降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞心肌素表达及细胞表型改变的作用

目的:研究降钙素基因相关肽(CGRP)对血管平滑肌细胞(VSMCs)心肌素表达的影响及对细胞表型改变的调节作用。方法:取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMCs,分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组(加入AngⅡ处理)、CGRP组(加入AngⅡ和CGRP处理)和CGRP8-37组(在AngⅡ和CGRP基础上加入CGRP8-37)。Western blot法检测VSMCs中心肌素及细胞表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN)表达情况。结果:在VSMCs培养中,细胞心肌素表达水平随着培养时间延长逐渐降低,细胞培养48 h和72h时心肌素表达水平较基线水平显著降低(P<0.05);而加入CGRP处理后,心肌素表达水平逐渐增加,与基线水平比较,加入CGRP培养后48 h和72 h时细胞心肌素水平显著增加(P<0.05)。同时,在VSMCs培养48 h时,AngⅡ组细胞心肌素水平较对照组下降(P<0.05),且α-SMA表达亦相应下降(P<0.05),而OPN表达水平显著增加(P<0.05);CGRP组VSMCs心肌素水平较AngⅡ组增加,伴随着α-SMA表达水平增加(P<0.05),相反地OPN表达水平下降(P<0.05);CGRP8-37组心肌素和α-SMA表达水平较CGRP+AngⅡ组降低(P<0.05),而OPN表达较CGRP组增加(P<0.05)。结论:CGRP通过促进VSMCs心肌素的表达而抑制细胞表型转换,使细胞维持收缩表型,且这一作用是CGRP通过与其受体结合后实现的。

炎性狭窄胆管壁中成纤维细胞表型改变及增殖的意义

目的 探讨炎性狭窄胆管壁中成纤维细胞表型改变及增殖在炎性胆管狭窄发生中的作用。方法 对人正常胆管壁及炎性狭窄胆管壁组织学结构及其成纤维细胞的密度和超微结构进行观察。结果 成纤维细胞是胆管壁中合成胶原的主要细胞 ;炎性狭窄胆管壁的纤维化增厚明显 ,其成纤维细胞表型改变 ,由相对静止转化为功能活跃状态 ,并进一步向肌成纤维细胞转化 ,且大量增殖。结论 静止型成纤维细胞转化为功能活跃的成纤维细胞及肌成纤维细胞并大量增殖 。

血管平滑肌细胞表型改变与肿瘤抑制基因p21^(WAF1)和p53的关系

目的:增殖表型血管平滑肌细胞中肿瘤抑制基因p21WAF1基因和p53基因表达可能具有对抗血管平滑肌细胞的增殖能力,观察血管平滑肌细胞表型变化与肿瘤抑制基因p21WAF1和p53的关系。方法:实验于2003-09/10哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。应用胶原酶消化法建立大鼠原代培养血管平滑肌细胞,去血清诱导体外培养血管平滑肌细胞分化。流式细胞分析检测不同表型血管平滑肌细胞增殖能力,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹分析方法检测血管平滑肌细胞分化相关基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin表达变化,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹杂交方法检测p21WAF1和p53基因表达变化。结果:去血清培养后,原代培养大鼠血管平滑肌细胞增殖能力下降,DNA合成前期细胞明显增加(48.38±2.35)%,细胞分化基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin明显表达。肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达下降。在200g/L血清培养后,大鼠血管平滑肌细胞增殖旺盛,DNA合成前期细胞相对较少(28.80±1.58)%,细胞分化相关基因平滑肌特异性肌动蛋白和calponin表达明显下调,肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达显著增加。结论:肿瘤抑制基因表达与血管平滑肌细胞表型状态密切相关。

