联用法测定条件：Waters HSS T3色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,采用电喷雾电离离子源;正离子模式检测：m/z 500--1 200,毛细管电压为3.0k V;锥孔电压为22 k V;离子源温度为110℃;脱溶剂温度为450℃;脱溶剂气体流速为800 L/h;锥孔气流量50 L/h。结果：各指标成分在选定的浓度范围内线性关系良好,加样回收率为95.07%--98.16%,RSD为1.23%~1.97%。结论：该试验为道地产补骨脂-肉豆蔻药对的质量控制和深入研究奠定了基础。

补骨脂-肉豆蔻药对对脾虚泄泻小鼠肠道功能的保护作用

目的观察补骨脂-肉豆蔻药对对脾虚泄泻小鼠肠道菌群失调及胃肠功能异常的调整作用。方法昆明种小鼠60只,按随机区组法随机分为6组,苦寒泻下法,除正常组每天用自来水灌胃外,其余五组均用含原生药的大黄水煎剂,每日一次,连续8 d,造成脾虚泄泻模型;应用墨汁推进法测定肠推进率;光学显微镜观察胃肠组织形态变化;生化法检测D-木糖、淀粉酶的含量。结果补骨脂-肉豆蔻药对(21.06、14.04、7.02 g·kg-1)对肠炎症均有不同程度的改善,降低小鼠肠推进率。同时,补骨脂-肉豆蔻药对还能升高D-木糖和淀粉酶的含量。结论补骨脂-肉豆蔻药对是临床治疗脾虚泄泻的有效药方,不仅有效改善整体情况,而且明显增强肠道抗氧化能力,减轻脂质过氧化损伤,减轻黏膜损伤,加速黏膜修复,以至于在缩短腹泻疗程,提高腹泻疗效方面有很大潜力和优越性。

补骨脂-肉豆蔻醇提物对脾虚泄泻小鼠水通道蛋白及结肠中细胞因子的影响

目的:探讨补骨脂-肉豆蔻醇提物对脾虚泄泻小鼠水通道蛋白(AQP)及结肠中细胞因子的作用。方法:昆明小鼠60只,随机分正常组、模型组、参苓白术散组和补骨脂-肉豆蔻醇提取物(醇提物)低、中、高剂量组,各10只。模型组、醇提物组和参苓白术散组均采用大黄诱导脾虚泄泻小鼠模型,正常组小鼠每天给予等量蒸馏水灌胃。建模成功后,醇提物低、中、高剂量组分别给予补骨脂-肉豆蔻醇提取物7.02、14.04、21.06 g/kg灌胃,参苓白术散组给予参苓白术散2.34 g/kg灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水,每天1次,连续给药2周。比较各组小鼠体质量和胸腺指数、脾脏指数;免疫组织化学法检测AQP3、AQP4蛋白表达;ELISA法检测结肠白细胞介素(IL)-1β、IL-2、肿瘤坏死因子(TNF)水平。结果:各组小鼠体质量间差异有统计学意义(P<0.01),其中模型组小鼠体质量明显低于正常组(P<0.01),醇提物中、高剂量组小鼠体质量均高于模型组(P<0.05)。模型组小鼠脾脏指数和胸腺指数均低于正常组(P<0.05和P<0.01),而醇提物中、高剂量组小鼠脾脏指数和醇提物高剂量组小鼠胸腺指数均高于模型组(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,模型组和醇提物各组小鼠AQP3、AQP4蛋白表达均低于正常组(P<0.05~P<0.01);醇提物中、高剂量组和参苓白术散组小鼠AQP3、AQP4蛋白表达均明显高于模型组和醇提物低剂量组(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠结肠中IL-1β、IL-2和TNF-α水平均明显升高(P<0.01);与模型组和醇提物低、中剂量组比较,醇提物高剂量组和参苓白术散组小鼠结肠中IL-1β、IL-2和TNF-α水平均明显降低(P<0.01)。结论:补骨脂-肉豆蔻醇提物可上调AQP表达,降低肠道的炎性因子水平,对脾虚泄泻小鼠胃肠道功能有一定的改善作用。

