表皮生长因子受体通路底物8疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能机制

目的：探索表皮生长因子受体通路底物8（epidermal growth factor receptor substrate 8，EPS8）疫苗对乳腺癌细胞的抑制效应及其可能的机制。方法：Western blotting检测EPS8蛋白在小鼠乳腺癌4T1细胞株中的表达。通过基因重组、表达和纯化等技术制备特异性的小鼠源性EPS8，以EPS8蛋白为靶点制备抗肿瘤疫苗并免疫BALB/c小鼠，间接ELISA测定免疫前后不同时间小鼠血清内抗EPS8抗体效价；流式细胞术检测免疫前后的脾T淋巴细胞亚群比例。建立乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠模型并接种EPS8疫苗，接种佐剂作为对照，比较2组荷瘤小鼠的生存期、肿瘤体积、肿瘤重量，计算EPS8疫苗抑瘤率；流式细胞术检测荷瘤小鼠脾T淋巴细胞亚群比例，LDH法检测其细胞毒性T细胞（CTL）杀伤率。结果：EPS8蛋白在乳腺癌4T1细胞株中高表达。成功构建的EPS8蛋白疫苗免疫小鼠后产生抗EPS8抗体，且随着免疫次数的增加，小鼠体内抗EPS8抗体滴度呈上升趋势。乳腺癌4T1细胞接种于经EPS8疫苗或佐剂免疫后的小鼠后，与佐剂对照组相比，EPS8疫苗组小鼠生存期显著升高[中位生存时间：44（38~50） vs 37 （34~40） d; t=2.477, P=0.043]，肿瘤质量显著降低[（2.21±0.35）vs（3.31±0.88）g；t=3.574，P=0.009]，EPS8疫苗的抑瘤率为33.23%。EPS8疫苗组小鼠脾CD4＋T比例和CD4＋/CD8＋比值均显著高于佐剂对照组（P〈0.001），EPS8疫苗组CD4＋CD25＋Treg/CD4＋T细胞的比值显著低于佐剂对照组（P〈0.001）。效靶比为20〖DK〗∶1时，EPS8疫苗组CTL对靶细胞的杀伤活性即显著高于佐剂对照组[（19.05±4.41）% vs （13.36±3.10）%；t=2.263，P=0.040] 。结论：EPS8疫苗不仅具有诱导小鼠产生体液免疫应答的功能，还能够降低荷瘤小鼠体内Treg细胞比例，激活机体内T细胞免疫功能；EPS8疫苗可抑制肿瘤的生长、有效延长荷瘤小鼠的生存期。

表皮生长因子受体通路底物8、硫酸乙酰肝素酶以及基质金属蛋白酶在急性白血病的表达及其相关性研究

目的通过分析急性白血病(AL)患者骨髓液表皮生长因子受体通路底物8(EPS8)、硫酸乙酰肝素酶(HPSE)以及基质金属蛋白酶(MMP)表达水平,评估3种指标联合检测对患者病情及预后的预测价值。方法将2017年10月—2018年10月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院血液科治疗的60例患者分为两组:急性白血病患者为实验组(AL组)和缺铁性贫血患者为对照组,每组30例。收集每组患者骨髓标本,应用RT-PCR法检测EPS8、HPSE以及MMP-2的mRNA表达水平,应用流式细胞检测技术检测骨髓细胞表面EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平。通过比较两组EPS8、HPSE以及MMP-2的表达水平,应用多因素Logistic回归分析进一步探讨急性白血病完全缓解与未缓解组的因子表达及其临床相关意义。结果急性白血病患者骨髓液中EPS8、HPSE以及MMP-2因子表达水平与对照组存在显著差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,MMP-2、EPS8是随访1年患者是否完全缓解的影响因素(P<0.05)。结论急性白血病患者骨髓EPS8、HPSE以及MMP-2表达水平升高,且联合检测患者骨髓白血病细胞中EPS8、MMP水平能较好地评估AL患者的临床转归及预后。

C激酶底物蛋白、人类表皮生长因子受体2与胃癌患者临床病理特征的相关性

目的探讨豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(MARCKS)和人类表皮生长因子受体2(HER2)与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法2018年3月到2021年3月,选择我院收治的60例胃癌患者作为观察组,选择同期60例良性胃部肿瘤患者作为对照组,应用免疫组化法检测两组受检者MARCKS和HER2的表达水平,并分析观察组织中MARCKS、HER2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组患者MARCKS、HER2阳性率均明显高于对照组(P<0.05);观察组中,MARCKS、HER2阳性与阴性患者性别、年龄、肿瘤大小比较无明显差异(P>0.05),而TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度与MARCKS和HER2表达呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中,MARCKS、HER2蛋白表达升高,且MARCKS和HER2蛋白表达水平与胃癌患者的TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度呈正相关,可为胃癌的临床诊断和预后评估提供参考价值。