高血压对大鼠脑动脉平滑肌细胞表型改变影响的研究

探讨高血压对脑动脉平滑肌细胞 (SMC)表型改变的影响。 方法 将SD大鼠造成肾性高血压 ,并分为正常组和高血压 6、9及 1 2周组。各组动物脑标本分别做HE染色和α -Actin及增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组化染色。比较各组HE染色标本的动脉内径和管壁厚度的比值 ;对各组动物平滑肌细胞α -Actin和PCNA染色阳性和阴性的动脉进行比较。 结果 随高血压时间延长 ,脑动脉硬化性改变逐渐明显 ;平滑肌PCNA染色阳性的脑动脉逐渐增多。 结论 本实验提示高血压有可能促进颅内动脉SMC由收缩型向合成型转变。

机械敏感性离子通道Piezo1介导高静水压诱导大鼠冠脉平滑肌细胞表型改变

目的探究Piezo1在高静水压诱导的冠脉平滑肌细胞(CASMCs)表型改变中的作用机制。方法分别于0、120和180 mmHg压力下干预原代Wistar大鼠CASMCs 24 h,Western blot检测Piezo1、收缩表型相关蛋白Cav1.2、SM-MHC、α-SMA和合成表型相关蛋白OPN、MMP-2、Col1a1的表达,激光共聚焦检测压力对Piezo1介导的钙离子内流的影响;分别用Piezo1激动剂Yoda1、抑制剂GsMTx4处理CASMCs以及siRNA敲低Piezo1,Western blot检测收缩表型及合成表型相关蛋白的表达。结果与0 mmHg相比,120和180 mmHg干预CASMCs后,Piezo1、OPN、MMP-2、Col1a1表达增加,Cav1.2、SM-MHC、α-SMA表达减少。180 mmHg高压干预后,Piezo1介导的钙离子内流强于常压对照组,但敲低Piezo1后有所下降。在常压下,用Yoda1处理CASMCs后,收缩表型相关蛋白表达减少,合成表型相关蛋白表达增加。与对照组相比,180 mmHg下分别用GsMTx4抑制和siRNA敲低Piezo1后,收缩表型相关蛋白表达增加,合成表型相关蛋白表达减少。结论Piezo1在高静水压诱导CASMCs由收缩表型向合成表型转变中起促进作用。

与乳腺良性硬化性病变相关的肌上皮细胞表型改变(英)

导管原位癌周围的肌上皮细胞免疫表型与正常不同，在乳腺良性硬化性病变中的腺体周围也会出现肌上皮细胞，但其免疫表型特征是不明确的。我们选用了7种肌上皮细胞标记物（SMA、钙结合蛋白、平滑肌肌球蛋白重链、p63、CD10、CK5／6、p75）评估48例乳腺良性硬化性病变的肌上皮细胞表型，将硬化性病变中腺体周围的肌上皮细胞与同一切片内正常导管和小叶内的肌上皮细胞染色强度进行对比。

与乳腺良性硬化性病变相关的肌上皮细胞表型改变

导管原位癌周围的肌上皮细胞免疫表型与正常不同。在乳腺良性硬化性病变中的腺体周围也会出现肌上皮细胞，但其免疫表型特征是不明确的。我们选用了7种肌上皮细胞标记物（SMA、钙结合蛋白、平滑肌肌球蛋白重链、p63、CDl0、细胞角蛋白5／6、p75）评估48例乳腺良性病变的肌上皮细胞表型，将硬化性病变中腺体周围的肌上皮细胞与同一切片内正常导管和小叶内肌上皮细胞的染色强度进行对比。

乳腺良性硬化性病变相关的肌上皮细胞表型改变

导管原位癌周围的肌上皮细胞免疫表型与正常不同。在乳腺良性硬化性病变中的腺体周围也会出现肌上皮细胞,但其免疫表型特征不明确。我们选用7种肌上皮细胞标记物（SMA、钙结合蛋白、平滑肌肌球蛋白重链、p63、CD10、CK5/6、p75）评估48例乳腺良性病变的肌上皮细胞表型,

