理中汤联合常规西药治疗对胃溃疡患者胃液表皮生长因子及胃黏膜表皮生长因子受体表达的影响

目的:探讨理中汤联合常规西药治疗对胃溃疡患者胃液表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及胃黏膜表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。方法:选取2020年10月—2021年11月湖北省松滋市中医院治疗的90例患者作为研究对象,按照随机数表法分为观察组和对照组,每组各45例。对照组患者使用常规西药治疗,观察组患者在对照组治疗基础上加用理中汤进行治疗,观察两组患者治疗效果、胃液EGF水平、胃黏膜EGFR水平(积分吸光度值、阳性细胞百分率)。结果:观察组患者疗效优于对照组,差异有统计学意义(χ^(2)=4.406,P<0.05)。治疗后,两组患者胃液EGF水平均高于治疗前,差异有统计学意义(t=3.047,P<0.05);治疗后,两组患者积分吸光度值、阳性细胞百分率均高于治疗前,差异有统计学意义(t=7.077、5.121,P<0.05)。结论:理中汤联合常规西药治疗对胃溃疡患者治疗效果更好,可促进胃液EGF与胃黏膜EGFR表达。

黄芪建中汤对胃溃疡大鼠血清炎症因子、胃黏膜表皮生长因子受体表达的影响

目的:观察黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠血清炎症因子、胃黏膜表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,探究黄芪建中汤改善脾胃虚寒型胃溃疡的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、奥美拉唑组和黄芪建中汤组。除正常组外,其余组大鼠用耗气破气法结合饥饱失常法以及冰醋酸法建立脾胃虚寒证胃溃疡大鼠模型。模型组继续隔日上午给予致虚药并当日禁食,共持续20 d;奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠在模型组的基础上每日下午使用相应药物治疗;正常组隔日上午及每日下午蒸馏水灌胃。观察各组大鼠形态改变,HE染色观察大鼠胃黏膜病理学改变,评估胃黏膜损伤指数(UI),ELISA法检测大鼠血清炎症因子水平,分别采用PCR、Western blot检测大鼠胃黏膜EGFR mRNA、蛋白表达。结果:黄芪建中汤组与奥美拉唑组大鼠胃黏膜损伤较模型组明显减轻,均可见轻度水肿,有少量炎性细胞浸润,腺体排布大致规整,未见明显溃疡。与正常组比较,模型组UI评分显著增加(P<0.01);与模型组比较,黄芪建中汤组和奥美拉唑组大鼠UI评分明显降低(均P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织EGFR mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与模型组比较,奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠胃黏膜组织EGFR mRNA及蛋白表达明显升高(均P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)水平显著升高(均P<0.01);与模型组比较,奥美拉唑组、黄芪建中汤组大鼠血清IL-1β、TNF-α及IL-6表达显著降低(均P<0.01)。结论:黄芪建中治疗脾胃虚寒型胃溃疡可显著改善胃黏膜损伤,其作用机制可能与黄芪建中汤上调EGFR mRNA及蛋白表达、降低炎症因子水平有关。

