黔西南汉族人群表皮生长因子前体蛋白编码序列第14和16外显子中单核苷酸多态性研究

背景与目的单核苷酸多态性(SNPs)在蛋白编码序列中多以富集成簇的方式分布,并提示其可能有民族区域和人种之间的差异性,然而SNPs在黔西南汉族人群表皮生长因子前体蛋白(prepro EGF)编码序列第14和16外显子中的分布状况迄今尚未见报道,本研究拟对35例黔西南汉族受试者进行研究,旨在分析SNPs在prepro EGF编码序列第14和16外显子中的分布特征。方法设计合成4条引物,分别对35例汉族受试者prepro EGF编码序列第14和16外显子区段进行PCR扩增和产物的DNA测序;检索单核苷酸多态性资料库(db SNP)获取资料并与测序结果进行对比分析。结果 35例黔西南汉族受试者中13例(37.1%)在prepro EGF编码序列的2 525 bp位点出现SNPs,基因型为AG和GG,频率分别为69.2%和30.8%,其等位基因频率分别为A 34.6%和G 65.4%;27例(77.1%)在2 576 bp位点有SNPs,基因型为AA和AG,频率分别为66.7%和33.3%,等位基因频率分别为A 83.3%和G 16.7%。相比之下,北京汉族受试者较黔西南汉族受试者在prepro EGF编码序列第14外显子内多了1个单核苷酸多态位点,即2 619 bp位点;欧美等其他民族不仅在prepro EGF编码序列第14外显子内分布有rs199935855等7个SNPs,而且在其第16外显子内也分布有rs149396988等6个SNPs;黔西南汉族和北京汉族受试者在prepro EGF编码序列的第16外显子内均未见有SNPs分布。结论在黔西南汉族、北京汉族和欧美等民族的prepro EGF编码序列第14和16外显子中,SNPs分别具有各民族、各种族的特征性分布,据此可区分不同地域的种族和人群,甚至进行个体识别。也可将这些呈特征性分布的SNPs视为遗传标记进而深入研究SNPs与疾病发生的关系。

血清肝素结合表皮生长因子mRNA与急性冠脉综合征的关系

目的 观察分析血清肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)信使核糖核酸(mRNA)与急性冠脉综合征(ACS)的关系,探讨血清HB-EGF mRNA对ACS发病的预测价值及发病早期的诊断价值。方法 收集青海省人民医院急诊科2019年12月至2022年3月收治的经冠脉造影(CAG)确诊为ACS患者113例,分为急性心肌梗死(AMI)组58例和不稳定型心绞痛(UA)组55例,以同期在门急诊或体检时经CAG或冠脉CT检查无狭窄并有含高血压、糖尿病或吸烟的人群51例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测ACS患者血清HB-EGF mRNA的表达水平。运用多元有序Logistic回归分析HB-EGF mRNA与ACS的关系。根据Gensini不同评分将ACS患者分为低分组(n=34)、中分组(n=56)和高分组(n=23),比较三组患者血清HB-EGF mRNA水平,并分析两组ACS患者血清HB-EGF mRNA与冠脉病变程度之间的相关性。应用ROC曲线下面积(AUC)评估血清HB-EGF mRNA对ACS患者的诊断价值。结果 多元有序Logistic回归分析显示,HB-EGF mRNA是ACS的危险因素(OR=10.994, 95%CI4.005~30.182,P<0.001)。血清HB-EGF mRNA水平低分组<中分组<高分组(P<0.05)。UA组(r_(s)=0.667,P<0.001)和AMI组(r_(s)=0.857,P<0.001)血清HB-EGF mRNA与冠脉病变程度呈正相关。UA组和AMI组血清HB-EGF mRNA的AUC分别为0.911和0.979(P值均<0.001),以约登指数最大值所对应的值为最佳截断值,得到最佳工作点(optimal operating point, OOP)分别为1.68和2.14。结论 血清HB-EGF mRNA升高与ACS有关,HB-EGF mRNA在动脉粥样硬化的发生、发展中可作为一个独立的危险因子。

