犬细小病毒2b亚型VP2基因的克隆及其B细胞抗原表位分析

对犬细小病毒2b亚型衣壳蛋白VP2基因进行了克隆、测序，并用分子生物学软件DNAStar对VP2基因的推导氨基酸序列进行了表位分析。结果显示，获得了犬细小病毒2b亚型的VP2基因，序列全长1755bp，编码584个氨基酸；B细胞表位主要位于VP2蛋白第1～38、73～83、86～104、152～195、235～243、294～326、347～400、404～416、469～483、503～521和571～585区段。表明，犬细小病毒2b亚型VP2蛋白上分布有多个B细胞抗原表位，这为犬细小病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。

自身抗原SSA/Ro-52kD抗原优势表位分析

探讨自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ的抗原优势表位，为疾病机制的研究提供依据，根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析。采用ＰＣＲ法克隆自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ多肽片段的ｃＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－５Ｘ－１，并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白，用ＧＳＴ亲和层析柱进行纯化，经免疫印迹法与病人阳性血清进行反应，结果表明片段Ｒｏ５２３具有较强的抗原性。

利用合成肽进行丙型肝炎病毒（HCV）的线性抗原表位分析

首先利用固相多肽合成技术对ＨＣＶ多蛋白中可能含有优势抗原表位的１４个肽段进行了化学合成，并用合成肽作包被抗原进行间接ＥＬＬＳＡ试验来分析它们的抗原性，结果表明，所有合成肽中除ＮＳ３区的Ｐ７、Ｐ８和ＮＳ５区的Ｐ１３无抗原性外，其余肽段均具有抗原活性，其中Ｃ区的Ｐ１，ＮＳ４区和Ｐ９和ＮＳ５区的Ｐ１２三个肽段的抗原性较好，与相应的重组蛋白Ｃ２２，Ｃ１００和ＮＳ５Ａ比较，它们之间的抗原性比较接近，随后选择抗原性较好的几个肽段合成了含八分支的多抗原肽（ＭＡＰ）ＭＰ１、ＭＰ２、ＭＰ３、ＭＰ１０和嵌合多肽ＣＰ１５等工程肽抗原，前者不仅保持了相应单体肽的抗原性，而且与抗体反应的敏感性有显著提高；后者含双表位改善了常规合成肽抗原表位单一的缺陷，为研究ＨＣＶ工程肽抗原进行了有益的尝试。

高度致敏肾移植受者的HLA抗体公共表位分析

目的 :探讨对高度致敏肾移植受者进行人类白细胞抗原 (HLA)特异性抗体的公共表位分析的临床意义。方法 :对 2 4例高度致敏受者 (HLA I类抗体PRA >5 0 %)作群体反应性抗体 (PRA)的连续监测 ,并做抗体特异性鉴定和抗体公共表位分析。结果 :2 4例高度致敏受者中 2 1例 (87.5 %)具有公共表位抗体 ,抗体公共表位分析比抗体特异性鉴定能更准确反映抗体谱。 16例高度致敏患者根据抗体公共表位分析结果找到HLA相容的供肾 ,成功地进行了肾移植术。结论 :对少数高频率高免疫原性氨基酸残基公共表位的致敏是高敏受者致敏的主要原因。高度致敏受者的抗体公共表位分析能有效指导HLA配型。

汉滩病毒S基因的分段表达及其线性和构象型抗原表位分析

构建汉滩病毒76-118 N蛋白及其分别从N-端和C-端缺失的共6个突变体,在大肠杆菌BL-21中进行表达,并对其中一些蛋白进行了纯化.通过Western blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)进行汉滩病毒N蛋白的抗原表位分析,N蛋白及6个缺失突变体都与组特异性抗体L13F3呈阳性反应,而缺失突变体与型特异性抗体AH30呈阴性反应.构建汉滩病毒76-118 N蛋白及其6个缺失突变体的真核表达载体,并在COS7细胞中进行表达.通过间接免疫荧光试验(IFA)进行汉滩病毒N蛋白的抗原表位分析,病人血清与真核表达的N蛋白及6个缺失突变体呈阳性反应.而仅有N蛋白及缺失N端1～30位氨基酸序列的NPN30与型特异性抗体AH30呈阳性反应.证实组特异性抗体L13F3结合的抗原表位位于N端1～30位氨基酸;而C端抗原表位对于型特异性抗体AH30与N蛋白的识别和结合具有重要意义,缺失N端100位氨基酸序列可能破坏羧基端构象型表位,也可以影响N蛋白与AH30的结合.