指环蛋白31对表皮生长因子受体表达的调控作用及其机制

目的:探讨指环蛋白31(RNF31)对表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,并分析RNF31对EGFR的调控机制。方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)法验证RNF31蛋白与EGFR蛋白的相互作用。HEK293T细胞分为空载体组(转染pcDNA3.1空载体)和RNF31组(转染RNF31-Flag质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中EGFR mRNA和蛋白表达水平。RNF31的泛素连接酶功能位点(RNF31C699/702S)和去泛素化酶结合位点(RNF31N84A Y93A)突变后,采用Western blotting法检测各组细胞中EGFR蛋白表达水平。HEK293细胞分为空载体组、RNF31组(转染RNF31-Flag质粒)、RNF31+EGFR抑制剂吉非替尼(Gefitinib)组和RNF31+EGFR抑制剂厄洛替尼(Erlotinib)组,采用Western blotting法检测各组细胞中EGFR及其下游信号通路蛋白表达水平。结果:Co-IP法检测,RNF31蛋白与EGFR蛋白存在相互作用。与空载体组比较,RNF31组细胞中EGFR mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与空载体组比较,转染RNF31C699/702S组和野生型RNF31组细胞中EGFR蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与RNF31组比较,转染RNF31N84A Y93A组细胞中EGFR蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与空载体组比较,RNF31组细胞中EGFR及其下游信号通路中核因子κB(NF-κB)、磷酸化信号传导与转录激活因子3(p-STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷酸化MAPK(p-MAPK)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),RNF31+Gefitinib组和RNF31+Erlotinib组细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、STAT3和MAPK蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:RNF31通过去泛素化酶结合结构域发挥去泛素化的作用,降低EGFR蛋白分子表面的泛素化水平,使EGFR蛋白降解速率减慢,同时高表达的EGFR可以激活其下游与细胞增殖和分裂相关蛋白的表达。

宫腔粘连患者子宫内膜中紧密连接蛋白1、表皮生长因子受体表达水平及其临床意义

目的 探讨宫腔粘连(IUA)患者子宫内膜中紧密连接蛋白1(ZO1)、表皮生长因子受体(EGFR)表达水平及其临床意义。方法 选取2020年2月至2021年2月株洲市中心医院收治的74例IUA患者作为观察组,根据IUA程度,将其分为轻度粘连组(n=17)、中度粘连组(n=38)、重度粘连组(n=19);选取同期35例因不孕症在同一医院住院行宫腔镜手术未发现异常的患者作为对照组。采用免疫组化法检测所有患者子宫内膜中ZO1和EGFR的表达情况;记录IUA患者临床资料,并分析其与ZO1、EGFR表达的关系;采用Spearman相关性分析IUA患者子宫内膜组织中ZO1和EGFR的关系。结果 观察组患者子宫内膜中ZO1阳性表达率(37.84%)低于对照组(82.86%),EGFR阳性表达率(71.62%)高于对照组(14.29%),差异具有统计学意义(P<0.05)。与轻度粘连组相比,中度粘连组、重度粘连组患者子宫内膜中ZO1阳性表达率降低,EGFR阳性表达率升高(P<0.05);与中度粘连组相比,重度粘连组患者子宫内膜中ZO1阳性表达率降低,EGFR阳性表达率升高(P<0.05)。IUA患者子宫内膜组织中ZO1、EGFR阳性表达率与患者刮宫次数、闭经、粘连性质有关(P<0.05);相关性分析结果显示IUA患者子宫内膜组织中ZO1和EGFR的阳性表达呈显著负相关(r=-0.498,P<0.05)。结论 IUA患者子宫内膜中ZO1呈低表达,EGFR呈高表达,二者之间呈显著负相关,共同促进IUA疾病的发生和病理进程。

结扎输出小管前后小鼠附睾表皮生长因子受体表达的变化

目的:观察结扎输出小管(EDL)前后小鼠附睾表皮生长因子受体(EGFR)的变化,探讨睾丸网液成分是否影响附睾EGFR的表达。方法:应用免疫组化和图像分析方法观察并比较EDL前、EDL后3d、7d、14d小鼠(n=7)附睾起始部和体部的结构和EGFR表达。结果:EDL后,小鼠附睾起始部和体部EGFR表达强度降低。起始部EGFR阳性面积自EDL后第3天明显减少,第7天较第3天有所增加,第14天恢复到正常水平。小鼠附睾体部EGFR阳性面积在结扎早期无明显变化,到EDL后第14天明显增加。EDL后第3天起,小鼠附睾起始部管壁和管腔面积显著减少。EDL后第14天附睾体部管壁和管腔面积减少。结论:睾丸网液的成分通过不同作用机制影响附睾起始部和体部的结构和EGFR的表达。

