转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究

目的本研究探讨转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。方法原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20 ng·m L-1TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12 h、24 h、48 h、72 h,Real-time PCR检测α-SMA mRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。

β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞E-钙黏素和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

背景:有研究表明,人晶状体上皮细胞的间质转分化是后发性白内障的主要病理改变,转化生长因子β2可以诱导间质转分化的发生。目的:体外培养人晶状体上皮细胞,观察转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞转分化相关蛋白E-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法:利用组织块法体外培养人晶状体上皮细胞并传代,选择传5代的细胞进行实验,采用100ng/L转化生长因子β2诱导48h,反转录-聚合酶链反应方法检测E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的表达,应用蛋白质印迹法Westernblot检测其蛋白表达。结果与结论:转化生长因子β2处理人晶状体上皮细胞48h后,细胞E-钙黏蛋白表达明显减弱,α-平滑肌肌动蛋白的表达明显增强。提示转化生长因子β2可以成功诱导晶状体上皮细胞间质转分化,转化生长因子β2处理的晶状体上皮细胞可以作为间质转分化的细胞模型。

延肾口服液对肾间质纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨延肾口服液对肾间质纤维化（RIF）大鼠的影响及可能的作用机制。方法将75只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组和模型组，采用单侧输尿管梗阻（UUO）复制RIF模型，成模大鼠再随机分为模型组、贝那普利组及延肾口服液高、低剂量组，每组15只。术前1d治疗组开始灌胃贝那普利3．5ml／d及延肾口服液2．8ml／d、1．4ml／d；假手术组、模型组给予等量生理盐水。术后8周留取血、尿标本，行血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）及尿肌酐（ucr）、尿尿素氮（UUN）和24h尿蛋白定量测定；处死大鼠取。肾组织，苏木素-伊红（HE）染色观察各组RIF程度；用免疫组化二步法和半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定转化生长因子-β（TGF—β）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白和mRNA表达。结果①光镜下观察，模型组肾管上皮细胞呈现不同程度的萎缩、变性及坏死，小管周围肾间质间隙增宽；贝那普利组和延肾口服液高、低剂量组部分肾小管轻度扩张，病变程度轻于模型组。②与假手术组比较，模型组UUN、UCr、BUN及TGF-β、α-SMA的蛋白和mRNA表达均明显升高（均P〈0．01）；与模型组比较，贝那普利组及延肾口服液高、低剂量组TGF-β、α—SMA蛋白和mRNA[吸光度（A）值]表达均显著减少，以延肾口服液高剂量组减少更显著（TGF-β蛋白：0．72±0．24比1．78±0．33，α-SMA蛋白：0．87±0．55比1．59±0．44；TGF—BmRNA：1．68±0．53比3．14±0．44，α-SMAmRNA：1．66±0．14比3．41±0．10，均P〈O．01）；贝那普利组和延肾口服液高、低剂量组UUN（mmol／L）、UCr（p．mol／L）、BUN（mmol／L）均明显降低（P〈0．05或P〈O．01），以延肾口服液高剂量组降低更显著（UUN：0．56±0．19比1．34±0．22，UCr：2788．00±178．98比3652．75±188．26，BUN：7．25±0．47比16．30±0．47，均P〈0．01），延肾口服液高剂量组与贝那普利组相比差异无统计学意义（均P〉0．05），SCr及24h尿蛋白定量在各组间比较差异均无统计学意义（均P〉O．05）。结论延肾口服液延缓UUO模型大鼠RIF的作用与其抑制TGF-β和α—SMA表达有关，其疗效与贝那普利组相似，并表现出明显的量效关系。

系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型的关系

目的 :探讨增殖性肾小球肾炎大鼠动物模型中系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达与细胞表型的关系。方法 :应用单克隆抗体 1- 2 2 - 3(Mo Ab1- 2 2 - 3)及 Habu蛇毒素分别诱导大鼠增殖性肾小球肾炎动物模型。用免疫组化技术并结合计算机图像分析 ,检测两个不同诱因引起模型的各个阶段的系膜细胞内α-平滑肌肌动蛋白 ,SMemb的表达程度 ,系膜细胞增殖和细胞外基质 (ECM)分泌的情况。结果 :在 Mo Ab1- 2 2 - 3模型 ,随着系膜细胞增殖程度的加重 ,ECM积聚增多 ,α- SMA的表达程度也增加 ,三者平行变化并具有高度相关性 ,而 Habu模型则系膜细胞增殖和 ECM增加的同时 α- SMA,SMemb表达不增加。结论 :α- SMA不是系膜细胞被激活并处于增殖

