γδT细胞TCR分子与Mtb-Ag表位结合的初步探讨

探讨采用毛细管电泳(CE)法分离检测结核杆菌抗原(Mtb-Ag)的活性成分能与γδT细胞TCR分子进行表位结合.试验温度25℃;电泳毛细管:熔融石英毛细管55cm(40cm处检测窗口)×50μm i.d.;进样压力0.5 psi;进样时间5.0s;缓冲溶液浓度为0.05mol·L^(-1)(p H=10.20)的乙酸钠溶液;分离电压+15 k V.该方法能依据相对分子质量大小分离Mtb-Ag样品活性成分.样品加标回收率为96.75%,相对标准偏差低于7.45%.采用CE法分离检测Mtb-Ag样品中的活性成分能与γδT细胞TCR分子进行表位结合.

山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。

大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者血浆IgG亚型及FⅧ结合表位鉴定

目的确定1例大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者的临床和实验室诊断；通过体内外干预实验观察获得性血友病A患者体内的FⅧ抑制物对正常人血浆及兔FⅧ凝血活性（FⅧ：C）的影响；确定患者FⅧ抑制物的IgG亚型和结构表位，以揭示该病发病的分子机制。方法用Ⅰ期法测定患者血浆FⅧ：C；以Bethesda单位（BU）表示FⅧ：C抑制物滴度；用蛋白A一琼脂糖柱纯化患者及正常人血浆IgG；用活化部分凝血活酶时间（APTT）分析其对FⅧ：C的抑制作用；观察FⅧ抑制物对兔血浆FⅧ：C活性的抑制作用；分别用抗IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体作Western blot，结合灰度扫描确定患者血浆IgG亚型相对表达量；散射比浊法测定患者及正常人体内各IgG亚型浓度；用FⅧ／FⅧ抑制物固相结合试验及Western blot鉴定患者IgG抗体（FⅧ抑制物）作用于FⅧ的具体“表位”。结果①患者APTT明显延长，正常血浆不能纠正；FⅧ：C〈1．5％，FⅧ抑制物滴度为147．8BU；②纯化的患者IgG以剂量依赖方式抑制正常人混合血浆FⅧ：C；动物实验显示患者血浆能以时间依赖方式延长兔血浆APTT；@Western blot结果显示FⅧ抑制物成分主要为IgG4，其次为IgG1，FⅧ抑制物作用于FⅧ：C的结构相对分子质量为44×10^3。散射比浊法测定结果显示患者体内IgG4、IgG4含量明显高于正常人。结论研究结果证明大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者体内FⅧ抑制物对FⅧ：C有抑制作用，FⅧ抑制物的IgG亚型主要为IgG4，其次为IgG1；患者FⅧ抑制物作用于FⅧ的表位为相对分子质量为44×10^3的肽段，揭示了该获得性血友病A发生、发展的分子机制。

羊朊毒体单抗结合表位分析

通过分段表达PrP核心片段和人工合成多肽,分析5株羊朊毒体单抗结合表位。分段表达PrP核心片段,通过PCR方法扩增目的片段,经酶切、连接后,将目的片段插入质粒pET32a,在大肠杆菌BL21中表达。将表达的系列融合蛋白与单抗进行免疫转印试验,根据反应情况确定单抗结合的大致部位,在此基础上设计合成多条针对性多肽,用ELISA方法进一步确定3株单抗的结合部位;通过与6段融合蛋白反应证明5株单抗的结合部位分别为:2H3在199aa～213aa之间,4C6、5F11和7F11在139aa～168aa之间,7F1在214aa～227aa之间,与3段人工合成多肽进行ELISA反应进一步得到4C6、5F11和7F11抗原结合表位在149aa～158aa之间;本研究确定了5株单抗在PrP分子上的结合部位,为羊痒病和牛海绵状脑病的检测、发病机制的研究奠定了基础。

SARS冠状病毒刺突蛋白的研究进展

SARS冠状病毒S蛋白是病毒颗粒最大的结构蛋白和最重要的表面抗原。该蛋白在介导病毒颗粒与宿主细胞受体结合、融合的过程中起着关键作用。它是病毒中和性抗体的靶点,在疫苗研究和抗病毒治疗研究中均占有重要地位。本文就SARS流行以来有关S蛋白的研究作一综述。

抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价

目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体。方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig(Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN-α的双特异性抗体FIT2的表达载体,并在Free Style 293-F系统中进行瞬时转染表达;采用protein A柱亲和纯化目标双特异性抗体,SDS-PAGE初步考察目标抗体的相对分子质量、组分及纯度;采用forte BIO系统鉴定其整体结合活性,并分别确认双特异性抗体的2个抗原结合表位的活性;通过ELISA方法评价其特异性,37℃放置实验鉴定其稳定性,Daudi细胞增殖实验定量评价双特异性抗体的中和活性。结果:构建了双特异性抗体FIT2表达载体,在Free Style 293-F系统中实现了瞬转高效表达,表达量为127 mg/L,亲和纯化获得目标双特异性抗体FIT2,纯度可达98.5%;FIT2结构稳定,具有良好的特异性,未发现与其他类型的干扰素及细胞因子存在交叉反应;FIT2对IFN-α1b-His的结合活性显著优于2个亲本抗体,特别是解离过程的改善尤为明显;同时,FIT2有效保留了2个抗原结合表位的活性;细胞增殖实验结果显示,FIT2对IFN-α1b具有优越的中和活性,其中和效能显著高于任一亲本抗体,明显优于2个亲本抗体联用。结论:获得了对IFN-α1b中和活性有突破性提升的双特异性抗体FIT2,特异性良好且结构稳定,有望成为治疗IFN-α相关疾病的良好的成药候选分子。

卡瑞利珠单抗,一种人源化抗PD-1 IgG4亚型单克隆抗体在临床前研究中表现出优异的抗肿瘤活性以及良好的安全性

卡瑞利珠单抗是一种人源化的抗PD-1单克隆抗体。在体外与人和食蟹猴PD-1蛋白具有纳摩尔级别的高亲和力,但不结合鼠源PD-1蛋白。它在体外有效阻断PD-1/PD-L1信号通路的同时还可以激活T细胞。卡瑞利珠单抗与PD-1独特的结合表位同PD-1和PD-L1结合表位有部分的重叠,证明了卡瑞利珠单抗对PD-1/PD-L1具有很强的结合阻断活性。在PD-1转基因小鼠皮下移植瘤模型中,卡瑞利珠单抗可以显著抑制MC-38和B16F10两种细胞在小鼠体内的生长,抑瘤作用优于已上市的其它PD-1单抗。此外,卡瑞利珠单抗在食蟹猴中表现出良好的药代动力学和安全性特征。并且,我们发现了卡瑞利珠单抗具有很弱的VEGFR2结合活性,但即使在很高的剂量下也不会激活VEGFR2信号通路。综上所述,我们证明了卡瑞利珠单抗是优秀的肿瘤治疗药物,现有数据也支持其在临床实践中进一步探索其有效性和安全性。

荞麦低敏食品的研究与展望

荞麦食品日益受到人们的关注,关于荞麦低敏食品的开发在国内外的研究报道却很少。通过荞麦过敏的发病率,过敏蛋白的致敏类型,检测方法,过敏原结合表位研究现状,低敏食品开发借鉴方法等方面进行总结描述,希望对荞麦低敏食品开发提供一定参考。

人类抗人CD40单克隆抗体免疫激活活性依赖于其Fc与FcγRⅡB相互作用

激动型抗CD40单抗能够激活APC表面CD40免疫共刺激信号,促进其成熟和交叉提呈抗原并激活抗原特异性CTL以杀伤肿瘤,多年来一直是肿瘤免疫治疗的研究热点。以鼠源抗体为基础的研究表明,激动型抗鼠CD40单抗的活性受到抑制性Fcγ受体(FcγRⅡB)的驱动,但尚不清楚这一调控机制是否影响人类抗人CD40(hCD40) IgG单抗。为此,作者研究了Fcγ受体(Fcγreceptor, FcγR)结合能力对人类抗hCD40单抗活性的影响,发现抗体恒定区(Fc)失去FcγR结合能力会严重削弱人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;同时,FcγRⅡB特异性阻断抗体可以显著抑制人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;此外,增强抗体Fc的FcγRⅡB结合能力能够提高抗体的激动活性。而且,多个抗原结合表位不同的人类抗hCD40单抗在实验中表现一致,说明抗CD40单抗的激动活性普遍依赖于FcγRⅡB。上述研究有助于探索激动型抗CD40单抗的活性调控规律,为设计更好的激动型抗hCD40抗体提供思路。