乳腺癌患者外周血表皮生长因子受体mRNA与组织中蛋白表达的相关性及其意义

目的本研究旨在检测乳腺癌患者外周血EGFR mRNA的表达,评价其作为循环乳腺癌细胞标志的可能性;结合相应肿瘤组织中EGFR蛋白的检测,分析两者的相关性;并结合临床病理资料综合分析,探讨其在乳腺癌患者外周血中表达的意义。方法以RT-PCR法,分别对40例乳腺癌患者、25例良性乳腺病患者和30例健康人外周静脉血进行EGFR mRNA检测。免疫组化法检测相应肿瘤组织中EGFR蛋白的表达情况。结果乳腺癌组外周静脉血中EGFR mRNA检出率(32.5%)与健康人组(0)和良性乳腺病患者组(0)间差异均存在统计学意义(P<0.01)。免疫组化法检测到乳腺癌患者相应肿瘤组织中有25例(62.5%)EGFR蛋白阳性,组织中EGFR蛋白表达级别高的患者其相应外周血EG-FR mRNA的检出率也高。EGFR mRNA阳性表达与临床分期、组织学分级及ER间存在明显的相关性,而与病理类型、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、PR和HER-2间无明显相关性。结论RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血EGFR mRNA有望成为检测循环乳腺癌细胞的有效方法。结合临床病理资料分析,RT-PCR法检测外周血EGFR mRNA有助于判断乳腺癌的预后,有益于乳腺癌微转移的早期诊断、治疗方案的选择及治疗疗效的监测。

siRNA介导表皮生长因子受体基因沉默导致HepG2凋亡

目的:研究含有与EGFR基因序列相同的19nt序列RNAi质粒针对HepG2细胞表皮生长因子受体的RNA干扰效果。方法:用pSIREN-hE转染细胞,其质粒骨架为RNAi-Ready pSIREN-Shuttle Vector,含有可以被U6启动子转录成shRNA的寡核苷酸链,大小为69 nt,含有2段19nt的寡核苷酸,用于编码EGFR基因的RNA干扰的siRNA的正义链及反义链,评价该RNAi质粒对人肝细胞癌细胞株(HepG2)EGFR基因的mRNA表达抑制效果及对细胞凋亡的作用。结果:HepG2细胞EGFR基因的mRNA被明显抑制并伴有凋亡增加。结论:含有与EGFR基因序列相同序列RNA质粒对EGFR基因的RNA干扰可能是治疗肝细胞癌的一种有效手段。

表皮生长因子与胰岛素对小鼠早胚体外发育的影响(英文)

目的:探讨表皮生长因子(epiderm algrowth factor,EGF)与胰岛素对小鼠体外受精(in vitro fertilization,IVF)胚胎植入前发育的影响。方法:小鼠IVF胚胎培养在添加不同浓度的EGF和/或胰岛素-葡萄糖的CZB培养基中,于hCG注射后138h检测囊胚发育率及每个囊胚的细胞数目。结果:培养基中添加0.1ng/mlEGF显著提高了小鼠扩张囊胚的形成率,而囊胚的细胞数目并未增加。EGF与胰岛素-葡萄糖共同添加对小鼠IVF囊胚发育率及囊胚细胞数目并未有显著提高。结论:EGF通过刺激细胞分化,而非细胞增殖方式促进小鼠IVF胚胎的早期发育。而各自最佳浓度的EGF与胰岛素共同添加对小鼠早胚并未有协同促进作用。

针对表皮生长因子受体基因RNA干扰质粒表达载体的构建

目的:表皮生长因子受体(EGFR)是一种酪氨酸激酶跨膜受体,人类的多种恶性肿瘤的发生与表皮生长因子受体过度表达有关。EGFR已成为阳性表达肿瘤的重要治疗靶标。在哺乳动物细胞中,RNA干扰是通过与目的基因特异互补的21-23个硷基的小双链RNA来抑制该基因的表达。有研究表明表达小发夹RNA的载体能诱导产生更好的RNA干扰效果。本实验通过向pSIREN-Shuttle质粒插入一段可被转录成小发夹RNA的双链寡核苷酸序列(其中含有于EGFR基因序列相同的19nt序列)重构了RNAi质粒表达载体。通过细胞转染评价该载体对人鼻咽癌细胞株(HNE1)EGFR基因的mRNA表达抑制效果。结果显示HNE1细胞的EGFR基因mRNA被明显抑制。提示shRNA质粒表达载体介导对EGFR基因的RNA干扰可能是鼻咽癌干预治疗的一种有效手段。

