11,12-表氧化二十碳三烯酸对COPD大鼠气道平滑肌细胞钙激活性钾通道的作用

目的观察COPD大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的钙激活性钾通道(KCa)的活性变化,以及11,12表-氧化二十碳三烯酸(11,12-EETs)对气道平滑肌细胞KCa的作用。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和COPD组,每组20只。在相对密闭舱内吸入纸烟建立COPD动物模型,采用急性酶分离法分离大鼠ASMCs,应用膜片钳技术,分离出KCa电流,测定KCa开放概率(Po)、平均开放时间(To)和平均关闭时间(Tc)。比较COPD组和正常对照组KCa上述活性指标的变化,以及应用3μmol/L的11,12-EETs对COPD组ASMCs细胞进行灌流后KCa活性的变化。结果与正常对照组比较,COPD组ASMCs的KCa通道Po明显降低(0.084±0.028比0.198±0.029,P<0.01),To显著缩短[(0.732±0.058)m s比(1.648±0.152)m s,P<0.01],Tc显著延长[(12.259±2.612)m s比(6.753±1.237)m s,P<0.01]。而用11,12-EETs灌流ASMCs细胞后可明显激活KCa活性,Po增加(0.227±0.059比0.084±0.028,P<0.01),To延长[(2.068±0.064)m s比(0.732±0.058)m s,P<0.01],Tc缩短[(4.273±0.978)m s比(12.259±2.612)m s,P<0.01]。结论COPD大鼠ASMCs细胞KCa通道活性降低可能在COPD发病机制中起着一定作用,11,12-EETs可以直接激活COPD大鼠ASMCs细胞KCa活性,提高膜电位稳定性,从而松弛COPD大鼠气道平滑肌。

表氧化二十碳三烯酸对游离脂肪酸诱导胰岛β细胞凋亡的抑制作用

目的:研究11,12-表氧化二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acids,11,12-EETs)抑制游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对原代小鼠胰岛β细胞凋亡的影响,探讨11,12-EETs保护胰岛β细胞是否通过抑制内质网应激相关转录因子ATF4与ATF6核转位来实现.方法:棕榈酸(palmitic acids,PA)诱导原代小鼠胰岛β细胞凋亡,与11,12-EETs共同孵育24h后,采用流式细胞术检测该细胞的线粒体膜电位的变化与细胞凋亡水平的改变,以观察11,12-EETs对原代小鼠胰岛β细胞的保护作用;用免疫印迹法检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关转录因子ATF4与ATF6在胞浆与胞核中的蛋白表达,以此观察二者的核转位改变.结果:100nmol/L11,12-EETs与400μmol/LPA共同孵育胰岛β细胞24h后,与FFAs对照组相比,FFAs+EET组可显著提升胰岛β细胞的存活率(62.1%±7.3%vs53.0%±6.1%),并明显降低胰岛β细胞线粒体的去极化水平(23.6%±3.4%vs35.2%±4.7%);11,12-EETs可有效抑制PA诱导的细胞凋亡(24.5%±4.2%vs40.1%±5.6%);同时,PA刺激的ATF4与ATF6的核转位受到11,12-EETs的影响,胞核ATF4与ATF6蛋白水平显著性降低,胞浆ATF4与ATF6蛋白水平明显上调.结论:11,12-EETs可以抑制FFAs诱导的凋亡,其分子机制可能是通过抑制FFAs引发的ATF4与ATF6转位导致内质网应激相关基因表达.

表氧化二十碳三烯酸对小鼠肾缺血再灌注损伤NLRP3炎症小体表达及细胞焦亡的影响

目的探讨表氧化二十碳三烯酸(EET)对肾缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及其机制。方法30只10周龄无特定病原体(SPF)级的雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、I/R组、I/R+EET干预组(I/R+EET组)、I/R+Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK242干预组(I/R+TAK242组)及I/R+EET+TAK242干预组,每组6只。于再灌注24 h时观察各组肾脏病理改变,检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。Western印迹分别检测小鼠肾脏NLRP3炎症小体、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、TLR4和髓样分化因子(MyD88)蛋白表达水平。结果HE染色显示,I/R组可见肾小管上皮细胞损伤,肾功能下降[BUN:(10.37±0.53)比(6.70±0.82)mmol/L,t=9.17,P<0.001;Scr:(83.67±3.88)比(32.50±3.51)μmol/L,t=23.96,P<0.001],NLRP3(1.54±0.10比0.71±0.05,t=13.14,P<0.001)、caspase-1(2.35±0.05比0.62±0.02,t=73.77,P<0.001)、IL-1β(3.11±0.11比1.26±0.05,t=35.97,P<0.001)、TLR4(1.58±0.03比0.39±0.01,t=86.00,P<0.001)和MyD88(0.94±0.02比0.26±0.01,t=72.61,P<0.001)表达水平均明显高于正常对照组。I/R+EET组肾功能损害及上述蛋白的表达水平均低于I/R组(均P<0.001),TAK242联合抑制后,各蛋白的表达水平较I/R及I/R+EET组均降低(均P<0.001)。结论EET能够减轻小鼠肾I/R损伤,其机制可能是通过抑制TLR4通路调节NLRP3活化介导的细胞焦亡而产生一定的保护作用。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET抑制脂多糖诱导的内皮细胞凋亡

目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物一表氧化二十碳三烯酸 (epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响。方法原代分离培养BAECs。分别在细胞培养基中加入 8,9-,11,12-,和14,15-EET1 h后,用LPS(100 ng／ml)诱导内皮细胞凋亡。用MTT法检测LPS对 BAECs的毒性作用,再通过细胞形态学(吖啶橙／溴化乙锭染色)和流式细胞仪计数检测其凋亡变化。结果LPS对BAECs的毒性作用呈剂量依赖性和时间依赖性。LPS可明显诱导BAECs凋亡,但8, 9-,11,12-,和14,15-EET干预的BAECs凋亡细胞数分别为(37．03±3．014)％、(33．45±7．918)％和 (35．75±7．858)％明显少于溶媒对照组(47．33±3．154)％。结论这些结果证明了花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs能明显的抑制LPS诱导的BAECs凋亡。这表明细胞色素P450 表氧化酶可能有保护心血管系统,防止其受到炎症损伤和粥样硬化的作用。

细胞色素P450 2J亚家族研究进展

细胞色素P450(CYP450)2J亚家族简称CYP2J,与其他CYP450亚家族成员不同,主要在肝外系统表达,并参与内源性物质的代谢,特别是花生四烯酸的代谢,通过其代谢产物表氧化二十碳三烯酸在心血管系统和肾脏发挥重要的生理作用。而在外源性物质的代谢中,CYP2J仅在某些抗组胺药的代谢中表现出较高活性。论文根据CYP2J亚家族近年来的研究成果,对其酶特性、代谢活性、基因结构特征和生理作用等方面的共性进行概括,并对其各成员的表达和代谢特征进行综述。