大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究

为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。

O型口蹄疫病毒VP4蛋白一个保守性表位的精细鉴定

口蹄疫病毒(FMDV)的结构蛋白VP4在7个血清型之间是非常保守的,对其抗原表位最小基序的测定有助于开发广谱性多肽疫苗.本研究采用生物合成肽法,利用豚鼠抗FMDV O型标准血清,对最新流行的FMDV O型毒株O/BY/CHA/2010的VP4蛋白进行了线性表位扫描作图研究.结果表明:在覆盖VP4蛋白全长序列的10个18聚肽中,发现1个能与豚鼠抗FMDV O型标准血清发生免疫印迹反应的抗原性肽VP4-3;B细胞表位鉴定确定了抗体识别VP4-3的最小基序是INNYYM;该表位位于VP4蛋白的三维结构表面;对7个FMDV血清型的122个毒株同源蛋白质进行序列比对,发现这一表位在7个FMDV血清型的120个毒株中是100%保守.