钙离子对表皮屏障功能的调节

在正常的表皮内存在着钙离子浓度梯度,自基底细胞层到颗粒层,细胞内、外钙离子浓度由低到高;而角质层中钙离子浓度较低。这种钙离子浓度梯度对于表皮的增生、分化、细胞间连接及屏障功能起着重要的作用。细胞外低浓度钙促进角质形成细胞增生;高浓度钙促进角质形成细胞分化、细胞间黏附。完整的表皮屏障功能是保证表皮钙离子浓度梯度的前提,当屏障功能被破坏后,颗粒层细胞内、外的钙离子浓度降低有促进屏障功能恢复的作用。随着屏障功能恢复,表皮钙离子浓度梯度也恢复正常。许多与屏障功能相关的炎症性皮肤病和与表皮松解相关的皮肤病往往伴有表皮钙离子浓度梯度的异常。

刺参多功能表皮生长因子6(megf6)cDNA克隆及在肠再生过程中的表达分析

为了探究刺参Apostichopus japonicus多功能表皮生长因子6(multiple epidermal growth factor 6)的生物学信息和功能,利用RACE技术克隆了体质量为(92.0±4.0)g的成体刺参megf6基因(Aj-megf6)cDNA全长序列,并分析了该基因的信息学特征及其在肠再生过程中表达水平的变化。结果表明:刺参megf6基因的cDNA序列全长为5665 bp,共编码了1604个氨基酸,具有37个EGF样结构域;该基因编码蛋白的相对分子质量为172500,理论等电点为4.74,该蛋白具有信号肽,为分泌蛋白,属于亲水性、非跨膜蛋白,共有53个磷酸化位点,分别为23个Ser位点、12个Thr位点、18个Tyr位点;MEGF6氨基酸多序列比对发现,刺参MEGF6与其他物种的氨基酸序列一致性为38.59%~49.07%,其中与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus的一致性最高,为49.07%,其次为长棘海星Acanthaster planci(48.71%);基于MEGF6氨基酸序列的系统进化树分析显示,刺参与紫球海胆、长棘海星聚为一支,该结果符合刺参的分类和进化地位,MEGF家族成员间比对分析显示,MEGF家族成员间具有一定的分化;实时定量PCR(qPCR)结果显示,在刺参肠再生过程中megf6 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,其中再生6 d时的表达量达到峰值,为对照组的126.47倍,再生18 d时降至正常水平。研究表明,刺参megf6基因的表达与刺参肠管形态的变化趋势相一致,推断megf6可能在刺参肠再生过程中发挥重要作用。

抗氧化剂对表皮通透屏障功能的影响

表皮通透屏障功能对皮肤功能具有重要调节作用。增强表皮通透屏障功能已成为防治某些皮肤病和延缓皮肤老化的手段之一。研究显示,抗氧化剂可通过促进表皮细胞分化及其脂的合成而增强表皮透屏障功能。由此提示,抗氧化剂可用于防治某些皮肤病和延缓皮肤老化。

评估表皮通透屏障功能的方法及其应用

表皮通透屏障功能是指表皮防止物质通过表皮进出机体的功能。该功能对于表皮的增生分化、炎症的形成与发展以及抗微生物感染等方面都具有重要作用。而表皮通透屏障功能受体内外多种生物、物理因素的影响。因此,调节表皮通透屏障功能是皮肤保健和防治某些皮肤病的重要手段;评估表皮通透屏障功能是了解皮肤生物功能以及判断皮肤保健、治疗效果的方法。评估表皮通透屏障功能的方法很多。除测量透皮失水率外,超微示踪、透皮微量分析、同位素及荧光标记定位和定量等都是评估表皮通透屏障功能的有效方法。了解这些方法的特点对于选择恰当的手段和有效地评估表皮通透屏障功能具有重要的指导意义。