RNAi抑制鼻咽癌细胞表皮生长因子受体表达对细胞生长的影响

目的利用RNAi技术抑制鼻咽癌细胞5-8F表皮生长因子受体(EGFR)表达,观察细胞生长变化,探讨EGFR与鼻咽癌发生发展之间的相关性。方法利用体外转录法合成EGFR特异性siRNA,将其瞬时转染5-8F,收集转染后细胞总RNA和蛋白,利用RT-PCR和Westernblot法测定EGFR表达水平的变化,并检测EGFR表达抑制后细胞生长速度和生长周期的变化。结果合成的3对siRNA中,有一对使EGFRmRNA表达下降67．5％,蛋白表达下降77％。EGFR表达抑制后5-8F生长速度减慢,并诱导细胞周期停止在G1期。结论RNAi沉默EGFR表达可抑制鼻咽癌细胞生长,并诱导癌细胞停止在G1期．RNAi可作为探索鼻咽癌发生发展机制和基因治疗的有效工具。

吉非替尼对肺腺癌细胞增殖和表皮生长因子受体表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对肺腺癌A549细胞株增殖和EGFR表达的影响。方法不同浓度吉非替尼干预肺癌A549细胞24、48、72h后,倒置相差显微镜观察药物干预后细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞抑制率;钙依赖性磷脂结合蛋白(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)法和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测药物作用周期;免疫荧光检测EGFR蛋白表达情况;实时荧光定量PCR检测EGFRmRNA的表达情况。结果各干预组细胞出现空泡和颗粒,细胞碎片增多,且随吉非替尼剂量增加和干预时间的延长日益明显。吉非替尼明显抑制了A549细胞的生长,呈时间、剂量依赖性。吉非替尼组细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.01),S期细胞比例明显减少(P<0.01),G0/G1期细胞比例明显增加(P<0.01),EGFRmRNA和蛋白表达明显减弱(P<0.01)。结论吉非替尼显著抑制A549细胞生长,可能机制是促进凋亡、增强G0～G1期阻滞和进一步下调活化的EGFRmRNA和蛋白的表达。

头颈部癌表皮生长因子受体表达及对预后判断价值

[目的]探讨表皮生长因子受体(EGFR)在头颈部癌组织中表达情况及其对预后判断的价值。[方法]从2002年12月至2003年12月对91例经病理证实的初治头颈部癌(HNC),其中鼻咽癌(NPC)87例,头颈部鳞癌(HNSCC)4例的活检标本,应用免疫组织化学技术检测EGFR在癌组织中的表达情况。对有完善病历资料的61例HNC(其中NPC58例),探讨EGFR表达与临床病理特点及生存关系。[结果]在91例HNC中EGFR阳性74例,总表达率81.3%。87例NPC中阳性71例,表达率81.6%;4例HNSCC中阳性3例,表达率75%。61例HNC中,EGFR表达与性别、年龄、总分期、T分期、N分期无相关性。EGFR阳性组与阴性组3年总生存率(OS)、无病生存率(DFS)、无区域复发生存率(LRFS)、无远处转移生存率(DMFS)分别为73.5%、63.3%、71.4%、65.3%和90.0%、90.0%、90.0%、90.0%,但单因素分析其差异无显著性。在其中58例NPC中,EGFR表达与性别、年龄、总分期、T分期、N分期无相关性。EGFR阳性组和阴性组3年OS、DFS、LRFS、DMFS分别为72.3%、63.6%、72.2%、63.8%和100.0%、100.0%、100.0%、100.0%。在单因素分析中,两组3年DFS和DMFS有显著性差异(P<0.05),但在多因素分析未发现有显著性差异。[结论]EGFR在HNC中表达率较高,过度表达者呈现不良预后的趋势,但未获得统计学差异。

