羊栖菜中的褐藻糖胶通过影响MAPK信号通路对表皮屏障的修复治疗

目的探讨羊栖菜褐藻糖胶(Sargassum fusiforme fucoidan,SFF)对表皮屏障损伤的修复作用。评价SFF对角质形成细胞增殖、迁移和分化的影响。方法使用BrdU和CCK8试剂盒分析SFF对HaCaT细胞的增殖作用影响;划痕法测定SFF对HaCaT细胞的迁移作用;流式细胞仪、qPCR和蛋白免疫印迹检测SFF对HaCaT细胞中mRNA表达和蛋白表达的影响。构建表皮屏障受损模型,通过经皮水散失、组织学观察等实验确定SFF对受损表皮屏障的体内修复作用。结果显示SFF以剂量依赖方式显著促进HaCaT细胞的增殖及迁移。此外,SFF能上调HaCaT细胞分化标志物的基因表达,通过激活ERK和JNK通路促进表皮角质形成细胞的增殖、迁移和分化。体内研究表明,与基质组相比,SFF处理组能促进表皮通透性屏障的恢复率,显著增加水合作用。结论SFF能够影响MAPK信号通路调节紊乱的角质形成细胞功能,作为治疗表皮屏障损伤的潜在药物或功能性化妆品添加成分。

钙离子对表皮屏障功能的调节

在正常的表皮内存在着钙离子浓度梯度,自基底细胞层到颗粒层,细胞内、外钙离子浓度由低到高;而角质层中钙离子浓度较低。这种钙离子浓度梯度对于表皮的增生、分化、细胞间连接及屏障功能起着重要的作用。细胞外低浓度钙促进角质形成细胞增生;高浓度钙促进角质形成细胞分化、细胞间黏附。完整的表皮屏障功能是保证表皮钙离子浓度梯度的前提,当屏障功能被破坏后,颗粒层细胞内、外的钙离子浓度降低有促进屏障功能恢复的作用。随着屏障功能恢复,表皮钙离子浓度梯度也恢复正常。许多与屏障功能相关的炎症性皮肤病和与表皮松解相关的皮肤病往往伴有表皮钙离子浓度梯度的异常。

小G蛋白Cdc42调节表皮发生和表皮屏障形成

皮肤是人体最大的器官,皮肤屏障的形成和修复对于皮肤发育和修复具有重要的意义,然而目前关于调节皮肤屏障发育的信号机制尚不完全清楚。为了探讨小G蛋白Cdc42在表皮屏障发生中的作用,课题组独立构建了表皮基底层特异性Cdc42敲除小鼠,研究发现该基因敲除小鼠皮肤发育过程中表皮由外向内屏障发育延迟,而由内向外屏障破坏,小鼠在出生后24h内死亡。对Cdc42基因敲除小鼠皮肤进行转录谱测序分析,差异基因在角质套膜和角质形成细胞分化中显著聚集。进一步研究发现,基底层细胞Cdc42缺失导致基底层中表皮干细胞数量减少,干细胞分化异常,揭示Cdcc42在维持表皮干细胞稳态维持中发挥重要作用。细胞学水平研究发现,Cdc42-Pak1信号通路参与调节表皮细胞的黏附连接和紧密连接;Cdc42-p38/MAPK-AP-1信号通路影响表皮角质套膜结构蛋白SPRR家族异位表达,参与调节表皮屏障的形成和维持。

产气荚膜梭菌肠毒素肽段与Claudin4特异性结合对哺乳动物表皮屏障通透性的调控

目的 :探讨产气荚膜梭菌肠毒素肽段(Clostridium perfringens enterotoxin,c CPE194-319)对哺乳动物表皮屏障通透性的影响。方法:首先利用SWISS-MODEL软件模拟分析了c CPE194-319与Claudin4(Cldn4)结合的结构模型,然后通过细胞免疫荧光染色法和跨内皮细胞电阻法(trans-epithelial electrical resistance,TEER)检测c CPE194-319对人源永生化表皮细胞Ha Ca T膜蛋白Cldn4表达定位的影响和细胞层紧密性的影响,最后在小鼠中利用葡聚糖-罗丹明荧光素扩散法观察经c CPE194-319处理后的小鼠表皮的荧光素渗透变化情况。结果:c CPE194-319可与Ha Ca T细胞中Cldn4蛋白特异性结合,随着作用时间的增加,c CPE194-319结合Cldn4蛋白后形成复合体从Ha Ca T细胞膜上向细胞质中转移,TEER值降低;当洗脱c CPE194-319后,新合成的Cldn4蛋白可重新定位到细胞膜上,TEER值升高。小鼠体内实验表明,c CPE194-319处理后的小鼠表皮渗透性增强。结论:c CPE194-319能够通过与Cldn4蛋白的特异性结合,从而调控哺乳动物表皮屏障的通透性。

