梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性

目的 采用含梅毒螺旋体 (Tp)不同优势表位抗原连接嵌合表达 ,筛选用于ELISA试剂检测梅毒抗体的多表位抗原。方法 筛选Tp优势抗原表位 ,进行不同的连接嵌合表达 ,用于ELISA试剂检测 3 0份国家参考品血清。结果 不同抗原组合连接 (Tp15 47、Tp42 15 47、Tp17 42 15 47)对血清的反应性不同。结论 含有多个抗原表位的嵌合抗原 。

刚地弓形虫多表位抗原基因在转基因番茄中的表达研究

目的获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株。方法用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴;经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育,获得Tg-MAG转基因番茄植株,练苗后移栽花盆中培育至开花、结果。用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹(Western blotting)分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定。结果获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定,得到预期360bp的Tg-MAG片段,经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量(Mr)为11900的Tg-MAG重组蛋白,且8株具有免疫反应性,其中有2株于番茄果实中所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)单克隆抗体K7H3发生强免疫反应。结论获得Tg-MAG转基因番茄株系,在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白。

乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性

目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。

HCV复合多表位抗原基因表达及免疫原性的研究

分类号Ｑ７８１文献标识码Ａ文章编号０００１６２０９（１９９９）０３０２６８７１丙型肝炎是常见的传染病之一，易于慢性化及发展为肝硬化，且与肝癌的发生关系密切，目前尚无理想的防治手段。国内外对丙型肝炎疫苗的研究仍处于克隆表达ＨＣＶ部分基因产物或合成...

伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的克隆与序列测定

用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到 pMD18-T载体后 ,转化大肠杆菌XL 1-blue菌株。重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较 ,确证含有PRV闽A株 gE基因的表位抗原编码区。此区段与PRVRice株相应区段的DNA序列同源性为 97 3% ,氨基酸序列同源性为 94 7%。

弓形虫多表位抗原基因DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护性研究

目的以弓形虫多表位抗原基因DNA疫苗免疫小鼠,评价该疫苗对弓形虫感染产生的免疫保护作用。方法利用PCR技术和亚克隆技术,构建弓形虫多表位抗原基因真核表达重组质粒pcDNA3-MAG,以质粒纯化试剂盒大量制备质粒,同时分别以载体质粒pcDNA3和PBS液为空质粒对照和空白对照,与lipofectin按5∶2的比例混合后,经股四头肌注射免疫小鼠,间隔两周,连续免疫3次,通过检测小鼠血清中特异的IgG抗体、IFN-γ和IL-4含量,评价疫苗产生的体液免疫和细胞免疫水平。以强毒型RH株弓形虫感染免疫小鼠,统计小鼠的存活时间,评价疫苗产生的免疫保护性。结果经双酶切及DNA测序鉴定,所构建的重组质粒pcDNA3-MAG读码框架正确。与免疫前及载体质粒和空白对照组相比,小鼠免疫后产生特异性IgG抗体,并引发高水平IFN-γ。攻虫后,实验组较对照组小鼠存活时间明显延长。结论弓形虫多表位抗原基因DNA能诱导BALB/c系小鼠产生特异的细胞免疫和体液免疫,对弓形虫感染可产生一定的免疫保护性。

布氏杆菌表面特异性多表位抗原的串联表达与免疫磁珠的初步建立(英文)

目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E.coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,IPTG诱导后表达出30kDa的重组蛋白,亲和层析纯化后将其进行Western blot分析、间接ELISA鉴定和兔免疫试验,制备的抗血清经亲和层析纯化后,包被成免疫磁珠并用于布氏杆菌富集。结果表达的重组蛋白能与牛抗布氏杆菌血清反应,其抗血清与布氏杆菌发生良好反应,纯化抗体包被的免疫磁珠能特异性吸附布氏杆菌。结论获得的布氏杆菌特异性抗体和免疫磁珠具有良好的应用前景。

丙型肝炎病毒多表位抗原的原核表达及免疫原性分析

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)十表位抗原HCVe在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。方法:在大肠杆菌DH5α中表达非融合蛋白HCVe,纯化该蛋白后利用Westerb blot分析其抗原反应性。免疫小鼠,检测其免疫特异性。结果:HCVe十表位抗原能在原核表达系统中高效表达。Western blot和ELISA分析表明HCVe十表位抗原能与HCV病人阳性血清特异性结合,并可诱发小鼠产生特异性HCV抗体。结论:表达的HCVe十表位抗原具有特异的抗原反应性及免疫原性。