扁蒴藤素对肺纤维化模型小鼠肺组织形态及转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的观察扁蒴藤素对肺纤维化模型小鼠肺组织形态及转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其作用机制。方法采用气管内注射博来霉素溶液制备小鼠肺纤维化模型。将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、扁蒴藤素组及吡非尼酮组,每组8只。正常组和模型组给予等量生理盐水腹腔注射,扁蒴藤素组给予1 mg/kg扁蒴藤素溶液腹腔注射,吡非尼酮组给予50 mg/kg吡非尼酮溶液腹腔注射。给药体积10 mL/kg,每日1次,连续28 d。取肺组织行HE及Masson染色,评估小鼠肺组织病理学变化及胶原沉积;免疫组化和Western bot检测小鼠肺组织TGF-β1及α-SMA蛋白的表达。结果HE及Masson染色显示,扁蒴藤素组小鼠肺泡炎及肺纤维化评分低于模型组(P<0.05,P<0.01);免疫组化及Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠TGF-β1及α-SMA蛋白表达明显升高;与模型组比较,扁蒴藤素组和吡非尼酮组小鼠肺组织TGF-β1及α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论扁蒴藤素可改善模型小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1及α-SMA蛋白表达有关。

系膜细胞缺氧损伤后抗增殖蛋白、转化生长因子-β_1、α-平滑肌肌动蛋白表达变化

目的观察系膜细胞(MCs)缺氧损伤后抗增殖蛋白(PHB)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。方法将体外培养的大鼠MCs随机分为模型组和正常组。正常组在常规条件下培养,不做任何处理;模型组置于缺氧小室中(充缺氧气体950 m L/L N2和50 m L/L CO2)密封48 h建立MCs缺氧损伤模型。RT-PCR法检测两组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA,Western blotting法检测PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)蛋白。结果模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA相对表达量分别为0.56±0.04、0.51±0.06、1.45±0.11、7.39±1.72,正常组分别为1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白相对表达量分别为0.47±0.04、0.25±0.02、1.12±0.06、1.35±0.12、0.89±0.07,正常组分别为0.91±0.04、0.56±0.07、0.75±0.05、0.79±0.09、0.52±0.03,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.924、-0.871、-0.840,P均<0.05),PHB2蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.928、-0.901、-0.821,P均<0.05)。结论系膜细胞缺氧损伤后PHB表达降低,TGF-β_1、α-SMA表达升高,PHB1表达与TGF-β_1、α-SMA表达均呈负相关。

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21%O2浓度)、低氧组(1%O2浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1)0.4μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P<0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P<0.01),与PGE1作用相当(P﹥0.05)。结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化。红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当。

α-平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )对瘢痕成纤维细胞中 α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达的诱导作用。方法 以 5例增生性瘢痕为实验组 ,3例正常瘢痕为对照组 ,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及 L SAB免疫组织化学染色技术 ,观察在不同 TGF- β1 浓度作用下 ,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α- SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞 ,三维培养体系中 α- SMA含量明显低于二维培养体系。不同浓度 TGF-β1 诱导瘢痕成纤维细胞表达 α- SMA的作用不同 ,以 5 ng/m l的 TGF- β1 作用最有效 ;与对照组的成纤维细胞相比 ,实验组的成纤维细胞在表达 α- SMA方面 ,对 TGF- β1 的反应更为敏感。结论 在体外 ,TGF- β1 诱导 α- SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异 ;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异 ,对 TGF- β1敏感性不同 ;细胞外基质成分可能会降低 TGF- β1 的诱导作用 ,使 α- SMA的表达减少。

