恶性疟原虫多表位重组疫苗在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 在体外表达和纯化目的蛋白 ,为下一步抗攻击试验提供安全有效的产品。方法 将化学合成的恶性疟原虫保护性抗原复合基因 (HGFSP)与表达载体pRSET重组 ,在大肠杆菌BL2 1进行表达 :工程菌经超声破菌、离心、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析等步骤纯化。结果 SDS -PAGE显示表达产物以非融合、可溶性的形式表达 ,相对分子质量为 2 3kDa ,占总菌体蛋白的 2 3 65 % ;纯度可达 95 %以上。Western -blot分析表明表达产物具有免疫原性。结论 成功构建pRSET -HGFSP重组表达系统并得到高效表达 。

重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗的小鼠保护性

目的评价重组表达的轮状病毒(R V)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性。方法在以FlockH ouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FH V-R NA2系统)中构建和重组表达R V V p4蛋白上第223～262位抗原表位(R EA BC)在原核系统犤;质粒pET,大肠杆菌BL21(D E3)犦中表达的REABC免疫小鼠用细胞培养适应的参照RV W a(G1PA型)和SA11(G3P2型)经口腔灌胃攻击,对R V攻击后的免疫小鼠和对照小鼠的感染症状、排毒情况、血清抗体中和病毒感染性效价进行测定和分析。结果R EA BC可诱导免疫小鼠产生较强的抗-W a和抗-SA11株血清中和抗体和特异的免疫记忆反应,有效保护免疫小鼠对W a和SA11的攻击(不腹泻),减少病毒在体内复制水平和排毒时间,与对照组相比差异具有显著性(P<0.001)。结论重组表达RV抗原表位REABC对小鼠具有较好的免疫保护效果和安全性。

恶性疟原虫CTL抗原微表位基因重组疫苗的构建和免疫原性预测

选用中国人群常见的MHCⅠ类分子HLA-A2.1和HLA-B51限制性恶性疟CTL抗原表位, 构建了单表位重组疫苗pcDNA3.1/tr和pcDNA3.1/sh, 再将上述表位DNA序列串联, 构建成双表位重组疫苗pcDNA3.1/ts. 将3种重组疫苗分别转染C1R/HLA-A2.1和K562/HLA-B51细胞后均证实表达. 单表位重组疫苗pcDNA3.1/tr和pcDNA3.1/sh的表达分别促进细胞表面HLA-A2.1和HLA-B51的稳定性. 免疫共沉淀实验证实上述表位促进细胞表面HLAⅠ类分子组装, 并提示特异性表位在细胞表面的递呈. 双表位重组疫苗pcDNA3.1/ts在以上两个不同细胞系中的表达与两个单表位微型基因的表达结果相似, 证明双表位肽的串联编码构型不影响肽链中不同表位的特异性抗原递呈. 这一研究结果为进一步设计具有广泛覆盖率的多表位恶性疟重组CTL疫苗提供了理论和实验基础. 与常规体外CTL实验不同, 本研究观察微表位基因在表达特定MHCⅠ类分子的人细胞中进行内源性抗原递呈的过程, 其方法更接近人体内环境, 对于人类CTL抗原表位的确定和人重组CTL表位疫苗免疫原性的预测具有重要意义.