当归饮子对血虚风燥型皮炎-湿疹表皮通透屏障功能障碍调控机制研究

目的研究当归饮子对血虚风燥型皮炎-湿疹表皮通透屏障功能障碍的调控机制。方法将32只健康雄性豚鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、氯雷他定组和当归饮子组,每组8只。除正常组外,其余组豚鼠采用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液诱导建立血虚风燥型皮炎-湿疹样病变模型。造模结束后,当归饮子组给予当归饮子水煎液6.82 g/(kg·d)、氯雷他定组给予氯雷他定0.80 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予相应体积生理盐水灌胃,均连续灌胃14 d。观察皮损区皮肤组织形态改变,采用皮损评分评价皮损形态,检测皮肤角质层含水量、经表皮水分流失量及血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、CD4^(+)、CD8^(+)水平。结果皮肤病理显示正常组豚鼠皮肤组织结构基本正常;模型组豚鼠皮肤表皮角化过度,真皮浅层大量密集分布嗜酸性粒细胞;氯雷他定组和当归饮子组较模型组明显改善。模型组皮损评分、经表皮水分流失量及血清IgE、IL-17、CD8^(+)水平均明显高于正常组(P均<0.05),皮肤角质层含水量及血清IL-4、CD4^(+)水平均明显低于正常组(P均<0.05);氯雷他定组和当归饮子组皮损评分、经表皮水分流失量及血清IgE、IL-17、CD8^(+)水平均明显低于模型组(P均<0.05),皮肤角质层含水量及血清IL-4、CD4^(+)水平均明显高于模型组(P均<0.05)。结论当归饮子可通过改善皮肤组织形态而减少经表皮水分散失,降低血清IgE水平达到类抗过敏效果,改善CD4^(+)、CD8^(+)平衡状态及调节IL-4、IL-17细胞因子来修复表皮通透屏障,从而达到改善“皮毛微环境”状态。

消风散对湿热蕴肤型表皮通透屏障功能障碍调控机制研究

目的:通过建立"湿热蕴肤型"皮炎-湿疹表皮通透屏障功能障碍豚鼠模型,开展消风散对豚鼠模型皮肤角质层含水量(WCSC)、经表皮水分流失量(TEWL)、血清IgE、IL-4、IL-17浓度和皮肤、肠AQP3表达的影响实验,研究消风散调控"湿热蕴肤型"表皮通透屏障功能障碍的作用机制。方法:24只豚鼠随机抽取6只为空白对照组,其余采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导建立豚鼠"湿热蕴肤型"皮炎-湿疹样病变模型,随机分为模型对照组、阳性药物对照组(氯雷他定片)和消风散组开展对照实验。观察豚鼠皮损情况,皮肤角质层含水量(WCSC),经表皮水分流失量(TEWL)及血清IgE、IL-4、IL-17浓度和皮肤、肠AQP3表达情况。结果:与模型对照组比较,消风散组皮损评分显著降低(P<0.01),皮肤角质层含水量(WCSC)明显升高(P<0.01),经表皮水分流失量(TEWL)显著降低(P<0.01),血清IgE、IL-17浓度显著降低(P<0.01),IL-14浓度显著升高(P<0.01),皮肤、肠组织中AQP3的相对表达量显著升高(P<0.01)。结论:在"湿热蕴肤型"皮炎-湿疹动物实验中,消风散方证相应,通过调节表皮通透屏障功能水分和免疫功能,抑制促炎因子,提高AQP3在角质形成细胞中的表达而修复表皮屏障功能,改善皮毛微环境状态。