小鼠压力过负荷心衰心肌组织中转化生子因子-β1、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达

目的同步检测转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白在正常和心衰小鼠心肌中的表达,观察上述因子是否参与小鼠心衰的形成。方法选用昆明系雄性小鼠,制备压力过负荷心衰模型,分为正常对照组、假手术组及过负荷心衰组,利用蛋白印迹法检测三组心肌中的转化生子因子-β1、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达。结果与正常对照及假手术组比较,压力过负荷心衰组心肌组织中转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道蛋白表达均明显增强(均P<0.05)。结论转化生子因子-β1、I型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白及瞬时受体电位香草酸亚型4通道参与小鼠压力过负荷心衰的形成过程。

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响

目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10%应变,频率分别为0.5 Hz1、Hz和2 Hz,加载时间12 h和24 h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的αlpha-肌动蛋白(-αactin)的表达变化。以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组。结果血管平滑肌细胞的-αactin的蛋白和RNA表达量在1 Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高。结论不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞-αactin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节。

超声引导下经皮肾穿刺造瘘对梗阻性肾积水患者预后及对α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β1的影响

目的分析超声引导下经皮肾穿刺造瘘对梗阻性肾积水患者预后及对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法选择43例梗阻性肾积水患者作为试验组,同期体检的正常人50例作为对照组。试验组给予超声引导下经皮肾穿刺造瘘术,观察对梗阻性肾积水患者预后及TGF-β1、α-SMA的影响。结果试验组43例梗阻性肾积水患者均一次穿刺成功,无并发肾周围脏器损伤或肾脏大出血病例。试验组术前TGF-β1、α-SMA与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);试验组术后TGF-β1、α-SMA与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。试验组术前的血肌酐、尿素氮明显高于对照组水平,分肾肾小球滤过率低于对照组水平,差异有显著性(P<0. 05);术后试验组的肌酐仍高于对照组水平,但明显低于术前肌酐水平,而尿素氮及分肾肾小球滤过率与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论对梗阻性肾积水患者行超声引导下经皮肾穿刺造瘘,可以显著降低血TGF-β1、α-SMA水平,有利于肾功能恢复。

全反式维甲酸对HFL-Ⅰ细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、热休克蛋白47表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ),热休克蛋白47(HSP47)mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HFL-Ⅰ细胞,MTT法检测不同浓度TGF-β1和ATRA分别作用3 d对HFL-Ⅰ细胞增殖能力的影响。随后分为6组:对照组、5μg·L-1 TGF-β1组、10μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1TGF-β1+0.1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+1μmol·L-1 ATRA组、5μg·L-1 TGF-β1+10μmol·L-1 AT-RA组,RT-PCR和Western blot方法分别检测各实验组细胞中α-SMA,Collagen-Ⅰ,HSP47 mRNA和蛋白的表达。结果①MTT法检测结果显示不同浓度的TGF-β1可刺激HFL-Ⅰ细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.05);不同浓度的ATRA对HFL-Ⅰ细胞增殖能力均有明显抑制作用,并随药物浓度的增加而增强(P<0.05)。②5μg.L-1 TGF-β1诱导后,HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。③ATRA以浓度依赖性方式下调经TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞中α-SMA,Collagen-I,HSP47 mR-NA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 ATRA能够抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ细胞的分化,其作用机制可能与降低Col-lagen-I、HSP47表达有关。

α-平滑肌肌动蛋白在大鼠肾小管间质纤维化中的表达及意义

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在大鼠肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积20g/L淀粉溶液灌胃,分别于实验第7、12、17周时随机处死10只大鼠,进行血Cr、BUN、24h尿蛋白定量和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)检测,光镜下观察肾组织病理变化及免疫组织化学法检测肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-SMA表达情况。结果与对照组比较,模型组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG、血Cr、BUN均升高(Pa<0.01);7周时模型组即有肾小管间质损害,随病程进展,肾小管间质损害逐渐加重;肾脏α-SMA表达明显增多。结论α-SMA表达增多促进肾小管间质纤维化发生。