乳脂球表皮生长因子8通过调控Toll样因子受体4/核因子-κB信号通路抑制深静脉血栓形成

目的探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)抑制大鼠深静脉血栓形成(DVT)及对Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法健康雄性SD大鼠90只, 随机数字表法分为假手术组、模型组、MFG-E8组, 每组30只, Reyers法制备大鼠DVT模型, MFG-E8组大鼠每日给予rhMFG-E8 20 μg/kg尾静脉注射, 连续7 d, 假手术组和模型组大鼠采取尾静脉注射等量生理盐水。采用苏木精-伊红(HE)染色观察下腔静脉血栓形成及内容物组织病理学变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白细胞TLR4、NB-κBp65(p65)表达, 酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-10表达水平。组间比较采用t检验。结果模型组可见腔静脉内广泛血栓形成, 且随时间延长逐渐增高, 第3天达到高峰, 血栓湿重[(23.6±2.42) mg], 干重[(4.32±0.39) mg], 而MFG-E8组腔静脉内血栓明显减少, 第3天血栓湿重[(14.37±1.85) mg], 干重[(3.02±0.27) mg], 与模型组比较, 差异有统计学意义(t=9.582、8.667, P<0.05);模型组TLR4表达术后第3天达高峰(1.39±0.15), MFG-E8组TLR4表达显著低于模型组(0.51±0.03, t=18.192, P<0.05);模型组NF-κBp65表达术后第3天达高峰(1.25±0.13), MFG-E8组NF-κB p65表达显著低于模型组(0.57±0.04, t=15.810, P<0.05);模型组TNF-α表达术后第3天达高峰[(358.1±12.36) pg/ml], MFG-E8组TNF-α表达显著低于模型组[(205.12±7.33) pg/ml, t=33.665, P<0.05];模型组IL-1β表达术后第3天为(52.73±5.33) pg/ml, MFG-E8组IL-1β表达显著低于模型组[(30.14±2.97) pg/ml, t=11.708, P<0.05];模型组IL-4表达术后第3天达低峰[(28.11±4.34) pg/ml], MFG-E8组IL-4表达显著高于模型组[(48.23±4.90) pg/ml, t=9.720, P<0.05];模型组IL-10表达术后第3天达低峰[(13.82±2.53) pg/ml], MFG-E8组IL-10表达显著高于模型组[(30.87±3.42) pg/ml, t=12.674, P<0.05]。结论 MFG-E8可能通过下调TLR4/NF-κB信号通路, 降低促炎细胞因子TNF-α、IL-1β水平, 提高抑炎细胞因子IL-10、IL-4水平来抑制大鼠深静脉血栓形成。

葫芦素B对三阴乳腺癌HCC1806细胞增殖凋亡及Wnt信号通路的影响

三阴乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)三者蛋白表达均阴性的乳腺癌,占乳腺癌总数的15%,具有高侵袭性和易转移复发的特点[1]。由于TNBC目前无有效的放疗、内分泌及针对HER-2的分子靶向治疗,使得寻找包括中药提取物在内的新的干预措施显得至关重要。

miR-3074通过靶向EPS8基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-3074在宫颈癌细胞系(SiHa、HCC94、C33A、HeLa)和正常宫颈上皮细胞H8中的表达。选取miR-3074表达最低的细胞系,分别转染对照模拟物(对照组)和miR-3074模拟物(miR-3074组)。CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活力和侵袭能力。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-3074的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3074与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3074对靶基因表达的影响。结果miR-3074表达水平较高的宫颈癌患者总生存期长于miR-3074表达水平较低的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。与H8细胞比较,宫颈癌细胞系中miR-3074表达降低(P<0.05),miR-3074表达最低的细胞系是HCC94(P<0.01)。对照组和miR-3074组miR-3074表达分别为1.03±0.17和13.49±2.66,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组HCC94细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01)。miR-3074能作用于EPS8mRNA的3′非翻译区(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组EPS8基因表达显著降低(P<0.01)。结论miR-3074在宫颈癌细胞系中表达下调,miR-3074能够抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向抑制EPS8表达有关。

