金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的原核表达

目的:通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A(recombine exfoliative toxin A,r ETA),为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料。方法:根据Gen Bank公布的ETA基因序列设计引物,从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)基因组中扩增ETA基因,插入原核表达载体p QE30,构建重组质粒p QE30-ETA。将p QE30-ETA转化表达菌E.coli M15,优化诱导表达条件,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot鉴定。重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下,观察皮肤病理改变,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果:重组质粒p QE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927 bp,与基因文库中的ETA序列完全吻合。SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27 k D,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间4 h,可得到最大表达量的可溶性蛋白,约为20%。Western blot显示与S.aureus产生的ETA蛋白在同一位置,重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90%以上,注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙。结论:成功构建了重组质粒p QE30-ETA,表达了具有生物学活性的重组S.aureus表皮剥脱毒素A。

60株金黄色葡萄球菌分泌表皮剥脱毒素A、B情况及与疾病的相关性研究

目的探讨脓疱疮和金葡菌烫伤样皮肤综合征(SSSS)两者病原菌分泌表皮剥脱毒素(ET)的情况及与疾病的相关性。方法分离脓疱疮和SSSS患者的病原菌并保存,应用反向乳胶凝集法测定金黄色葡萄球菌(SA)产生ET的型别。结果60株SA中,51株(85%)检测到有ET产生,其中表皮剥脱毒素A(ETA)阳性3株(5%),表皮剥脱毒素B(ETB)阳性8株(13%),ETA和ETB均阳性40株(67%)。30株来源于SSSS的SA,29株(97%)有ET产生;单纯ETB阳性者8株(27%);ETA和ETB均阳性21株(70%)。来源于脓疱疮的30株SA中,22株(73%)有ET产生;单纯ETA阳性3株(10%);ETA和ETB均阳性19株(63%)。其中来源于非大疱型脓疱疮的SA共15株,10株(67%)有ET产生。单纯ETA 1株(7%);ETA和ETB均阳性9株(60%)。来源于大疱型脓疱疮的SA共15株,12株(80%)有ET产生;单纯ETA 2株(13%);ETA和ETB均阳性10株(67%)。结论北京及其周边地区来自儿童脓疱疮和SSSS的SA以产ET菌为主,其中大部分可同时产生ETA和ETB。

表皮剥脱毒素A对天疱疮抗原的影响

目的探讨表皮剥脱毒素A(ETA)对体外培养正常人角质形成细胞表面天疱疮抗原的影响及其作用机制。方法人角质形成细胞复层化表达落叶型天疱疮抗原后与ETA作用,分别用寻常型或落叶型天疱疮抗体进行免疫荧光染色,提取培养细胞总蛋白做免疫印迹;测定ETA作用后细胞上清液中IL-1α,IL-6的浓度及其分解酪蛋白的活性。结果ETA作用前后细胞间落叶型天疱疮抗体着色由强的连续发光转变为弱的断续发光,24h后恢复,寻常型天疱疮抗体着色无明显变化;免疫印迹检测显示ETA作用后落叶型天疱疮抗原被降解,寻常型天疱疮抗原未受影响。人角质形成细胞与ETA作用后IL-1α分泌受抑制,IL-6的分泌量低于检测水平;ETA作用后细胞上清液分解酪蛋白的活性24h内逐渐增加,36h后活性下降。结论ETA的作用位点在落叶型天疱疮抗原,对寻常型天疱疮抗原无影响;ETA的这种作用具有可逆性,可能通过蛋白酶解作用降解落叶型天疱疮抗原。

金黄色葡萄球菌表皮剥脱毒素致病作用与机体防御机制研究进展

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征是由金黄色葡萄球菌产生的表皮剥脱毒素引起的以皮肤浅表水疱形成为特征的皮肤病。目前认为表皮剥脱毒素是一种独特的丝氨酸蛋白酶,能高效、特异地辨认和水解上皮细胞间的黏附分子-桥粒芯糖蛋白1,导致表皮剥脱。该病常发生在婴幼儿,在健康成人中发病极为罕见,但健康人对表皮剥脱毒素作用的保护机制现在仍不完全清楚,可能与免疫保护和肾脏对表皮剥脱毒素的快速清除有关。