西妥昔单抗对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白表达的影响

目的:探讨西妥昔单抗对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:27只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、西妥昔单抗组,每组9只。结扎大脑中动脉制备缺血再灌注模型,立即经侧脑室注射给予西妥昔单抗(106μg/d),持续7 d。每组选取3只,在术后第3和7天进行神经功能评分。每组分别在缺血再灌注术后第3和7天处死3只,取脑组织制备冰冻切片,用免疫荧光染色观察APP及胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,用TUNEL染色法检测神经元凋亡指数。提取新生大鼠大脑皮层组织制备胶质细胞悬液,培养的胶质细胞换成含有西妥昔单抗(10μg/mL)的无糖无血清培养基在缺氧培养箱中培养2 h,然后换成正常糖/血清的培养基在正常氧的培养箱中继续培养6 h,收集细胞,观察胶质细胞GFAP荧光强度的变化,对照组不进行缺氧/复氧处理,缺氧/复氧组不加西妥昔单抗。结果:与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠神经功能评分升高,凋亡指数增加,胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,APP表达升高(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,西妥昔单抗组神经功能评分下降,凋亡指数降低,GFAP免疫荧光强度减弱,APP表达下降(P<0.05)。体外实验结果显示,与对照组比较,缺氧/复氧组胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,而西妥昔单抗组较缺氧/复氧组降低(P<0.05)。结论:西妥昔单抗能促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复,其机制可能与减少APP的表达、抑制神经元凋亡及胶质细胞活化有关。

转化生长因子-α

转化生长因子-α是人类发现的第一个多肽类的有丝分裂原-皮生长因子家族的重要成员。其在人体表更新较快的组织、多种肿瘤及发育阶段的胚胎组织中均有表达。在肿瘤患者的血、尿、脑脊液及细胞培养液中可检测到。其前体可作为子宫容受性的标记分子。

早老素/γ-分泌酶依赖性剪切β淀粉样前体蛋白调控表皮生长因子受体的表达

由中美科学家组成的研究组近日发现，在阿尔兹海默病发病过程中起关键性作用的γ-分泌酶具有抑制肿瘤的作用。该研究组．课题第一次较深入地探讨了阿尔兹海默病与肿瘤的关系，对这两个当前热门的研究领域都将产生巨大影响。

单孔胸腔镜肺楔形切除术治疗早期肺癌的效果及对ProGRP、EGFR及肺氧合功能的影响

目的:探讨单孔胸腔镜肺楔形切除术治疗早期肺癌的效果及对胃泌素释放肽前体(ProGRP)、表皮生长因子受体(EGFR)、肺氧合功能的影响。方法:选择2020年11月—2023年3月在我院接受治疗的305例早期肺癌患者,采用随机数表法分为试验组(n=153)和对照组(n=152)。对照组给常规开胸术治疗,试验组给予胸腔镜微创手术治疗。比较两组临床疗效、ProGRP、EGFR、肺氧合功能、肺功能、CA125、CEA及并发症发生情况。结果:治疗后,试验组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后,两组血清ProGRP、EGFR均降低,且试验组低于对照组,肺氧合功能均升高,且试验组高于对照组,差异显著(P<0.05);治疗后,两组血清FVC、FEV_(1)、6min步行距离均升高,且试验组高于对照组,差异显著(P<0.05);治疗后,两组血清CA125、CEA均下降,且试验组低于对照组,差异显著(P<0.05);术后,试验组并发症发生率显著低于对照组,差异显著(P<0.05)。结论:在早期肺癌中单孔胸腔镜肺楔形切除术治疗有较好的效果,可有效改善患者ProGRP、EGFR及肺氧合功能水平。

冬虫夏草防治氨基糖甙急性肾损害的分子生物学机理

本研究采用斑点杂交、免疫组化、放射免疫和^(125)I-mEGF结合试验,分别检测了肾组织EGF前体mRNA表达,肾组织EGF,尿EGF及肾组织EGF受体。发现庆大霉素所致急性肾衰时第四至第12天肾组织EGF前体mRNA表达明显减少,肾皮质、髓质EGF阳性小管上皮细胞数增加。皮质、髓质EGF受体含量分别平均增加7.3～14.6和3.1～4.6倍,但尿EGF排出量并无明显减少,恢复期尿EGF显著增加。冬虫夏草能增加第四天EGF前体mRNA表达,第四至第12天肾皮质EGF含量,第七天尿EGF排出量,而不影响EGF受体数目。该结果表明,冬虫夏草可能通过增加肾组织EGF前体mRNA表达,促进EGF合成,从而促进小管上皮细胞增殖。通过此分子生物学机理加速小管再生修复和急件肾衰的恢复。