基于网络药理学和分子对接探讨补骨脂-肉豆蔻药对治疗肠易激综合征的机制研究

目的:补骨脂-肉豆蔻(Psoralea Fructus-Nutmeg,PN)是一组常用中药配伍,在中国已被用于治疗肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS),本研究旨在探讨PN治疗IBS的潜在机制。方法:通过查阅文献获得PN药对的入血活性成分,上传到Pharm mapper获得潜在目标靶点。采用Cytoscape 3.8.0软件构建化合物-靶点网络。通过DisGeNET、CTD、TTD数据库查找IBS相关基因,利用Cytoscape 3.8.0绘制疾病基因蛋白质-蛋白质相互作用网络。利用DAVID数据库进行了基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。最后,利用AutoDockVina进行了分子对接验证。结果:得到29个药物的活性成分和673个预测的靶基因,得到IBS靶点926个,其中91个与IBS靶点重叠,被认为是潜在的治疗靶点。分析表明,PN的主要靶点丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)1、乙型肝炎、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Threonine-protein Kinase,AKT)1等通过参与FoxO信号通路、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-AKT信号通路等关键通路的反应,改善胃肠黏膜代谢,具有抗炎、抗凋亡、抗氧化和自噬作用,从而缓解了IBS的进展。分子对接结果表明,补骨脂双氢黄酮甲醚、补骨脂异黄酮、小茴香醇A、小茴香醇C、芳香素A2、芳香素B1、芳香素C1、芳香素D1、芳香醇A、补骨脂苷与AKT1、MAPK1、维甲酸受体RXRα(Retinoic Acid Receptor RXR-alpha,RXRA)、雌激素受体1(Estrogen Receptor 1,ESR1)、糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor,NR3C1)、MAPK14、热休克蛋白HSP 90-α(Heat Shock Protein HSP 90-alpha,HSP90AA1)、MAPK8、过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome Proliferator-activated Receptor alpha,PPARA)、胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like Growth Factor I,IGF1)、一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)2、芳香左旋氨基酸脱羧酶(Aromatic-L-amino-acid Decarboxylase,DDC)具有良好的结合活性。结论:本研究表明,PN可以通过多组分、多目标和多通道联合作用参与IBS的治疗。

正交试验结合指纹图谱优选补骨脂-肉豆蔻药对醇提工艺

目的优选补骨脂-肉豆蔻药对醇提的最佳工艺条件。方法通过L9(34)正交试验设计,考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间、提取次数对提取工艺的影响,以HPLC指纹图谱特征峰总面积与补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香酚的量以及干浸膏得率为综合评判指标。结果最佳醇提工艺为乙醇体积分数50%,乙醇6倍用量,每次提取2 h,提取3次。结论本法为补骨脂-肉豆蔻药对醇提工艺的确定提供了依据。

“补骨脂-肉豆蔻”醇提物调控CRF-CREB信号通路对肠易激综合征内脏高敏感大鼠发挥治疗作用的研究

目的:观察"补骨脂-肉豆蔻"醇提物对母子分离结合乙酸灌肠诱导肠易激综合征内脏高敏感大鼠CRF-CREB信号通路的作用。方法:将新生SD大鼠随机分为正常组、模型组、"补骨脂-肉豆蔻"醇提物(15 g/kg、10 g/kg、5 g/kg)组和匹维溴铵(0.05g/kg)组。除正常组外,其余各组采用母子分离结合乙酸灌肠法复制内脏高敏感大鼠模型,于造模后第6周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,正常组和模型组给予等量溶媒,1天1次,连续2周。采用直肠扩张法评价其腹部收缩反射(AWR)阈值,HE染色观察大鼠结肠组织病理学变化;免疫荧光检测大鼠结肠促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),CRF 1型受体(CRFR1)蛋白的表达;RT-qP CR技术检测蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、c-fos mRNA的表达;Western blot技术检测PKA、CREB、p-CREB、c-fos蛋白的表达。结果:"补骨脂-肉豆蔻"醇提物(15 g/kg、10 g/kg)不仅能降低结肠组织中CRF、CRFR1蛋白的表达,还能降低结肠组织中PKA、CREB、p-CREB、c-fos mRNA和蛋白表达。结论:"补骨脂-肉豆蔻"对肠易激综合征内脏高敏感性大鼠有一定的治疗作用,其机制与调节结肠组织中CRF-CREB信号通路有关。