丙型肝炎病毒多表位抗原在恒河猴中的免疫应答及保护性试验

利用ＨＣＶ抗原多表位来研制ＨＣＶ疫苗是目前的一个新方向。本研 究利用ＨＣＶ的ＨＣＶ的５个保守表位串联，并加入破伤风类毒素上的一个Ｔ细胞激活位点，设计成 一个ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ，在大肠杆菌中表达，用此蛋白免疫恒河猴，诱导猴体产生了较 高的抗体水平，滴度达１∶１０００以上，在免疫后的６０周抗体滴度仍达１∶４０以上。同时，在免 疫后６周用人ＨＣＶ阳性血清攻击猴子，免疫ＰＣＸ的猴子出现一过性ＡＬＴ升高，在攻击后三周内用 ＲＴ－ＰＣＲ检测到猴血清内ＨＣＶ的ＲＮＡ阳性。结果表明，免疫多表位的ＰＣＸ蛋白可以诱导机体产生 高水平的免疫应答。

鸡法氏囊病毒多表位抗原的表达及免疫特性分析

为进行传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位抗原的原核表达和免疫特性分析,应用重叠延伸PCR技术扩增合成由病毒VP2和VP3蛋白多个表位序列构成的重组抗原基因,并将抗原基因与原核表达载体pBVIL1重组,表达多表位融合抗原,通过与标准抗血清反应和动物免疫分别检测表达抗原的免疫反应性和免疫原性。结果显示,经42℃诱导后,含重组载体的大肠杆菌表达了31 kD的抗原蛋白,Western blot鉴定出现阳性条带,免疫小鼠后,抗血清的滴度为1∶6 400。说明原核表达载体构建成功,大量表达的多表位融合抗原具有IBDV抗原反应性。

应用蛋白芯片技术筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原

目的筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原以便研发新型戊型肝炎诊断试剂。方法通过计算机辅助软件分析,利用改构的高效表达载体表达了HEV 1型与HEV 4型ORF2和ORF3的17种表位抗原,利用蛋白芯片技术平台筛选优势表位抗原。结果在所获得的17种表位抗原中筛选到4种可以作为研发新型戊型肝炎诊断试剂候选抗原的优势表位抗原。结论利用蛋白芯片技术快速准确地筛选到4种可用于研发新型戊型肝炎诊断试剂的候选优势表位抗原。

丙型肝炎病毒与恶性疟原虫复合多表位抗原基因在小鼠及家兔中免疫应答的研究

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)及恶性疟原虫 (Pf)复合DNA疫苗的可行性。方法 :把HCV复合多表位抗原基因PCX与Pf复合基因AB克隆到带CMV启动子的真核表达载体pcDNA3中 ,构建真核表达载体pcDNA3 CAB ,肌肉注射免疫小鼠及家兔 ,检测其诱发特异性免疫应答水平及安全性。结果 :小鼠及家兔分别于免疫后第 6周及第 8周可检测到抗GZ PCX抗体 ,于第 10周达最高 ,滴度分别为 1:40 0及 1:3 2 0 0 ,但持续时间较短 ;免疫血清可识别Pf抗原 ;免疫动物还可产生针对GZ PCX融合蛋白的迟发性超敏反应 ;免疫后小鼠体重正常 ,肝脾脏未见明显肿大 ,具有良好的安全性。结论 :HCV Pf双价多表位DNA抗原基因在小鼠及家兔中可诱发特异性免疫应答 ,但抗体的持续时间较短。

猪流感病毒多表位抗原的小鼠黏膜免疫试验

为探讨经黏膜途径免疫接种猪流感病毒(SIV)多肽疫苗的可行性,选择STV主要结构蛋白血凝素(HA)的T、B抗原表位,将多个表位片段串联,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,对串联表达的重组猪流感病毒蛋白SIV-ep1、SW-ep2、SIV-el2进行了小鼠免疫试验。重组蛋白以包涵体形式表达,经洗涤定量后,采用灌胃途径免疫6周龄KM小鼠,检测免疫小鼠抗体及细胞免疫水平。结果发现三免后各免疫组血清IgG抗体与PBS对照组差异极显著(P<0.01);黏膜分泌型IgA抗体,所有免疫蛋白组与PBS组差异均极显著(P<0.01);细胞免疫检测,所有免疫组小鼠外周血T淋巴细胞增殖明显;猪流感病毒血凝抗体检测,SIV-ep1免疫组、SIV-ep2免疫组、SIV-ep1与LT蛋白免疫组抗SIVH1N1亚型HI效价达1:1024,SIV-el2蛋白免疫组HI效价达1:512。结果表明,猪流感病毒重组多表位抗原灌胃免疫小鼠,能产生理想的黏膜免疫抗体和血清抗体。