姜黄素抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖和表皮生长因子受体表达的研究

背景:姜黄素是一种有价值的植物抗癌物。有研究报道其能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡。目的:探讨姜黄素对胃癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法:①胃腺癌SGC7901细胞经常规培养,给予不同浓度的姜黄素处理,观察细胞生长情况,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞增殖,计算抑制率。②以不同浓度的姜黄素处理胃腺癌SGC7901细胞,采用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)检测表皮生长因子受体(EGFR)表达的变化。③以低浓度姜黄素或转化生长因子(TGF)-α处理胃腺癌SGC7901细胞,或以低浓度姜黄素和TGF-α同时处理细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖,计算抑制率。结果:①姜黄素可显著抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖,并随其浓度的增加而作用增强(P均<0.001)。当给予10、20、30μmol/L姜黄素作用72h时,抑制率分别为22.4%、46.9%和67.2%。②姜黄素使胃癌细胞EGFR表达显著下降。当给予10、20、30μmol/L姜黄素作用48h时,EGFR表达分别下降了10.5%、17.1%和30.0%。③当给予5μmol/L低浓度姜黄素处理细胞72h时,细胞增殖速度无明显变化;给予30μg/LTGF-α处理,细胞增殖速度加快;同时给予5μmol/L低浓度姜黄素和30μg/LTGF-α处理时,则TGF-α刺激的胃癌细胞增殖明显受抑制,抑制率为21.5%。结论:姜黄素能抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖,并能抑制其EGFR的表达,进而抑制TGF-α的促细胞增殖作用。

电针大鼠胃经后血清对其胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及浓度效应

目的:观察不同稀释度电针胃经后血清对大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及其浓度效应相关性。方法:实验于2005-07/08在湖南中医药大学针灸基础实验室完成。①选择健康SD大鼠48只,随机分为1/2稀释度血清组、1/5稀释度血清组、1/10稀释度血清组和1/20稀释度血清组,每组12只。②随机选4只大鼠作为血清供体,采用华兴邦动物(位谱并结合模拟人体经(法进行取(,足三里:膝关节后外侧,在腓骨小头下约5mm处。梁门:腹正中线与乳头线之间的中线上,脐上4寸。四白:眶下缘正中。电针刺激用G6805型电针仪,疏密波,电针频率疏波4Hz,密波20Hz,强度以肌肉微颤为度,电针时间30min。将针刺后大鼠行颈动脉取血,离心后吸取血清,将同组4只大鼠血清混合。③另8只大鼠不进行干预。利用链霉蛋白酶消化法分离大鼠胃黏膜细胞。④各组分别用1/2,1/5,1/10,1/20稀释度的血清孵育胃黏膜细胞,采用免疫细胞化学法检测胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达水平。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。1/2,1/5,1/10和1/20稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体均有较强表达,其中1/10稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的平均灰度值和面积百分比与1/2,1/5,1/20稀释度血清组比较差异有显著性眼平均灰度值:145.43±5.28,166.35±9.62,161.38±6.11,156.53±4.15;面积百分比:(21.62±2.08)%,(15.85±1.35)%,(18.07±1.28)%,(19.60±1.10)%,P<0.05～0.01演。结论:电针胃经后血清可增强胃黏膜细胞表皮生长因子受体的表达,并且存在一定的浓度-效应相关性。

创面修复中骨桥蛋白和表皮生长因子受体表达变化的实验研究

目的:探讨烧伤后创面组织愈合过程中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和表皮生长因子受体(epithelial growth fac-tor receptor,EGFr)表达顺序及分布规律。方法:应用免疫组化与原位杂交方法对临床15例烧伤患者创面愈合过程中OPN和EGFr表达变化进行检测,并计算阳性表达颗粒细胞数。结果:烧伤创面愈合中OPN和EGFr有明显规律性的表达变化,但两者的表达模式不尽相同。OPN的表达在伤后3 d达最高值,其阳性颗粒主要分布于真皮层成纤维细胞的胞浆中。EGFr的表达在伤后7 d达峰值,其阳性颗粒主要分布于表皮基底细胞胞浆及真皮成纤维细胞的胞核内。结论:烧伤可以诱导皮肤创面组织中OPN和EGFr的表达,其表达具有时相与部位分布特征。这表明OPN和EGFr作为调控因子参与了临床创面修复过程,合理调控其表达变化有助于临床创面修复。