针灸对表皮通透屏障功能障碍“血虚风燥型”慢性湿疹样皮炎豚鼠模型调控机制的研究

目的:通过建立表皮通透屏障功能障碍模型—“血虚风燥型”慢性湿疹样病变豚鼠模型,研究针灸治疗对皮肤表皮通透屏障功能的作用机制。方法:普通级纯白色雄性豚鼠32只,随机分为空白组8只和造模组24只,采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导法造模,建立“血虚风燥”湿疹样病变豚鼠模型,随机数字表法分为模型组(8只)、对照组(8只)、针灸组(8只)。针灸组取双肺俞、双脾俞、双膈俞、双曲池、双足三里、双血海,双三阴交,针刺以平补平泻为主,留针15min,治疗疗程为两周。对照组给予氯雷他定片,每日一次,连续灌胃两周。观察豚鼠皮肤组织形态学改变情况、多功能皮肤测试仪检测皮肤角质层含水量(Water content of stratum corneum,WCSC)及经表皮水分流失量(Trans-epidermal water loss,TEWL)、酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)测定血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)浓度。结果:与模型对照组比较,针灸组皮损评分显著降低(P<0.01),皮肤角质层水分含量(WCSC)明显升高(P<0.01),经表皮水分流失量(TEWL)显著降低(P<0.01),血清IgE、IL-17浓度显著降低(P<0.01),IL-4浓度显著升高(P<0.01)。结论:在“血虚风燥型”慢性湿疹样皮炎表皮通透屏障功能障碍豚鼠模型实验中,针灸通过改善表皮水分调节,改善细胞因子表达量,发挥全身免疫作用,修复损伤的表皮通透屏障功能,进一步改善“皮毛微环境”状态。

羊栖菜中的褐藻糖胶通过影响MAPK信号通路对表皮屏障的修复治疗

目的探讨羊栖菜褐藻糖胶(Sargassum fusiforme fucoidan,SFF)对表皮屏障损伤的修复作用。评价SFF对角质形成细胞增殖、迁移和分化的影响。方法使用BrdU和CCK8试剂盒分析SFF对HaCaT细胞的增殖作用影响;划痕法测定SFF对HaCaT细胞的迁移作用;流式细胞仪、qPCR和蛋白免疫印迹检测SFF对HaCaT细胞中mRNA表达和蛋白表达的影响。构建表皮屏障受损模型,通过经皮水散失、组织学观察等实验确定SFF对受损表皮屏障的体内修复作用。结果显示SFF以剂量依赖方式显著促进HaCaT细胞的增殖及迁移。此外,SFF能上调HaCaT细胞分化标志物的基因表达,通过激活ERK和JNK通路促进表皮角质形成细胞的增殖、迁移和分化。体内研究表明,与基质组相比,SFF处理组能促进表皮通透性屏障的恢复率,显著增加水合作用。结论SFF能够影响MAPK信号通路调节紊乱的角质形成细胞功能,作为治疗表皮屏障损伤的潜在药物或功能性化妆品添加成分。

生活质量量表(FACT-EGFRI-18)在表皮生长因子受体抑制剂引起皮肤不良反应患者中的应用

目的:评价中文版癌症治疗功能评价-表皮生长因子受体抑制剂-18量表(FACT-EGFRI-18)临床应用的信度、效度和可行性。方法:采用中文版FACT-EGFRI-18,根据纳入、排除标准选择表皮生长因子受体抑制剂(EGFRIs)相关皮肤不良反应的患者,进行问卷调查,收集问卷后对量表的信度、效度和可行性进行评价。结果:对42例2017年1月~2018年5月在中日友好医院就诊的患有EGFRIs相关皮肤不良反应的患者进行了问卷调查。该量表总Cronbachα系数为0.867,各维度的Cronbachα系数为0.673~0.900。患者的皮肤不良反应严重程度分级与FACT-EGFRI-18生活质量评分正相关,差异有统计学意义。探索性因子分析共提取5个公因子,累积贡献度为73.398%。量表回收率100%,患者易接受,可行性较好。结论:中文版FACT-EGFRI-18在临床中的应用信度、效度和可行性较好,是评价有EGFRIs相关皮肤不良反应患者生活质量的可靠工具。

