人Arresten基因真核表达质粒的构建

目的构建人Arresten基因的真核表达质粒。方法设计人Arresten基因引物序列,取100 mg新鲜的胎盘组织提取总RNA,采用RT-PCR法扩增Arresten基因。将获取的Arresten基因片段和p IRES2-EGFP质粒分别用Bam HⅠ和EcoRⅠ作双酶切,将酶切产物与质粒连接,转化感受态大肠杆菌DH-5α进行真核表达。采用酶切、菌液PCR及测序的方法检测Arresten基因真核表达质粒构建的正确性。结果经双酶切鉴定,得到1条约700 bp的片段和1条与p IRES2-EGFP空载体(5.3 kb)相近的片段,符合Arresten基因重组质粒大小。经重组质粒的菌液PCR鉴定,7组菌液均扩增出700 bp大小的扩增片段,均为阳性克隆。测序结果示,Arresten基因mRNA与GenBank中人Arresten序列完全一致。结论成功构建了人Arresten基因的真核表达质粒。