老年晚期非小细胞肺癌循环肿瘤细胞表皮生长因子受体表达与酪氨酸激酶抑制剂疗效的相关性

目的探讨老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)外周血中循环肿瘤细胞(CTC)的表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)靶向治疗疗效及预后的相关性。方法通过流式细胞技术(FCM)检测CTC的EGFR表达水平,根据中位数分为高表达组和低表达组,患者都给予TKI治疗至少1个月后与TKI疗效及预后关系进行分析。结果 EGFR表达水平在不同病理类型间有统计学差异(P<0.05);在不同性别,分期及功能状态(PS)评分间无统计学差异(P>0.05)。EGFR高表达组治疗有效率(50%)及疾病控制率(70%)均明显高于低表达组(35.7%,53.5%,均P<0.05)。在TKI治疗有效的老年患者中,治疗前后EGFR表达水平有统计学差异(P<0.05);在TKI治疗无效的老年患者中,治疗前后EGFR表达水平无统计学差异(P>0.05)。EGFR高表达组中位生存期(21个月)及无疾病进展期(11个月)均明显长于低表达组(10个月,4个月,均P<0.05);1年生存率(77.8%),2年生存率(38.1%)及3年生存率(22.2%)均明显高于低表达组(63.3%,31.2%,3.3%,均P<0.05)。结论老年晚期NSCLC外周血CTC的EGFR高表达患者对EGFR-TKI靶向治疗反应有效率较高,生存期较长。

表皮生长因子受体表达水平对西妥昔单抗及其介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀伤肺腺癌A549细胞的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)表达水平对西妥昔单抗及其介导的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)对肺腺癌A549细胞杀伤的影响。方法以肺腺癌A549细胞作为靶细胞,NKTm细胞作为效应细胞,将pEGFR-EGFP质粒用核转染技术导入A549细胞,免疫组织化学法检测转染组与野生组A549细胞表面EGFR蛋白的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8法检测西妥昔单抗以及西妥昔单抗介导的ADCC作用对转染后A549细胞与野生组A549细胞的体外杀伤率。结果免疫组织化学结果显示,野生组A549细胞EGFR表达呈弱阳性,而转染后的A549细胞EGFR表达呈强阳性。西妥昔单抗介导的ADCC作用对转染后高表达EGFR的A549细胞具有更强的杀伤作用(P<0.05),而西妥昔单抗单独作用时,转染组与野生组间的杀伤率差异无统计学意义(P>0.05)。结论细胞表面EGFR蛋白的表达水平能够影响西妥昔单抗介导的ADCC作用对肺腺癌A549细胞的杀伤,而对西妥昔单抗本身的杀伤作用无影响。

三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌临床病理特征差异及与雌激素受体β和表皮生长因子受体表达的关系

目的比较三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在临床病理特征及部分免疫组织化学指标表达上的差异,并探讨这些免疫组织化学指标的表达与三阴乳腺癌临床病理特征及预后的关系。方法 2010年1月至2013年12月北京协和医院收治的经组织病理确诊的乳腺癌患者共863例,其中三阴乳腺癌患者135例,非三阴乳腺癌患者728例。分析三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌患者在发病年龄、病理类型、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期、是否有淋巴结转移、是否累及乳头以及手术方式等临床病理特征方面的差异。通过免疫组织化学法检测135例三阴乳腺癌患者与经单纯抽样法选取的135例非三阴乳腺癌患者中雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、P53、Ki67的表达,分析上述指标在两类乳腺癌中的表达差异。进一步通过单因素生存分析探讨三阴乳腺癌患者的预后相关因素。结果三阴乳腺癌中浸润性导管癌的比例高于非三阴乳腺癌(86.7%比65.2%,P<0.001),发病年龄低于非三阴乳腺癌[(46.0±10.6)岁比(51.0±13.3)岁,P<0.05];三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在淋巴结转移、临床分期、肿瘤大小、分化程度、手术方式方面差异亦有统计学意义(P<0.05);三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌在肿瘤累及乳头的比例差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学结果显示,三阴乳腺癌中ERβ阳性表达率较非三阴乳腺癌显著降低(63.7%比75.6%,P<0.05),而EGFR阳性表达率显著升高(62.2%比33.3%,P<0.05);P53、Ki67在三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与非三阴乳腺癌相比,三阴乳腺癌的总体生存率(overall survival,OS)和无复发生存率(relapse-free survival,RFS)更低(P<0.05)。三阴乳腺癌单因素生存分析结果显示,ERβ阴性表达与EGFR阳性表达均与三阴乳腺癌的不良预后相关(P<0.05)。结论相较于非三阴乳腺癌,三阴乳腺癌有明显不同的临床病理特征:发病年龄较低、原发肿瘤体积较大、分化程度低、易发生淋巴结转移、ERβ阳性表达率较低、EGFR阳性表达率较高、OS及RFS较低。ERβ和EGFR可能成为重要的三阴乳腺癌预后判断指标。