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征表皮剥脱毒素分型及耐药分析

目的探讨引起本地区46例葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征(staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS)患者的金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)所分泌的表皮剥脱毒素(exfoliative toxin,ET)血清型及SA的耐药情况,并与寻常型脓疱疮及皮肤疖肿组进行对比。方法 138株SA分离自SSSS(46株),寻常型脓疱疮(49株),皮肤疖肿组(43株)。应用多重PCR方法检测SA产生的ET类型,应用Kirby-Bauer纸片法检测SA对15种抗生素的耐药情况。结果 SSSS组SA共46株(100.00%)均产生ET,均是以单产ETB为主;寻常型脓疱疮组产生ETB的有30株(61.22%);皮肤疖肿组无一株产生ETB。138株SA均未检测到ETA或ETD的表达。三组SA分泌ET的比例差异存在统计学意义(P<0.05)。SSSS、寻常型脓疱疮及皮肤疖肿组对青霉素、红霉素、克林霉素的耐药率较高,而对一、二代头孢类抗生素较敏感。三组共发现6株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。结论内蒙古呼和浩特市地区SSSS的致病SA主要以单产ETB为主。本地区SA主要对青霉素、红霉素、克林霉素高度耐药,对一、二代头孢类抗生素较敏感。

化妆品中致病性球菌表皮剥脱性毒素的研究

为了检测化妆品中产生表皮剥脱性毒素的葡萄球菌，将护肤类化妆品中检出的革兰氏阳性球菌用普通营养 琼脂进行分纯培养，把分纯菌株制成氯化钠肉汤菌悬液，离心后取其上清液０．５ｍｌ注射至兔背部皮内，２４ｈ后观察其皮 肤反应，将引起皮肤烫伤综合征病变的菌株，再应用ＡＰＩ葡萄球菌鉴定试剂盒进行复核鉴定。结果发现除７株金黄色 葡萄球菌外，尚有松鼠、科氏、头状、溶血、腐生、解脲科氏、表皮、木糖葡萄球菌８种２３株革兰阳性球菌可引起皮 肤烫伤综合征病变。表明化妆品中除金黄色葡萄球菌可产生表皮剥脱性毒素外，其它少数凝固酶阴性葡萄球菌（ＣＮＳ）① 也可产生上述毒素。

表皮剥脱毒素与桥粒芯糖蛋白在葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征中的作用

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征由金黄色葡萄球菌凝固酶阳性噬菌体Ⅱ组71型产生的表皮剥脱毒素作用于桥粒引起角质细胞间桥连接受损所致。本文就葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征中表皮剥脱毒素与桥粒芯糖蛋白之间的关系做一综述。

金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点。方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL。结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因。CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P<0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测。

皮肤软组织及创伤感染金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因检测

目的了解皮肤软组织及创伤感染的金葡菌携带的杀白细胞素(Panton—Valentine Leukocidin,PVL)基因、表皮剥脱性毒素(ETs)基因、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)的tst基因的特点。方法对连续收集的皮肤软组织感染中分离的90株金葡菌,采用多重PCR同时检测金葡菌特异性16SrRNA基因、mecA基因、PVL基因,采用PCR法检测TSST-1及EtsA、B基因。结果金葡菌mecA基因阳性47株(占金葡菌52.2%)为耐甲氧西林金葡菌(MRSA)。有1株MRSA的EtsB基因阳性,1株MRSA的TSST-1阳性,有7株金葡菌携带PVL基因,其中3株为mecA基因阳性株(MRSA)。结论金葡菌可分泌多种毒素,携带PVL毒素的金葡菌常可以引起严重的侵袭性感染,尤其对产毒的MRSA感染引起足够的重视,是防控的重点。

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征(SSSS)快速诊断ELISA方法的初步探索

目的:对葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征(SSSS)快速诊断试剂盒的研发进行探索。方法:采用表皮剥脱毒素A抗体(Anti-ETA)、表皮剥脱毒素A(ETA),优化反应条件后将Anti-ETA包被ELISA板,初步建立SSSS表皮剥脱毒素A的ELISA检测方法。结果:在建立的ELISA方法中,Anti-ETA的最佳包被浓度为10μg·mL-1,酶标二抗最佳工作浓度为1∶100。对7份SSSS患者血清、7份内毒素阳性患者血清及7份正常人血清进行吸光度值(OD 450 nm)的检测,结果显示SSSS患者血清组和正常人血清组的OD值无差别(P>0.05),即单纯包被Anti-ETA尚不能作为SSSS的有效检测。结论:本试验初步建立以Anti-ETA作为包被抗体检测SSSS表皮剥脱毒素A的ELISA方法,但单纯包被Anti-ETA检测灵敏度低,研制SSSS的快速诊断试剂盒需进一步结合Anti-ETB作为共同包被抗体。