活血解毒方通过修复表皮屏障减轻银屑病样小鼠皮损复发表现

目的:通过对比凉血解毒方,观察活血解毒方对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白表达以及皮损复发的干预作用,为中医药通过调节皮肤屏障治疗及延缓银屑病复发提供生物学证据。方法:选用C57BL/6J小鼠,随机分为空白对照组、模型组、阳性药(氨甲蝶呤)组、活血解毒方组和凉血解毒方组,小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。初次干预7 d后,间隔30 d,除空白对照组外各组仅涂抹咪喹莫特诱导银屑病复发皮损模型。期间对皮损拍照并进行银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分;水油笔检测皮损表皮含水量;HE染色观察其病理改变并测量表皮厚度;免疫荧光法检测小鼠表皮Ki67表达;免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中紧密连接蛋白claduin-1、claudin-7和occludin的表达及CD^(3+)T淋巴细胞浸润。Westernblot法检测皮损occludin的表达。结果:活血解毒方可缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损,降低PASI评分及表皮厚度(P<0.05);与模型组比较,活血解毒方可增加皮损区表皮水分含量(P<0.05),减少表皮Ki67和loricrin的异常表达和真皮CD^(3+)T细胞浸润(P<0.01),增加claudin-1、claudin-7和occludin的表达(P<0.05),增强紧密连接的结构完整性。活血解毒方亦可减轻二次诱导的小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及表皮厚度(P<0.05)。结论:活血解毒方可能通过调节紧密连接蛋白表达,恢复受损的表皮屏障功能,从而减轻银屑病复发皮损表现。

紫外线照射对表皮屏障功能的影响

表皮屏障在抵御外界危险因素侵害的过程中发挥重要作用。表皮屏障中各组成部分的结构及功能失调与人类的多种皮肤疾病有关。紫外线辐射等因素可引起表皮屏障功能障碍,紫外线照射使表皮屏障变得更易渗透,经皮水丢失量增加,病原体和过敏原更易进入体内,其机制可能与角质层屏障中角化包膜结构蛋白、细胞外脂质与天然保湿因子的含量降低,以及颗粒层中紧密连接屏障功能的减弱有关。近年来一些研究拓展了紫外线照射对表皮屏障的结构与功能影响的认识,本文综述紫外线照射与表皮屏障功能的影响。

黄褐斑：表皮屏障与黑素屏障失衡

黄褐斑是一种面部获得性色素增加性皮肤病，发病机制尚不清，概述黄褐斑的表皮屏障及黑素屏障的变化，以及真皮血管的变化。在此基础上推测黄褐斑的可能发病机制为紫外线、化妆品、避孕药等不良刺激导致表皮屏障功能障碍，代偿性引起黑素细胞功能活跃，黑素屏障增强，形成临床上表现为色素沉着为主的皮肤病。进一步导致真皮毛细血管扩张，血管内皮生长因子表达增加，促进色素沉着发生。

外用糖皮质激素对表皮屏障影响的研究进展

表皮屏障作为人类表皮的基本生理结构,具有抵御外界微生物侵袭、维持体内环境稳定等作用。糖皮质激素制剂是皮肤性病科应用广泛的外用制剂,不规范地使用可严重破坏局部表皮屏障的结构及功能。本文整理近年来的文献研究,以期从现代医学的角度规范论述糖皮质激素对表皮屏障结构的影响。

表皮渗透屏障对化妆品功能评价的影响

目的探讨表皮渗透屏障对化妆品功能评价的影响。方法选择10人进行第一阶段3个月的试验,即按常规方法进行化妆品功能试验,观察皮肤保湿度、透皮失水率和皮肤弹性的变化并计算样本量;根据第一阶段结果,采用含十二烷基磺酸钠5%的洗涤剂清洗皮肤,使表皮渗透屏障轻度受损,再进行第二阶段3个月的化妆品功能试验,观察上述指标。结果第一阶段试验表明采用常规评价方法在使用化妆品3个月时,皮肤保湿度、透皮失水率和皮肤弹性与使用前比较差异有显著性(P<0.05),估计最低样本量分别为15、12和10人。据此,选择20人再进行第二阶段试验,上述3项指标分别在试验的第1周、第1周和第1个月与使用前比较差异有显著性(P<0.05),估计最低样本量分别为4、7和8人。结论含十二烷基磺酸钠5%的洗涤剂可轻度损伤表皮渗透屏障,增加皮肤对化妆品功能性试验的敏感性,节省样本量和试验周期。