人参皂苷Rh2对肝癌细胞表皮生长因子受体表达水平的影响

目的研究人参皂苷Rh2对肝癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,以期为人参皂苷Rh2的抗肿瘤机制提供实验证据。方法采用实时定量荧光PCR、Western blot、MTT法、荷瘤小鼠模型研究人参皂苷Rh2对肝癌细胞EGFR的表达影响,以及对肝癌细胞的生长的抑制作用。结果人参皂苷Rh2对肝癌细胞EGFR的表达具有明显的抑制作用,并且这种抑制作用具有质量浓度依赖性;人参皂苷Rh2可在体外及体内抑制肝癌细胞的增殖。结论人参皂苷Rh2抑制肝癌细胞的增殖有可能是通过EGFR通路发挥作用。

动脉成形术对血管表皮生长因子受体表达影响的免疫组化研究

目的：观察动脉成形术对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达的影响，探讨ＥＧＦＲ与再狭窄的关系。方法：于兔右颈总动脉成形术前及术后２４，４８，７２ｈ，７ｄ和１４ｄ，取实验动脉段用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＥＧＦＲ的表达。结果：正常颈总动脉中膜未见ＥＧＦＲ阳性表达；动脉成形术后２４ｈ，中膜部分ＳＭＣ显示ＥＧＦＲ阳性表达；４８和７２ｈ中膜ＥＧＦＲ阳性表达均进一步增加；７和１４ｄ动脉中膜ＥＧＦＲ阳性表达的ＳＭＣ均较７２ｈ显著减少，但新生内膜中增殖的ＳＭＣ均显示大量ＥＧＦＲ阳性表达。阳性染色以胞膜处最明显。结论：动脉成形术使血管ＳＭＣＥＧＦＲ表达显著增加，再狭窄形成过程中ＳＭＣ增殖与ＥＧＦＲ有关。

电针胃经穴对应激大鼠血清胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的作用

目的研究电针应激性胃溃疡大鼠胃经穴后血清对胃黏膜细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法采用水浸束缚法制作应激性胃溃疡大鼠模型,52只大鼠随机分为空白组、模型组、模型血清组、胃经血清组和胆经血清组,利用链霉蛋白酶消化法分离大鼠胃黏膜细胞,用100ml/L血清孵育,采用免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应法检测胃黏膜细胞EGFR的表达水平。结果胃经血清组和胆经血清组[其吸光度比分别为(1.2272±0.0813)%;(0.9640±0.0387)%]大鼠胃黏膜细胞EGFR呈现较强表达,与空白组、模型组和模型血清组[其吸光度比分别为(0.6860±0.0594)%;(0.7104±0.0457)%;(0.8516±0.0409)%]比较差异有显著性(P<0.01),其中胃经血清组大鼠胃黏膜细胞EGFR表达最为强烈,与胆经血清组比较差异有显著性(P<0.01)。结论电针应激性胃溃疡大鼠胃经穴后的血清能明显上调大鼠胃黏膜细胞EGFR的表达,并且存在经脉-脏腑的特异性联系。