对称性肢端角化病患者皮肤屏障功能及其意义

目的探讨对称性肢端角化病患者皮肤屏障功能受损的实验依据,以指导临床辅助治疗。方法应用无创性皮肤生理功能测试仪检测17例对称性肢端角化病患者皮损及20例健康对照者角质层含水量、皮脂含量及经表皮水分流失(TEWL)。结果与正常皮肤比较,对称性肢端角化病患者皮损角质层含水量(t=9.455,P=0.000)及皮脂含量(t=8.904,P=0.000)降低,TEWL值增加(t=3.709,P=0.001)。结论对称性肢端角化病患者皮肤屏障功能明显受损。因此,恢复皮肤屏障功能、加强保湿是对称性肢端角化病重要的辅助治疗手段之一。

EGF结构与功能研究

表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)在1962年首次由Cohen报道发现,其后的三十余年,对这一小分子蛋白进行了广泛而深入的研究.人和小鼠的EGF由53个氨基酸组成的、分子量为6KDa,有三对保守的二硫键,没有糖基化位点,二级结构中没有α-螺旋.

表皮生理功能改变在特应性皮炎皮肤瘙痒发生中的作用

瘙痒是指皮肤对于刺激所导致搔抓反应的欲望．很多系统和皮肤疾病均可导致皮肤瘙瘴，根据起源的不同可将瘙痒分为不同的类型。皮肤型瘙痒是由于皮肤病变而导致的瘙痒，是临床最常见的瘙痒类型’。皮肤型瘙痒患者往往伴有表皮生理功能（包括表皮通透屏障功能、角质层含水量和表皮酸碱度）异常，如银屑病、湿疹和特应性皮炎。改善表皮功能可能是治疗特应性皮炎患者皮肤瘙痒及相关疾病（包括患者生活和睡眠质量）的有效方法。

审美抑或社会性问题——刘家琨艺术学校系列剖析

本文以大量翔实的一手资料为基础,剖析了刘家琨建筑师设计的艺术学校系列在其个人实践生涯中的呈现和意义,同时也阐释了这些作品所体现的对社会性、资源的当代性问题的态度,以及在建筑的艺术性方面对叙事语言、建构语言与建筑的功能性“表皮”等问题的探索。

消风散及其拆方对急性湿疹模型豚鼠表皮通透屏障功能障碍的影响

目的探讨消风散治疗急性湿疹的可能作用机制及配伍意义。方法将36只豚鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、消风散组、消风散去润燥药组、消风散去解表药组,每组6只。除正常组外,其余各组豚鼠采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)丙酮溶液背部脱毛区外涂致敏及左耳内侧激发诱导建立豚鼠急性湿疹模型。造模后消风散组给予消风散药液5.58 g/(kg·d)灌胃,消风散去润燥药组和消风散去解表药组给予相应药液3.72 g/(kg·d)灌胃,氯雷他定组给予氯雷他定溶液0.80 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予5 ml/(kg·d)纯净水灌胃。各组均每天灌胃1次,连续7天。分别于造模前、造模后、给药后采用多功能皮肤测试仪测定皮肤角质层含水量;给药后进行皮损评分,HE染色观察皮损区皮肤组织形态并记录毛囊数量。ELISA法检测血清中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素17(IL-17)、辅助性CD4^(+)T细胞(CD4^(+))含量。结果与正常组比较,模型组在造模后、给药后豚鼠皮肤角质层含水量下降,给药后血清IL-4含量降低,毛囊数量减少、皮损评分升高,血清IgE、IL-17、CD4^(+)含量升高(P<0.05),HE染色显示皮肤表皮棘层肥厚伴海绵水肿,真皮浅层大量嗜酸性粒细胞浸润和纤维结缔组织增生。与模型组比较,各药物干预组给药后皮肤角质层含水量均升高,血清IL-4含量升高,血清IgE、IL-17、CD4^(+)含量降低,毛囊数量增加(P<0.05);氯雷他定组、消风散组皮损评分降低(P<0.05);病理结果显示,各药物干预组皮肤病理均损害减轻。与消风散组比较,给药后消风散去润燥药组皮肤角质层含水量降低,血清IgE、CD4^(+)含量升高,IL-4含量降低(P<0.05);消风散去解表药组毛囊数量减少,血清IgE、IL-17、CD4^(+)含量升高,IL-4降低(P<0.05);氯雷他定组血清IgE、CD4^(+)含量降低,血清IL-4含量升高(P<0.05)。结论消风散能够改善急性湿疹模型豚鼠表皮通透屏障功能,从而修复皮毛“疏泄”与“润泽”状态,且辛散解表药和养血润燥药配伍具有协同作用,其作用机制可能与抑制炎症、调节免疫有关。