鼻咽癌中EGFR调控APP信号通路的初步研究及其意义

目的探索鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)调控β淀粉样蛋白前体(amyloid beta A4protein,APP)的信号通路及其临床意义。方法采用转化生长因子(transforming growth factors-α,TGF-α)诱导CNE2细胞24h作为研究模型,分别采用EGFR酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂PD153035,MAPK抑制剂PD98059,PI3K抑制剂Wortmannin处理2h再用TGF-α作用24h作为实验组,Western blot检测阻断剂APP蛋白的表达和分泌变化情况。免疫组化检测EGFR和APP蛋白在NPC与慢性鼻咽炎症上皮组织中的表达差异。结果PD153035+TGF-α组APP蛋白表达与分泌有所下调,wortmannin+TGF-α组APP蛋白下调明显,PD98059+TGF-α组APP表达无明显变化。EGFR和APP在NPC组织中的表达高于鼻咽炎症上皮组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论NPC中APP蛋白主要受EGFR信号通路中的PI3K调控,EGFR和APP与NPC的发生有关。

人preproEGF的mRNA/cDNA序列中SNPs及生物信息学分布探究

目的探明单核苷酸多态（SNPs）在人表皮生长因子前体蛋白（prepr0EGF）mRNA／cDNA序列中的分布状况。方法凭借美国生物信息中心（NCBI）平台和单核苷酸多态资料库（dbSNP）检索、分析、标注和图解相关SNPs在人preproEGF多肽mRNA／eDNA序列中的分布位点和生物信息学特征。结果分布在人肾源和其他组织源preproEGF多肽mRNA／cDNA序列中的SNPs总计有106个，其中84个同位SNPs大多数以外显子6～8、11～12、16～19和22。23为间隔并集中归位于第1～5、10、13～15、20～21、24外显子序列中，另外的22个非同位SNPs大多数以密集丛簇为特征而各自分布在两类序列3’端非编码序列中，但个别例外则单独归位于肾源类序列的第9外显子中。结论SNPs在人两类preproEGF多肽mRNA／eDNA序列中的生物信息学分布、特征和图示对于SNP与疾病或性状的相关性研究及课题设计颇具参考价值。

益气健脾法对结肠炎小鼠EGF及其mRNA表达的影响

目的:观察益气健脾法对结肠炎小鼠EGF及其mRNA表达的影响。方法:将BALB/C小鼠随机分为5组,分别为正常对照、模型、柳氮磺胺吡啶(SASP)、益气法及健脾法组,以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠形成结肠慢性炎症,用免疫组织化学、原位分子杂交方法观察EGF及其mRNA的表达。结果:模型组结肠组织EGF及其mRNA的表达与正常对照组比较无明显差别(均为P>0.05);益气及健脾法组结肠组织EGF及其mRNA的表达均高于模型组(均为P<0.05)。结论:增加EGF及其mRNA的表达是益气健脾法方药的作用机制之一。

汉族和布依族个体preproEGF基因DNA序列中3个新的单核苷酸多态性研究

目的探测鉴定汉族和布依族个体表皮生长因子前体基因(preproEGF)第20、21外显子及其内含子DNA序列区段中的单核苷酸多态。方法设计合成11条引物分别以布依族和汉族个体的基因组DNA为模板进行大片段PCR扩增和产物的DNA测序;以GenBank资料库相应的核酸序列为参照分析比较布依族、汉族个体和外国人种的单核苷酸多态分布。结果布依和汉族个体基因组样本的PCR扩增均得到一条长约4.5kb的DNA片段,其长度覆盖preproEGF基因的第20、21外显子及其内含子;汉族个体与布依族个体的DNA测序图显示:汉族个体有两个单核苷酸变体存在,一个位于preproEGF基因序列的第86380bp(C/T),另一个位于第84580bp(T/-);布依族个体也有一个单核苷酸变体存在,位于preproEGF基因序列的第84329bp(T/C);与GenBank的DNA序列对比分析发现:汉族个体的(C/T)变体是一个单核苷酸多态位点,迄今虽有报道见于欧洲和非洲撒哈拉民族人种,但在汉民族则未见报道;布依族个体的(T/C)变体也是一个单核苷酸多态位点,该位点的多态虽已有报道见于汉族和其它民族人种,但在布依民族则未见报道。结论本研究发现了汉族和布依族个体preproEGF基因的第20内含子区段存在3个新的单核苷酸多态,即86380bp(C/T)、84580bp(T/-)和84329bp(T/C),但汉族个体的84580bp(T/-)单核苷酸多态尚需进一步证实。