肝癌相关的单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

目的:制备肝癌相关的单克隆抗体(mAb)用于肝癌的诊断。方法:用高转移肝癌细胞系HCCLM-6细胞免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0融合建立杂交瘤细胞系。通过ELISA法筛选HCCLM-6细胞蛋白的特异性mAb,用免疫组化染色法筛查对肝癌组织阳性率高的mAb,并用免疫荧光方法鉴定其在不同肿瘤细胞系中的表达,最后通过筛选Uni-ZAP XR人肝细胞cDNA表达文库初步鉴定mAb识别的抗原及其表位。结果:建立了28株杂交瘤细胞株,用ELISA法和免疫组化染色法筛选出肝癌阳性率较高的mAbQGA062。通过人肝细胞cDNA表达文库筛选初步鉴定表明mAb QGA062识别的抗原是纤维连接蛋白(FN),经分析其抗原表位位于肽段YTVSLVAIKGNQESPK。结论:获得与肝癌相关的mAb QGA062,并鉴定了其识别的抗原和表位,为肝癌的诊断和FN参与肝癌转移的机制研究提供了重要的制剂。

自身抗原SSB/La抗原优势表位分析

目的 :探讨自身抗原La的抗原优势表位 ,为疾病机制的研究提供依据。方法 :根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析 ,采用PCR法克隆自身抗原La多肽片段的cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白 ,用GST亲合层析柱进行纯化 ,经免疫印迹法与患者阳性血清进行反应。结果 :SSB/La的抗原优势表位主要存在于1～ 2 8,80～ 10 7,10 8～ 188,2 83～ 338位。不同病人在不同病程的La优势表位有所不同。结论 :抗原驱动机制在自身免疫疾病的发病中起重要作用 。

基于抗原表位分析的人乳头瘤病毒16L1壳蛋白基因克隆及表达纯化

目的：选择人乳头瘤病毒（HPV）16L1抗原性最强的一段抗原表位编码区,构建原核表达载体并利用大肠杆菌表达抗原蛋白,为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。方法：借助DNAstar软件分析HPV16L1的CDS区,选择抗原性最强的一段抗原表位编码区,提取HPV16L1编码区的DNA。目的 DNA和p ET32a质粒分别进行双酶切,连接并转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆后转化BL21大肠杆菌,诱导产生HPV16L1重组蛋白,通过市售抗体对重组蛋白的抗原特异性进行鉴定。结果：利用DNAstar软件,选择了抗原表位较富集的碱基序列919~1314bp区段,按常规制备重组蛋白的方法成功制备HPV16L1重组蛋白。抗体鉴定表明,制备的重组蛋白抗原特异性良好。结论：有针对性地制备HPV16L1重组蛋白,可避免其他抗原表位的干扰。经鉴定,HPV16L1重组蛋白抗原特异性良好,将为HPV疫苗的研究及宫颈癌的诊断奠定基础。

HCV C蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其抗原表位分析

HCV是单股正链RNA病毒,不同分离株之间其基因组序列变异较大,不同区段变异程度也各不相同,相比之下C区(核衣壳蛋白)比较保守,推测可能具有重要的生物学功能。 利用各种不同的表达系统对HCV C蛋白的研究结果表明,初步加工产物为191个氨基酸,进一步的研究表明成熟的HCV C蛋白约为120个氨基酸。我们在基因克隆和序列分析基础上研究了不同区段C基因在大肠杆菌中的高效表达,制备了重组抗原。

蛋白质表位分析的方法介绍

蛋白质抗原表位分析的方法对于基础理论和临床研究都是十分重要的.本文归纳总结了近年来用于蛋白质抗原表位分析的几种方法,并对每种方法的特点作了客观的评价.