HCV多表位抗原基因重组减毒口服活菌苗的研究

把丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)复合多表位抗原基因PCX与 β 半乳糖苷酶基因 (GZ)融合后 ,构建重组减毒鼠伤寒沙门氏菌口服活菌苗SL32 61 ( pWR/PCX) ,免疫小鼠及家兔后 ,于第 6周始可检测到低水平的抗 GZ PCXIgG( 1∶2 0 0 ) ,至 3月时最高滴度分别达1∶80 0及 1∶2 560 0 ,均显著高于宿主菌SL32 61组及空白对照组。在免疫小鼠的肠道灌洗液中可检测到抗 GZ PCXsIgA。GZ PCX抗原可促进免疫小鼠及家兔淋巴细胞增殖 ,诱发明显的迟发性超敏反应 (DTH)。口服免疫后小鼠体重出现一过性下降 ,但未见其它明显的毒性作用 ,安全性较好。本研究从新的角度探讨了HCV复合多表位重组口服活菌苗的可行性 ,为HCV疫苗的研究提供新的实验依据。

甲型H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段的克隆和表达

目的:分析比对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)、聚合酶B2(PB2)和聚合酶A(PA)抗原的序列,克隆表达保守的和变异的表位抗原区段,为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。方法:采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1流感病毒和我国猪流感病毒浙江株NA、PB2和PA抗原序列,并预测筛选NA、PB2和PA抗原表位保守区段与变异区段,采用PCR逐步合成法合成NA、PB2和PA表位抗原区段基因序列,并利用原核表达载体pBVIL1进行克隆表达。结果:筛选的保守表位抗原区段和变异表位抗原区段为NA/135～180aa、NA/310～350aa、PB2/1～80aa、PA/41～90aa、PA/231～280aa和PA/341～400aa;获得6条表位抗原区段基因序列,且6条表位抗原区段均获得了高效表达,得到纯化后的抗原。结论:获得了A/H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段,为进一步研制特异的甲型流感病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。

丙型肝炎病毒多表位抗原重组体免疫原性分析

目的 研究丙型肝炎病毒 (HCV)多表位抗原重组体在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。方法 利用DNA重组技术将构建的HCV多表位抗原重组体克隆入原核表达载体pBV2 2 0并在BL 2 1中表达 ,非融合表达蛋白经SDS PAGE检测 ,排阻层析纯化 ,利用ELISA和免疫印迹分析其抗原反应性。免疫昆明鼠和猕猴 ,并检测其抗体和特异性CTL(Cyto toxicTlymphocyte) ,在抗体转阴后再次用HCV病人血清攻击以检测其免疫应答能力。结果 HCV多表位重组体在pBV2 2 0 BL 2 1中表达量占菌体总蛋白量的 15 %。Western blot和ELISA分析表明HCV多表位抗原能与HCV病人血清特异性结合 ,抗体水平和特异性CTL检测结果显示该抗原肽能诱导小鼠和猕猴产生较好的抗体水平和特异性CTL效应。用病人血清再次攻击后受试动物的抗体迅速阳转。

家禽三联多表位抗原蛋白的预测

采用生物信息学的知识和表位预测方法对家禽新城疫病毒、传染性法氏囊病毒和传染性支气管炎病毒三种传染性病原体的抗原表位,进行了预测,并对重组抗原进行了预测,为三联多表位疫苗研究奠定基础.

利用真核表达载体构建表达PRV闽A株gE基因表位抗原编码区片段的重组质粒

根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与两种真核表达载体pPICZaA、pAcGP6 7A的序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这 2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP6 7A载体 ,转化大肠杆菌TOP 10菌株及XL1_Blue菌株 ,获得了含伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pPICZaA_FS与pAcGP6 7A_FS。序列测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒(HAV)复合多表位抗原基因VPX插入到乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因中,得到CVPX融合基因。将CVPX克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明:融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。

EB病毒Rta优势表位抗原的克隆表达及在应用ELISA诊断鼻咽癌中的价值

目的制备高活性EB病毒立即早期蛋白Rta优势表位抗原,并初步评价该抗原在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)诊断中的价值。方法分析Rta氨基酸序列,选取抗原优势表位Rta(301~440aa),合成目的基因,连接pBVGST-6His载体,构建重组pBV-Rta表达质粒,进行诱导表达获得纯化抗原。采用间接ELISA初步评价优势表位抗原在鼻咽癌诊断中的价值,以纯化的pBV-Rta优势表位抗原为包被抗原,抗人IgA,IgG和IgM为二抗,检测由烟台毓璜顶医院提供的50例经临床病理确诊的NPC患者血清样本和90例健康体检者血清样本。结果获得了高效原核表达的pBV-Rta优势表位抗原(301~440aa),经过小样本验证,确定pBV-Rta具有良好的抗原活性和特异度。放大样本进行检测,基于Rta优势表位抗原的Rta-IgG间接ELISA方法检测灵敏度和特异度分别为73.08%和95.79%。Rta-IgG检测的AUC值为0.860。结论Rta优势表位抗原pBV-Rta是优选的可以用于Rta-IgG检测的抗原,利用该抗原所建立的间接ELISA检测方法可以很好地区分鼻咽癌患者和健康对照。