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白表达的影响及意义

目的观察百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)表达的影响,探讨百令胶囊肾脏保护作用的可能机制。方法雄性3个月龄SD大鼠90只,随机分为:对照组(30只),模型组(30只),预防组(30只),以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,预防组加以1.5 g/(kg.d)百令胶囊溶于生理盐水灌胃以预防肾小管间质纤维化;对照组以等体积的2%淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第7、12、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen BUN),24 h尿蛋白定量和尿N乙-酰-β-D氨-基葡萄糖苷(N-a-cetylβ--D-glucosam inidase,NAG)酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏转化生长因子-β1(transform ing growth factor-beta1,TGFβ-1)、α-SMA的表达情况。结果①功能学变化:与对照组比较,各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P<0.01),但预防组低于模型组(P<0.01);模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高(P<0.01)。②病理学变化:7周时模型组、预防组即有肾小管间质损害;模型组、预防组自身对照肾小管间质损害均较前一时相点加重(P<0.01),但7、12周时预防组肾小管间质损害均较模型组为轻(P<0.01),17周时两组间差异无统计学意义(P=0.670)。③免疫组化:各时相点模型组、预防组大鼠肾脏TGFβ-1、α-SMA的表达均高于对照组(P<0.01),但预防组均低于模型组(P<0.01),模型组、预防组自身对照均较前一时相点升高(P<0.01),17周时表达量最高。结论百令胶囊可能通过抑制α-SMA,在肾小管间质纤维化早期应用时起到保护作用。

PCI-neo-肝细胞生长因子对脂多糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨PCI-neo-肝细胞生长因子(PCI-neo-HGF)对脂多糖(LPS)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达是否有抑制作用,以及这种抑制作用是否与对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的抑制有关。方法体外培养GMCs并分为5组,(1)Ctrl:对照;(2)C+L:GMCs+LPS(10μg/ml);(3)C+L+P-n:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo(2μg);(4)C+L+P-n-H2:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo-HGF(2μg);(5)C+L+P-n-H8:GMCs+LPS(10μg/ml)+PCI-neo-HGF(8μg);用RT-PCR的方法测定α-SMA及β-actin mRNA的表达,用Western方法检测及α-SMA,TGF-β1及β-actin的蛋白表达。结果与Ctrl组相比,C+L及C+L+P-n组α-SMA mRNA及蛋白表达增多(P<0.05),TGF-β1蛋白表达增多(P<0.05);与C+L相比,C+L+P-n-H2及C+L+P-n-H8组α-SMA mRNA及蛋白的表达均减少(P<0.05),TGF-β1蛋白的表达减少(P<0.05)。与C+L组比较,加入TGF-β1抑制剂组α-SMA蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论PCI-neo-HGF可抑制LPS刺激的GMCs的α-SMA的mRNA及蛋白表达,且这种抑制作用可能与其对TGF-β1表达的抑制有关。

染料木素对尿毒症大鼠残余肾组织α-平滑肌肌动蛋白沉积的影响

目的观察染料木素对尿毒症大鼠残余肾组织α-平滑肌肌动蛋白沉积的影响并探讨其机制。方法 5/6肾切除术建立尿毒症大鼠模型,将模型鼠分为染料木素组(G)和对照组(C),假手术组(S)作为正常对照。术后各组正常饮食,G组同时给予染料木素15 mg/(kg·d)灌胃,C组予等量生理盐水灌胃。检测实验各组术前和术后第4、8周尿蛋白、生化等指标。第8周观察肾组织病理变化情况。免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白沉积情况。应用RT-PCR法、Western Blot法分别检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA转录、蛋白质表达情况。结果染料木素组与对照组相比,尿蛋白排泄量减少,血清尿素氮、肌酐水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。肾小球内α-平滑肌肌动蛋白沉积明显减少,肾小球硬化明显减轻。TGF-β1 mRNA、蛋白质表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论染料木素可以降低尿毒症大鼠残肾组织α-平滑肌肌动蛋白的沉积,对肾脏有保护作用,机制可能与抑制TGF-β1的表达有关。