鸡柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子表面抗原MZ5-7基因的克隆、表位分析及原核表达

用RTPCR的方法,从感染柔嫩艾美尔球虫(Eimeriatenella)第5天的鸡盲肠分离的第二代裂殖子中克隆出MZ57基因,并进行抗原表位分析和原核表达,结果表明,MZ57基因ORF为945bp,与GenBank里已知序列(登录号为L08257)比较核甘酸和氨基酸同源性均为99.9%。应用DNAStar软件对该基因的抗原表位进行了分析,发现其B细胞表位广泛分布在80～300区域,其中80～130区域、190～220区域和300～320区域更为突出,而T细胞基序则集中在123～190区域和220～300区域。根据MZ57基因序列重新设计一对引物,PCR方法扩增出不含信号肽长度为885bp的基因序列,克隆到pET28b获得重组质粒pET28bMZ亚,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白约36.5kDa10poundnote,符合目的蛋白大小;同时应用Westernblot方法与抗第二代裂殖子和子孢子的2种高免血清反应,结果表明抗裂殖子和子孢子血清均能识别MZP(裂殖子蛋白,MZP,merozoiteprotein)。

结核分枝杆菌蛋白Rv0017c T、B的细胞表位分析

运用生物信息学对结核分枝杆菌Rv0017c的T细胞和B细胞的抗原表位性进行预测和筛选。使用BLAST分析Rv0017c与结核分支杆菌复合群及人类蛋白的同源性,运用HLApred、Net CTL、PROPRED、BIMAS、Bcepred、ABCpred、DNAstar和IEDB来分别预测T细胞和B细胞表位。结果显示Rv0017c分别有5个T细胞表位和6个B细胞表位以及2个T-B细胞联合表位(RLQAPVA104-110与GLTTPWMSY414-422)。预测出的T、B细胞候选表位将为结核分枝杆菌的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。

Rv2462c蛋白基本特性及T细胞抗原表位分析

为进行结核分枝杆菌(MTB)Rv2462c蛋白的理化性质分析和T细胞的表位预测,首先在NCBI上查询Rv2462c蛋白的氨基酸序列,运用NCBI Blast对Rv2462c蛋白和人类蛋白进行同源性分析,用ExPASY(ProtParam)分析软件对Rv2462c蛋白进行理化性质分析,用Expasyde的Protscale程序对Rv2462c蛋白进行疏水性分析,用SignalP和TMHMM软件对Rv2462c蛋白进行信号肽和跨膜区预测分析;NetMHCⅡpan3.2Server软件预测Rv2462c蛋白的CD4^+T细胞表位的分布情况;分别用NetMHC、NetCTL和SYFPEITHI三种分析软件预测Rv2462c蛋白的CD8^+T细胞表位的分布情况,综合分析预测结果,最终筛选出T细胞优势表位。结果:综合CD4^+T和CD8^+T细胞表位预测结果,得到一条优势表位RLPGFRPGK40-48。预测出的T细胞优势表位可以为结核病特异性诊断和结核病疫苗开发提供参考。

淋病奈瑟菌外膜蛋白H.8抗原表位分析及其原核表达与纯化

目的分析淋病奈瑟菌外膜蛋白H.8的抗原表位,利用原核表达系统表达并纯化该蛋白。方法运用生物信息学相关软件对目的蛋白进行理化性质分析及B细胞表位、T细胞表位的预测。将外膜蛋白H.8基因克隆至pET32a(+)质粒,并在Rosetta(DE3)宿主菌中构建原核表达系统,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及其免疫反应性。结果生物信息学分析显示外膜蛋白H.8的优势B细胞表位位于20-57、66-73、76-81、93-99、111-117、120-132、141-147、157-160肽段,优势T细胞表位位于125-139、132-146肽段。构建的含有外膜蛋白H.8基因的pET32a(+)重组质粒转化DE3后表达重组蛋白,以IPTG浓度为0.5mmol/L时重组蛋白在上清中的表达效果最佳;Western blot检测该重组蛋白能分别被His标签抗体和淋病奈瑟菌多克隆抗体识别。结论生物信息学方法预测淋病奈瑟菌外膜蛋白H.8含有优势B细胞表位和优势T细胞表位,原核表达的外膜蛋白H.8具有免疫反应性,为淋病奈瑟菌疫苗及其致病机制的研究提供了实验基础。

猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白单抗的制备及其抗原表位的初步分析

应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0～ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。

苦荞过敏蛋白TBW17基因克隆及其抗原表位分析

基于苦荞转录组数据，采用RT-PCR技术克隆到1条苦荞过敏原蛋白基因的cDNA序列TBW17，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行了结构分析和抗原表位分析。结果表明，TBW17含有1个480bp的开放阅读框，编码159个氨基酸，其氨基酸序列与多种植物过敏原蛋白同源性达52．20％～97．48％，蛋白家族分类显示其归为过敏蛋白中常见的Bet v1家族。抗原表位预测分析表明，该编码蛋白的T细胞表位位于91～99位，而B细胞表位位于第9～17、45～53和59～66位。以上结果为进一步对苦荞过敏原蛋白的检测和致敏机制研究提供了一定的理论基础。

结核分枝杆菌RD12区T细胞表位分布情况预测及分析

目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原CD8+T细胞表位的分布情况;利用NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原的CD4+T细胞表位的分布情况。然后,综合CD4与CD8表位预测,筛选出优势表位肽段。结果通过预测与分析,初步筛选出MTB的RD12区4个抗原的CD8+T细胞候选表位16个;CD4+T细胞的强结合候选表位234个,弱结合候选表位505个,综合CD4与CD8表位预测并分析,最终筛选出13个优势表位肽段。结论预测出来的T细胞候选表位将为结核病的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。

用合成多肽分析细粒棘球蚴AgB抗原亚单位的反应性表位

目的通过合成多肽分析细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原的主要反应性表位区域。方法用ELISA法分析来源于细粒棘球蚴AgB1、AgB2和AgB4亚单位基因序列的5个人工合成多肽KK36、RK30、B4-1、B4-2和B4-3,及上述3个亚单位重组抗原在血清抗体检测中的反应性,共检测细粒棘球蚴病(115例)、多房棘球蚴病(54例)、囊尾蚴病(22例)患者和健康人(18例)血清209份。用受试者工作特征(ROC)曲线分析合成多肽和重组抗原在血清检测中的诊断效率。结果多肽KK36和RK30诊断细粒棘球蚴病的敏感性分别为89.2%和85.0%,特异性为62.5%和59.4%,诊断效率分别为84.8%和80.4%,与AgB1(84.5%)和AgB2(81.2%)抗原诊断效率相近,拟合AgB1和AgB2重组抗原的ROC曲线。来源于AgB4抗原的3个多肽B4-1、B4-2和B4-3检测细粒棘球蚴病患者血清的诊断效率分别为49.4%、57.9%和77.4%。其中,B4-3的反应性最佳,B4-2也有一定的反应性。结论 KK36和RK30完整地包含了AgB1和AgB2抗原的反应性表位区域。B4-2和B4-3多肽均含有AgB4抗原的部分表位区域,推测AgB4抗原的表位区域位于序列的中后段。

IgE表位分析及其拮抗剂的分子设计研究进展

IgE类型的抗体是过敏性疾病的始动因素,抗IgE抗体能特异性地识别并结合游离IgE分子,下调IgE分子水平,人源化抗IgE单克隆抗体的出现更是为过敏性疾病带来了新的治疗方法。临床研究治疗哮喘、过敏性鼻炎以及食物过敏症等疾病中获得的大量数据更显示了其良好的疗效。与传统临床治疗手段相比,人源化抗IgE抗体具有副作用小,安全性高等优点。此外,治疗过敏性疾病的拮抗分子的研究也十分盛行。在分析IgE分子功能表位的基础上进行适当的分子设计可获得潜在的治疗过敏性疾病的拮抗剂如抗IgE抗体类似多肽、IgE类似肽以及其他抑制性小分子等。

恶性疟原虫cDNA片段FMPf01编码多肽抗原表位分析

FMPf01是经两轮免疫学方法筛选恶性疟海南株（FCC/HN）红内期cDNA表达文库得到的一个强阳性克隆。本文用Bal31核酸酶消化该cDNA片段在不同的反应时间取样,亚克隆于融合蛋白表达载体pWX146,分析插入核苷酸序列编码多肽免疫反应性,同时测定其核苷酸序列,初步将FMPf01编码多肽抗原表位定位。