表皮屏障受损对接触致敏物的反应

目的探讨受到微弱损伤的皮肤致敏后,发生变应性接触性皮炎的几率及对皮肤的影响。方法采用十二烷基磺酸钠敷贴,胶带粘贴及紫外线照射三种方式对皮肤进行微弱损伤并用芳香混合物Ⅰ致敏,通过临床评估,非创仪器Tewameter~TM210,Corneometer~CM820,Chromameter~CR400和实验室检查评价皮肤表面状况,检测皮肤经表皮失水率、含水量、颜色和炎症及致敏情况。结果进行微弱损伤后,临床评估为0分,但十二烷基磺酸钠和胶带粘贴部位经表皮失水率显著高于微损伤前,十二烷基磺酸钠部位含水量显著低于微损伤前(P<0.05)。致敏后,十二烷基磺酸钠和胶带粘贴部位的临床评分、经表皮失水率和a~*值均比未受过微损伤的致敏部位显著升高(P<0.05);IL-1α和IL-12的含量较致敏前显著升高(P<0.05)。以上差异均有统计学意义。结论及早发现皮肤屏障受到的微弱损伤,能及时阻断无临床症状的皮肤向临床疾病方向发展,预防接触性皮炎的产生和发展。

黄褐斑表皮渗透屏障受损可能机制探讨

目的探讨表皮渗透屏障受损在黄褐斑发病机制中的作用。方法门诊收集黄褐斑患者皮损及健康志愿者皮损各10例,通过免疫组化观察并比较黄褐斑皮损及正常对照组皮肤K6,K10,K14,Filaggrin,Involucrin,Loricrin和ASAH1的分布及表达差异。结果与正常对照组相比,黄褐斑患者皮损处K6表达较强,K10及K14表达弱于正常对照组。Filaggrin,Loricrin,Involucrin及ASH1的表达弱于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄褐斑存在表皮渗透屏障受损,其机制与角蛋白、角化套膜蛋白及ASH1表达异常相关;临床治疗黄褐斑应注意修复表皮渗透屏障。

抗氧化剂对表皮通透屏障功能的影响

表皮通透屏障功能对皮肤功能具有重要调节作用。增强表皮通透屏障功能已成为防治某些皮肤病和延缓皮肤老化的手段之一。研究显示,抗氧化剂可通过促进表皮细胞分化及其脂的合成而增强表皮透屏障功能。由此提示,抗氧化剂可用于防治某些皮肤病和延缓皮肤老化。

辣椒素受体V1的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性研究

目的探讨辣椒素受体V1(transient receptor potential V type1,TRPV1)的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性。方法收集2012年3月至2013年6月收治的18例增生性瘢痕患者的临床资料和组织标本。采用蒸发测定仪Dermalab检测瘢痕及其邻近正常皮肤跨皮水分丢失(TEWL);采用免疫组织化学法、Western-blot法分别检测TRPV1蛋白在增生性瘢痕及正常皮肤中的表达情况;对TRPV1蛋白表达与增生性瘢痕表皮屏障功能的相关性采用直线相关分析。结果 (1)增生性瘢痕和临近正常皮肤的TEWL值分别为(13.42±4.68)g·m-2·h-1、(6.13±3.25)g·m-2·h-1,增生性瘢痕TEWL值明显高于正常皮肤(t=5.78,P<0.01)。增生性瘢痕TEWL净丧失量为(7.25±2.45)g·m-2·h-1。(2)TRPV1蛋白主要表达于增生性瘢痕及正常皮肤的表皮层,增生性瘢痕TRPV1蛋白表达明显高于正常皮肤(P<0.01)。(3)TRPV1蛋白表达与增生性瘢痕TEWL净丧失量呈正相关(r=0.85,P<0.05)。结论 TRPV1的表达与增生性瘢痕表皮屏障功能障碍有关,可作为临床干预瘢痕的一个新的生物治疗靶点。

评估表皮通透屏障功能的方法及其应用

表皮通透屏障功能是指表皮防止物质通过表皮进出机体的功能。该功能对于表皮的增生分化、炎症的形成与发展以及抗微生物感染等方面都具有重要作用。而表皮通透屏障功能受体内外多种生物、物理因素的影响。因此,调节表皮通透屏障功能是皮肤保健和防治某些皮肤病的重要手段;评估表皮通透屏障功能是了解皮肤生物功能以及判断皮肤保健、治疗效果的方法。评估表皮通透屏障功能的方法很多。除测量透皮失水率外,超微示踪、透皮微量分析、同位素及荧光标记定位和定量等都是评估表皮通透屏障功能的有效方法。了解这些方法的特点对于选择恰当的手段和有效地评估表皮通透屏障功能具有重要的指导意义。