辣椒素受体V1的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性研究

目的探讨辣椒素受体V1(transient receptor potential V type1,TRPV1)的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性。方法收集2012年3月至2013年6月收治的18例增生性瘢痕患者的临床资料和组织标本。采用蒸发测定仪Dermalab检测瘢痕及其邻近正常皮肤跨皮水分丢失(TEWL);采用免疫组织化学法、Western-blot法分别检测TRPV1蛋白在增生性瘢痕及正常皮肤中的表达情况;对TRPV1蛋白表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性采用直线相关分析。结果 (1)增生性瘢痕和临近正常皮肤的TEWL值分别为(13.42±4.68)g·m-2·h-1、(6.13±3.25)g·m-2·h-1,增生性瘢痕TEWL值明显高于正常皮肤(t=5.78,P<0.01)。增生性瘢痕TEWL净丧失量为(7.25±2.45)g·m-2·h-1。(2)TRPV1蛋白主要表达于增生性瘢痕及正常皮肤的表皮层,增生性瘢痕TRPV1蛋白表达明显高于正常皮肤(P<0.01)。(3)TRPV1蛋白表达与增生性瘢痕TEWL净丧失量呈正相关(r=0.85,P<0.05)。结论 TRPV1的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能障碍有关,可作为临床干预瘢痕的一个新的生物治疗靶点。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。

黑素细胞对表皮渗透屏障功能的影响

表皮渗透屏障功能是表皮的主要生理功能之一,深肤色个体较浅肤色个体具有更优越的表皮屏障功能,提示黑素细胞和/或黑素与表皮渗透屏障功能密切相关.有关黑素细胞对角质形成细胞及对表皮渗透屏障功能影响的机制尚不清楚,近几年研究发现,酸性黑素小体进入表皮可能是深肤色者表皮屏障功能增强的细胞基础,表皮pH对增强屏障功能重要性不可忽视,内源性酸化机理可能提供一个促进深肤色个体表皮酸化的新机制.此外,黑素细胞-角质形成细胞的交叉对话及相关信号机制可能在增强表皮渗透屏障功能中起重要作用.

创面愈合过程中创缘表皮干细胞的再分布

目的:研究皮肤干细胞在全层皮肤创面愈合过程中的分布与增殖分化特征,以及该特征在创面愈合过程中的作用。方法:10只Wistar大鼠背部各制备4个面积为2.54cm^2的全层皮肤创面,将创面随机分为2组,即银锌霜治疗组(20个创面),空白对照组(20个创面)。分别于伤后3d、1周、2周和3周以组织学检查动态观察各组治疗效果,并以β_1整合素、角蛋白19(K19)免疫组化法检测表皮干细胞在创面愈合过程中的表达情况。结果:两面创面愈合率为银锌霜组80%(16/20)。两组创面肉芽组织于各时相点均未见β_1整合素、K19阳性细胞出现,但于创缘表皮的层或颗粒层出现了散在的β_1整合和K19同时染色阳性细胞。且越接近创面这些阳性细胞越密集,组织学上与基底层的阳性细胞无直接联系,其数量随着创面的缩小渐渐增加,直到创面愈合。上皮化后,这些阳性细胞逐渐减少,并随着愈合创面表皮脚的出现而消失,而感染创面的阳性细胞数量明显少于未感染创面的阳性细胞数。结论:表皮干细胞能动地与创面的修复,创缘表皮干细胞再分布的主要功能可能促进创面再上皮化。