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征208例临床分析

目的回顾分析208例葡萄球菌烫伤样皮肤综合征患儿的临床资料,对部分病原菌进行表皮剥脱毒素及药敏检测,了解本地区致病菌分泌表皮剥脱毒素血清型别及药敏情况。方法记录所有病例的临床资料,并对其中30株金黄色葡萄球菌(以下简称SA)应用反向乳胶凝集法检测表皮剥脱毒素,对51株SA应用琼脂稀释法进行了14种抗生素的药敏试验。结果 30株SA中,21株表皮剥脱毒素A,B均阳性,8株单纯表皮剥脱毒素B阳性。51株SA药敏青霉素耐药率为96.08%,对红霉素耐药率为82.35%。对苯唑青霉素、头孢类抗生素、莫匹罗星、万古霉素和夫西地酸均未发现耐药菌。结论引起本病的SA以表皮剥脱毒素A,B均阳性的菌株为主。青霉素和红霉素耐药率较高,不适合治疗本病。头孢菌素、万古霉素和夫西地酸可作为可选择的抗生素。

葡萄球菌皮肤烫伤样综合征的快速诊断

目的 :早期准确地诊断葡萄球菌皮肤烫伤样综合征 ( SSSS)并使其得到及时治疗。方法 :选取编码剥脱毒素的金葡菌基因 eta和 etb的特异核苷酸序列为引物 ,以 SSSS患者原发皮损的疱液或结痂经裂解处理后为模板进行 DNA扩增 ,与 ELISA检测培养分离菌株的剥脱毒素的结果对比。结果 :34例 SSSS患者 PCR阳性率 eta 61 .74%、etb 2 1 .0 %、eta和 etb 1 1 .76%;ELISA阳性率 ETA2 9.41 %、ETB1 1 .76%、ETA和 ETB2 .94%。经统计学处理差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,PCR方法较 ELISA方法敏感、准确。结论 :PCR技术对 SSSS的早期诊断。

耐药金黄色葡萄球菌致剥脱性皮炎并类白血病反应一例

患者女,79岁,主因间断腹泻1个月,咳嗽、咳痰1周,于2010年8月30日入中关村医院呼吸科。患者在1个月前'感冒'后出现腹泻,入院后给予多种抗生素治疗,腹泻好转。因出现急性左心功能衰竭、肾功能衰竭转入重症监护病房(ICU),给予气管插管机械通气及血液滤过治疗。2010年9月19日患者双前臂出现密集的紫红色斑点,直径1～2mm,

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征的研究进展

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome，SSSS）是由凝固酶阳性，嗜菌体Ⅱ组71型金黄色葡萄球菌产生的表皮剥脱毒素（exfoliative toxin，ET）所致。本病多发生于6岁以下的儿童，尤其是刚出生的婴幼儿，成人较少见，可能与成人肾脏代谢和排泄毒素能力较强有关，伴有免疫缺陷及肾衰等疾病的成人也较易发生本病[1]。SSSS按临床表现可分为局限型和泛发型。

新生儿葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征1例报告并文献复习

目的总结新生儿葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征(staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS)的临床特点及诊疗方法。方法分析1例新生儿SSSS患儿的临床资料并复习相关文献。结果患儿急性发病,全身表皮大片剥脱但黏膜不受累,诊断为SSSS。针对皮损药敏结果选用头孢类药物抗感染治疗,治疗8d患儿痊愈出院。结论 SSSS属于儿童皮肤科危重症,早期易误诊为遗传性表皮松解症和中毒性表皮坏死松解症,但SSSS具有的尼氏征阳性、表皮松驰性大疱、口周放射性皲裂和黏膜不受累等特点可与其他疾病相鉴别,完善皮损病原学检查和正确抗感染治疗是及时、正确诊断和治疗的关键。

44例葡萄球菌烫伤样皮肤综合征病例临床分析

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS）,是由于金黄色葡萄球菌分泌的表皮剥脱毒素（exfoliative toxin,ET）作为超抗原刺激T淋巴细胞的增殖,导致T淋巴细胞释放大量细胞因子作用于表皮层的桥粒芯蛋白1（desmoglein1,Dsg1）,造成角朊细胞间桥破坏,表皮连接断裂,表皮剥脱,

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征44例治疗体会

葡萄球菌烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS）,是以全身皮肤急性泛发性红斑、松弛性水疱和表皮剥脱为表现的急性皮肤病,主要发生于婴幼儿,由凝固酶阳性噬菌体Ⅱ组（尤其是71型）金黄色葡萄球菌产生的表皮剥脱毒素（ET）引起[1]。