当归饮子对血虚风燥型皮炎-湿疹表皮通透屏障功能障碍调控机制研究

目的研究当归饮子对血虚风燥型皮炎-湿疹表皮通透屏障功能障碍的调控机制。方法将32只健康雄性豚鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、氯雷他定组和当归饮子组,每组8只。除正常组外,其余组豚鼠采用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液诱导建立血虚风燥型皮炎-湿疹样病变模型。造模结束后,当归饮子组给予当归饮子水煎液6.82 g/(kg·d)、氯雷他定组给予氯雷他定0.80 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予相应体积生理盐水灌胃,均连续灌胃14 d。观察皮损区皮肤组织形态改变,采用皮损评分评价皮损形态,检测皮肤角质层含水量、经表皮水分流失量及血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、CD4^(+)、CD8^(+)水平。结果皮肤病理显示正常组豚鼠皮肤组织结构基本正常;模型组豚鼠皮肤表皮角化过度,真皮浅层大量密集分布嗜酸性粒细胞;氯雷他定组和当归饮子组较模型组明显改善。模型组皮损评分、经表皮水分流失量及血清IgE、IL-17、CD8^(+)水平均明显高于正常组(P均<0.05),皮肤角质层含水量及血清IL-4、CD4^(+)水平均明显低于正常组(P均<0.05);氯雷他定组和当归饮子组皮损评分、经表皮水分流失量及血清IgE、IL-17、CD8^(+)水平均明显低于模型组(P均<0.05),皮肤角质层含水量及血清IL-4、CD4^(+)水平均明显高于模型组(P均<0.05)。结论当归饮子可通过改善皮肤组织形态而减少经表皮水分散失,降低血清IgE水平达到类抗过敏效果,改善CD4^(+)、CD8^(+)平衡状态及调节IL-4、IL-17细胞因子来修复表皮通透屏障,从而达到改善“皮毛微环境”状态。

miRNAs在特应性皮炎发病机制中的作用研究进展

特应性皮炎(Atopic dermatitis, AD)是一种以反复瘙痒及湿疹样皮肤损伤为典型临床特征的慢性炎症性皮肤病,近年来已成为疾病负担较重的非致命性皮肤病,严重影响人们的生活质量^([1]).AD的发病机制尚不明确,表皮屏障缺陷、免疫失调及遗传易感性为当前的机制研究方向^([2]).微小RNA(MicroRNAs,miRNAs)是短的单链RNA分子,其在转录后水平上控制基因表达。

Netherton综合征及红斑型天疱疮表皮中激肽释放酶相关肽酶和丝氨酸蛋白酶抑制物的检测

目的探讨激肽释放酶相关肽酶家族(KLKs)和丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制物(Serpins)在Netherton综合征(NS)及红斑型天疱疮(PE)患者表皮中的表达。方法选用LEKTI,SLPI,KLK5,KLK7的羊抗人多克隆抗体,以免疫组织化学结合图像分析软件进行半定量分析的方法研究NS,PE患者表皮中KLK5,KLK7,LEKTI,SLPI等的表达情况。结果NS组表皮中KLK5,KLK7,SLPI平均光密度分别高于对照组141.49%,523.88%,134.20%。PE组的KLK5,KLK7,SLPI平均光密度分别高于对照组90.73%,456.42%,77.11%。结论NS和PE表皮中KLK5,KLK7升高,而SLPI则代偿性上调。

特应性皮炎样小鼠模型皮肤屏障功能受损的分子机制研究

目的:建立二硝基氯苯(DNCB)诱导的小鼠AD样模型,观察角质形成细胞的分化和脱落相关基因的表达,探讨皮肤屏障功能受损的分子机制。方法:皮炎组用DNCB两次致敏和两次激发。最后1次致敏后24 h测定各项观察指标。结果:皮炎组小鼠背部经表皮水分丢失量显著高于对照组,角质层含水量显著低于对照组。皮炎组小鼠表皮FLG、IVL、TG-M1荧光强度下降,表皮最外层KLK7荧光强度稍有增强。FLG、IVL、TGM1和KLK7 mRNA的表达出现炎症后修复性改变。结论:DNCB诱导的BALB/c小鼠特应性皮炎样模型存在皮肤屏障功能异常及表皮分化脱落相关基因表达的改变。