降钙素基因相关肽调节平滑肌细胞表型改变对动脉损伤后新生内膜增生的作用

目的通过降钙素基因相关肽(CGRP)干预体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)和体内颈动脉损伤大鼠模型,探讨其对VSMC表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖的影响。方法取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMC,给予血小板源生长因子(PDGF,终浓度为2.0×10-8 mol/L)和(或)CGRP(终浓度为3.5×10-7 mol/L)处理,利用Western blot法检测细胞表型改变,噻唑蓝法和流式细胞仪检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力;同时建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组,通过HE染色观察新生内膜形成情况,Western blot法检测损伤动脉中VSMC表型改变和信号转导通路细胞外信号调节激酶(ERK)激活情况。结果PDGF明显诱导体外培养的VSMC表型改变;而CGRP处理则显著抑制PDGF诱导的细胞表型转换,降低细胞增殖[48h:CGRP组(0.20±0.03)×105比PDGF组(0.67±0.08)×105,P<0.05;72h:CGRP组(0.17±0.04)×105比PDGF组(1.42±0.11)×105比对照组(0.45±0.05)×105,P<0.05]和迁移能力[24h:CGRP组(2.12±0.21)%比PDGF组(5.04±0.52)%比对照组(4.87±0.44)%,P<0.05;48h:CGRP组(2.84±0.43)%比PDGF组(5.78±0.74)%比对照组(5.50±0.37)%,P<0.05];CGRP降低新生内膜形成,伴随着损伤动脉中VSMC合成表型标志蛋白骨桥蛋白表达减少,并抑制细胞外信号激活途径ERK的激活。结论 CGRP可能通过抑制ERK1/2信号途径激活而调节VSMC表型,抑制细胞增殖和迁移,从而降低动脉损伤后新生内膜形成。

oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物调节A7r5表型转化及脂质转运分子表达

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab complex)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A7r5)表型转化和细胞表面脂质转运分子的影响,以及toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路在其中的作用。方法分别用oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/抗β2GPⅠ抗体复合物、β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物、oxLDL/β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物刺激A7r5,收集总RNA和蛋白质,利用实时定量PCR、western blot及免疫荧光染色等方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、巨噬细胞表面标志CD68、半乳糖凝集素3(galectin-3,LGALS3)、B类清道夫受体3(CD36)和ATP结合盒转运体(ATP-binding cassette transporter)A1/G1(ABCA1/ABCG1)的表达情况;用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或c-Jun氨基末端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinases 1/2,JNK 1/2)阻断剂SP600125(90 nmol/L)预处理的方式,观察TLR4及下游信号分子在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5表型转化和脂质转运分子表达变化的作用。结果 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物明显上调细胞CD68和LGALS3水平,降低α-SMA表达,而TAK-242能够反转该现象;oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物能够促进细胞表达CD36,同时抑制ABCA1/ABCG1表达,TAK-242和SP600125能够逆转该过程。结论 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物促进A7r5细胞向"巨噬样"细胞发生表型转变,调节脂质转运相关分子的表达,增强脂质向细胞内转运的能力;TLR4和JNK1/2与该过程密切相关。