慢性烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道上皮细胞损伤及表皮生长因子受体表达的影响

目的探讨慢性烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道上皮细胞损伤及表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法56只雄性Wistar大鼠随机分为7组(每组8只):慢性哮喘组(A组),慢性哮喘+烟曲霉孢子吸入1周(B组)、3周(C组)和5周(D组)组,慢性哮喘+生理盐水吸入组(E组),卵白蛋白(OVA)致敏生理盐水激发组(F组),OVA致敏生理盐水激发+烟曲霉孢子吸入组(G组)。测定大鼠基础气道阻力和气道阻力变化率,ELISA法测定BALF中表皮生长因子(EGF)及转化生长因子α(TGF-α)浓度,肺组织切片HE染色观察气道上皮细胞损伤脱落程度,过碘酸雪夫染色(PAS)观察气道上皮杯状细胞增生程度,免疫组化染色测定气道上皮细胞EGFR表达强度,免疫印迹测定肺组织EGFR蛋白表达。结果B、C、D组大鼠BALF中EGF[(51.72±8.54)、(68.12±7.85)、(86.24±9.12)pg/mL]、TGF-α[(55.26±9.30)、(75.58±11.56)、(96.75±14.66)pg/mL]、脱落上皮/气道上皮[(11.25±3.12)%、(26.45±5.56)%、(28.50±7.50)%]、杯状细胞/上皮细胞面积比值[(16.42±5.24)%、(22.64±6.82)%、(36.38±9.21)%]、气道上皮细胞EGFR阳性信号累积光密度(IOD)值(82±15、120±19、165±21)、肺组织EGFR蛋白表达IOD值(0.91±0.26、1.61±0.52、2.52±0.78)均高于A、E、F及G组(P<0.05或<0.01)。C和D组大鼠气道阻力变化率[(61.91±5.26)%、(84.69±6.38)%]均高于A、E、F及G组(P值分别<0.05或<0.01)。气道上皮细胞EGFR表达IOD值与脱落上皮/气道上皮(%)及杯状细胞/上皮细胞面积比值(%)呈正相关(r=0.692,P<0.01;r=0.657,P<0.01)。结论慢性烟曲霉暴露加重哮喘大鼠气道上皮细胞损伤,上调哮喘大鼠气道上皮细胞EGFR表达,促进杯状细胞增生,加重气道高反应性。

角质形成细胞的培养及其表皮生长因子受体表达

目的:在成功分离人皮肤角质形成细胞的基础上,观察表皮生长因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达情况。方法:实验于2006-3/10在北京大学深圳医院中心实验室进行。采用dispase Ⅱ-trypsin两步消化法获取表皮基底层细胞,用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液进行培养。小鼠皮肤成纤维母细胞的预处理:向对数生长期的小鼠皮肤成纤维母细胞培养液中加入丝裂霉素C至终浓度为4mg/L,37℃下培养4h,弃去培养液,用D-Hank’s液洗3次,加入浓度为0.25g/L的胰蛋白酶消化,分离出细胞,离心(200g,5min),用黄素腺嘌呤二核苷酸培养液悬浮细胞,计数,以5.0×104/cm2的密度种于培养皿内,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。角质形成细胞的培养:将分离的角质形成细胞悬浮在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中,以2.0×104/cm2的密度接种在前1天经丝裂霉素C处理的小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层上,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。24h换液,以后每3d换1次液。采用免疫细胞化学的方法检测表皮生长因子受体的表达,采用复合逆转录聚合酶链反应检测角质形成细胞中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果:采用dispaseⅡ消化法分离了真皮和表皮,获得较多的角质形成细胞,可以避免真皮成纤维细胞的污染。人皮肤角质形成细胞在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中培养5d可见明显的集落,约10d可长满单层。免疫细胞化学显示表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,复合逆转录聚合酶链反应显示表皮生长因子受体mRNA有明显的表达。结论:用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液可以较好地培养原代人皮肤角质形成细胞,表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,这些结果为与表皮生长因子受体相关的皮肤病(如银屑病)的研究奠定了基础。