针刺对哮喘模型大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白及纤维连接蛋白表达水平的影响

目的观察针刺对哮喘模型大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)表达水平的影响.方法选择雄性SPF级SD大鼠40只,按随机掷骰子法将大鼠分为正常对照组、模型组、药物组、针刺组,每组10只.于实验1d、8d,正常对照组腹腔注射1 mL 0.9%氯化钠溶液,模型组腹腔注射1 mL 10%复合卵蛋白溶液致敏.实验15 d,正常对照组雾化喷入0.9%氯化钠溶液20 min,模型组雾化喷入1%卵蛋白溶液20 min激发哮喘,制模成功后正常对照组与模型组不进行处理,药物组腹腔注射0.05%地塞米松磷酸钠溶液,每日1次,持续10d;针刺组针刺肺俞、大椎、风门穴,每2d施针1次,共7次.比较4组大鼠肺组织中信号转导和转录激活因子6(STAT6)mRNA表达、转化生长因子-β1(TGF-β1)的阳性表达和蛋白表达及α-SMA、FN、外周血T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))水平的差异.结果与正常对照组比较,模型组STAT6 mRNA表达、TGF-β1蛋白表达和TGF-β1、α-SMA、FN阳性表达及外周血中T淋巴细胞群(CD3^(+)、CD8^(+))均明显升高[STAT6 mRNA表达(2^(-ΔΔCt)):13.12±2.20比1.02±0.20,TGF-β1蛋白表达(A值):0.10±0.01比0.06±0.01,TGF-β1阳性表达(A值):0.11±0.01比0.08±0.01,α-SMA阳性表达(A值):19.65±1.37比7.74±0.81,FN阳性表达(A值):18.40±0.79比6.50±0.60,CD3^(+):0.70±0.03比0.59±0.02,CD8^(+):0.39±0.02比0.20±0.02,均P<0.05],CD4^(+)明显降低(0.32±0.02比0.39±0.03,P<0.05);药物组和针刺组STAT6 mRNA表达、TGF-β1蛋白表达和TGF-β1、α-SMA、FN阳性表达及外周血中T淋巴细胞群(CD3^(+)、CD8^(+))水平均较模型组明显降低,CD4^(+)较模型组明显升高,且以针刺组的变化较药物组更显著[STAT6 mRNA表达(2-ΔΔCt):3.01±0.55比5.64±0.65,TGF-β1蛋白表达(A值):0.06±0.01比0.09±0.01,TGF-β1阳性表达(A值):0.08±0.01比0.09±0.01,α-SMA阳性表达(A值):12.33±0.50比14.99±0.53,FN阳性表达(A值):9.91±0.61比13.19±0.66,CD3^(+):0.60±0.03比0.65±0.04,CD4^(+):0.39±0.02比0.35±0.02,CD8^(+):0.21±0.04比0.28±0.03,均P<0.05].结论对于哮喘模型大鼠,针刺其肺俞、大椎、风门穴可以刺激肺组织的神经和肌肉,促进肺部血液循环,增强肺功能,改善肺组织的健康状况,降低肺组织中α-SMA、FN的阳性表达,改善气道重塑,效果显著.

异甘草酸镁对肝组织中波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究异甘草酸镁抑制肝纤维化进程中肝细胞上皮间质转化作用的机制。方法将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组,模型组,异甘草酸镁低剂量组(4 mg/kg)、中剂量组(16 mg/kg)和高剂量组(32mg/kg),水飞蓟宾组(16mg/kg),其中模型组为运用CCl4。HE染色观察各组肝组织的病理学改变,免疫组化法检测肝组织中波形蛋白(Vimentin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,Western Blot检测肝组织中Vimentin、CollagenⅠ和α-SMA的蛋白表达情况。结果病理学结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠肝组织的纤维化程度明显加重,肝脏炎症坏死区及纤维间隔明显增多;异甘草酸镁各剂量组小鼠肝组织纤维化水平均明显低于模型组。免疫组化检测和Western Blot结果均显示,模型组肝细胞Vimentin、CollagenⅠ和α-SMA的表达量明显增强;异甘草酸镁能抑制小鼠肝组织中Vimentin、CollagenⅠ和α-SMA的蛋白表达,且具有一定剂量依赖关系。结论异甘草酸镁对CCl4所致小鼠肝纤维化形成有明显的抑制作用。