降钙素基因相关肽抑制动脉损伤后NF-κB表达及其对新生内膜增殖的作用

目的通过降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)处理血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和颈动脉损伤大鼠模型,探讨NF-κB在CGRP调节VSMCs表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖中的作用。方法建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组(n=24),通过HE染色观察新生内膜形成情况,并Western blot检测两组动物损伤动脉中NF-κB p65蛋白表达情况。以组织块贴壁培养法获得VSMCs,并分为对照组、IL-1β组(给予IL-1β处理)、CGRP组(给予IL-1β+CGRP处理)和CGRP8-37组(在IL-1β+CGRP基础上,加CGRP8-37)(n=24),Western blot法检测细胞内NF-κB p65蛋白和细胞表型标志蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖能力。结果①对照组大鼠的颈动脉损伤后7 d时新生内膜明显增加,至28 d时基本稳定,而CGRP组7 d和28 d时新生内膜面积较对照组同时间点显著降低[7d:(2.09±0.26)vs(3.76±0.33);14 d:(3.52±0.41)vs(6.38±0.61),P<0.05];且与对照组比较,CGRP组1周时NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而28 d时两组NF-κB p65表达水平无差异(P>0.05)。②在体外培养VSMCs中,IL-1β处理显著激活细胞NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),伴随着VSMCs收缩表现标志蛋白SMα-actin表达减少和OPN表达增加(P<0.05);同时再给予CGRP处理后,则显著减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且使VSMCs合成表现标志蛋白OPN表达减少。RT-PCR分析获得相一致的结果。同时,CGRP显著抑制IL-1β引起的VSMCs增殖。③CGRP受体阻断剂CGRP8-37可以阻断CGRP减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达作用,并抑制CGRP对VSMC表达蛋白调节作用。结论 CGRP与受体结合后抑制NF-κB激活,促进VSMCs分化标志基因表达,从而抑制细胞增殖,降低动脉损伤后新生内膜增殖,这对于防治动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄可能具有重要应用价值。

细胞因子与肝纤维化

细胞因子在肝纤维化的过程中起了重要的作用,且主要表现在肝星形细胞的活化、表型改变等方面,笔者对部分细胞因子的作用进行了分析,以供同道参考。

绿茶多酚对晚期氧化蛋白产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和表型改变是动脉粥样硬化的主要病理基础.研究表明,晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)参与了糖尿病及动脉粥样硬化等疾病的发生发展过程.本研究观察了绿茶多酚对AOPP诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.

表观遗传、环境与疾病

1999年，Wolffe和Matzke首次提出了当前广为认可的表观遗传定义，它包含三个要点：DNA序列不变，表型改变，这种改变是可遗传的。经典遗传学信息提供了各种蛋白（包括表观遗传学修饰蛋白在内）、RNA的结构信息，而表观遗传学信息则提供何时、何处合成何种蛋白及RNA的指令，从而严密地控制着蛋白及RNA的功能。表观遗传学赋予生物灵活而又强大的适应环境的能力，与人体的发育和疾病密不可分。

神经生长因子在急性心肌梗死后左室重构中的可能作用

左室重构是指急性心肌梗死（AMI）后左心室发生结构与功能的改变，并且心肌细胞发生肥大及表型改变［1］。包括早期的梗死区伸展和晚期的整体心室扩张，这些是导致心脏衰竭的重要因素。

缬沙坦对5/6肾切除大鼠肾小球硬化的作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对5/6肾切除肾衰竭大鼠肾保护作用的分子机制。方法:采用5/ 6肾切除大鼠模型,设立假手术组、对照组、缬沙坦组检测各组术后5周24h尿蛋白,血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)。光镜观察肾组织病理变化.免疫组化检测肾小球内ED1阳性巨噬细胞浸润,平滑肌肌动蛋白-α(SMA-α)的表达。结果:(1)对照组较假手术组24h尿蛋白,血清BUN、SCr明显增高(P<0.001),肾小球内ED1阳性细胞浸润及SMA-α的表达明显增强(P<0.001)。缬沙坦组较对照组各指标均显著下降(P<0.01)。结论:缬沙坦能够延缓5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭进展,其机制主要与抑制肾小球内巨噬细胞浸润及抑制肾小球固有细胞表型改变有关。

缺氧引起肺血管重构的细胞及分子机制

慢性缺氧改变肺动脉的结构和肺血管各种细胞（从肺门至肺泡壁最外周的血管）的生化和功能表型改变。改变的程度和改变谱取决于种系、性别和缺氧的不同阶段。此外，不同部位的缺氧改变不同，较大血管的重构过程与较小的血管重构不同。细胞及分子机制因肺血管纵轴不同部位的血管成分和局部环境因子而不同。各种血管细胞类型（内皮、外膜成纤维细胞）均在不同部位、