不同比例配伍的补骨脂-肉豆蔻药对中5种有效成分的含量测定

目的:采用HPLC双波长法测定补骨脂-肉豆蔻药对不同比例配伍前后水提液中有效成分的含量变化,优选出最佳配伍比例。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱;双波长检测(λ_1=254 nm,λ_2=360 nm);流速1.0mL·min^(-1);柱温30℃;进样10μL。结果:补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂乙素、去氢二异丁香酚、补骨脂酚的进样量与峰面积分别在0.080~0.798μg(r=0.999 8)、0.063~0.626μg(r=0.999 8)、0.014~0.054μg(r=0.999 8)、0.012~0.050μg(r=0.999 5)、0.239~1.431μg(r=0.999 8)内呈良好的线性关系。加样回收率96.95%~102.29%,优选出最佳配伍比例为补骨脂、肉豆蔻2∶1。结论:所建立的HPLC双波长法操作简便,结果准确,重复性好,回收率高,优选出发挥最佳作用的配伍比例为2∶1,为其质量评价提供研究基础。

“补骨脂-肉豆蔻”对IBS内脏高敏感大鼠CRF及其受体的调控

目的:观察"补骨脂-肉豆蔻"醇提物对母子分离结合乙酸灌肠诱导IBS内脏高敏感大鼠促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其受体的影响。方法:将新生SD大鼠随机分6组,每组8只,除正常组外,其余各组大鼠采用母子分离结合乙酸灌肠法复制IBS内脏高敏感大鼠模型,于造模后第6周起,分别给予"补骨脂-肉豆蔻"醇提物(15g/kg、10g/kg、5g/kg),匹维溴铵(50mg/kg)灌胃,1次/d,连续2w。治疗后评价其腹部收缩反射(AWR)阈值,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血浆中P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量;RT-qP CR和Western Blot检测大鼠结肠组织促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),CRF1型受体(CRFR1)和CRF2型受体(CRFR2)的含量。结果:"补骨脂-肉豆蔻"醇提物(15g/kg、10g/kg)不仅能升高内脏高敏感性大鼠腹部回缩反射(AWR)阈值,还能降低血浆中SP、CGRP的含量,同时,"补骨脂-肉豆蔻"醇提物(15g/kg、10g/kg、5g/kg)能不同程度地降低结肠CRF、CRFR1表达及CRFR1/CRFR2的比值。结论 :"补骨脂-肉豆蔻"对内脏高敏感性大鼠有一定的治疗作用,其作用机制可能与调控CRF及其受体,从而提高内脏痛阈,改善肠道过敏状态有关。

多指标综合加权评分法优选补骨脂-肉豆蔻药对水提工艺研究

目的:采用超高效液相(UPLC)指纹图谱结合多指标综合加权评分法优选补骨脂、肉豆蔻药对水提工艺。方法:采用L9(34)进行正交试验,选择浸润时间、纯化水用量、提取时间、提取次数为考察因素,以补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂乙素、去氢二异丁香酚及补骨脂酚的转移率及超高效液相(UPLC)指纹图谱各特征峰总面积为综合考察指标,采用综合加权评分法进行数据分析,优选出补骨脂-肉豆蔻药对最佳水提工艺。结果:优选出补骨脂-肉豆蔻药对最佳水提工艺为浸润40 min,8倍量水提取3次,每次1 h。结论:优化的工艺合理、可行,有效成分转移率较高,为补骨脂-肉豆蔻药对水提工艺的确定提供了确切依据。

补骨脂、肉豆蔻配伍前后特征指纹图谱及指标成分含量变化研究

目的:对补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后特征指纹图谱及指标成分含量的变化进行研究。方法:Agilent Edipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水,流速:1.0 m L/min,检测波长:234 nm,柱温:30℃,建立补骨脂、肉豆蔻及补骨脂-肉豆蔻药对HPLC特征指纹图谱,标定共有峰,获得对照指纹图谱;对药对配伍前后指标成分的含量进行测定。结果:对药对指纹图谱进行分析,共确定了20个共有峰,并对共有峰的来源进行归属;指标成分含量变化结果显示,药对较单味药材中相应指标性成分的含量均有提高。结论:补骨脂-肉豆蔻药对配伍后大多数化学成分(包括补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香酚)较单味药材各成分含量均有较大幅度提高。