核桃青皮提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及EGFR/MAPK信号通路的影响

目的:探讨核桃青皮提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)筛选干预乳腺癌MCF-7细胞的核桃青皮提取物合适浓度。将乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、阳性对照组、核桃青皮提取物低浓度组、核桃青皮提取物高浓度组和核桃青皮提取物高浓度+EGFR激动剂(NSC228155)组。采用CCK-8和集落形成实验检测各组细胞增殖情况;采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用蛋白质印迹法检测各组细胞中增殖、凋亡及EGFR/MAPK信号通路相关蛋白表达水平。结果:当核桃青皮提取物浓度≥20μg/mL时,细胞增殖率显著降低,故选择20、40μg/mL分别为核桃青皮提取物低浓度组、高浓度组的核桃青皮提取物处理浓度。与空白对照组相比,阳性对照组、核桃青皮提取物低浓度组和高浓度组细胞增殖率、细胞集落形成数量,细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平,磷酸化EGFR(p-EGFR)/EGFR、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)/胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK和磷酸化c-Jun氨基端蛋白激酶(p-JNK)/c-Jun氨基端蛋白激酶(JNK)蛋白比值均显著降低;TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与核桃青皮提取物低浓度组相比,核桃青皮提取物高浓度组细胞增殖率、细胞集落形成数量,CyclinD1、PCNA和Bcl-2蛋白表达水平,p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-JNK/JNK蛋白比值均降低;TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。核桃青皮提取物高浓度组与阳性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。与核桃青皮提取物高浓度组相比,核桃青皮提取物高浓度+NSC228155组细胞增殖率、细胞集落形成数量,CyclinD1、PCNA和Bcl-2蛋白表达水平,p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-JNK/JNK蛋白比值均升高;TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:核桃青皮提取物可能通过抑制EGFR/MAPK信号通路抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡。

Eps8在恶性血液肿瘤细胞株中的表达分析

目的探讨表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在人类恶性血液肿瘤细胞株中的表达情况及其差异。方法分别利用实时荧光定量RT-PCR法及Western blot法检测6种恶性血液肿瘤细胞株中Eps8 mRNA及蛋白的表达情况。结果 ARH-77细胞株中Eps8 mRNA为健康者外周血单个核细胞(PBMNCs)中的(1.278 6±0.188 0)倍(P=0.008),Raji细胞株中为PBMNCs中的(0.011 0±0.001 0)倍(P=0.000)。EPS8蛋白在KG1a、ARH-77细胞株中高表达,在其他4种细胞株及健康正常人PBMNCs中均未见Eps8蛋白表达。结论本研究首次发现了Eps8在部分恶性血液肿瘤细胞株中高表达,为恶性血液肿瘤治疗新靶点的筛选提供了理论依据。

顺铂作用下卵巢癌细胞株CP70中Eps8表达变化研究

目的:观察肿瘤相关抗原Eps8在卵巢癌细胞株A2780、CP70、SKOV3、SKOV3/DDP中的表达情况,筛查出Eps8高表达细胞株CP70。观察顺铂(DDP)作用下CP70细胞中Eps8在蛋白水平表达的变化,探讨Eps8在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法:用实时荧光定量PCR法检测Eps8在卵巢癌细胞株中mRNA的表达水平,用Western blot法检测Eps8蛋白表达水平,筛选出高表达株CP70。用不同浓度DDP作用于CP70细胞24h、48h,用Western blot法检测Eps8在蛋白水平的变化。结果:随着药物浓度的增加及作用时间的延长,Eps8在蛋白水平的表达明显升高。结论:顺铂处理CP70细胞后,Eps8的蛋白表达量升高,且和DDP作用的时间及剂量有依赖性,即DDP可诱导CP70细胞中Eps8表达的上调。因此推测,Eps8在卵巢癌顺铂耐药形成机制中发挥重要作用。

柔红霉素对KG1a细胞增殖及肿瘤相关抗原Eps8表达的影响

本研究旨在观察柔红霉素(DNR)对KG1a细胞株的杀伤抑制作用及新型肿瘤相关抗原表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在KG1a细胞中的表达,在mRNA和蛋白水平探讨DNR作用于KG1a后对Eps8表达的影响。不同浓度DNR作用于KG1a细胞24、48和72 h,用台盼蓝拒染色法检测药物对KG1a细胞的杀伤抑制率,用实时荧光定量PCR法检测Eps8 mRNA转录水平的变化和Western blot法观察Eps8蛋白表达变化。结果表明:随着药物浓度(0.1,0.4μg/ml)的增加及作用时间(24,46,72 h)的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率显著提高(r=0.983,P<0.01);不同DNR药物浓度作用于KG1a 24、48和72 h后,Eps8表达水平以DNR作用浓度和时间依赖方式明显下降(r=0.979,P<0.05)。结论:随药物浓度的增加和作用时间的延长,DNR对KG1a细胞的杀伤抑制率提高,使Eps8表达下降,推测降低Eps8的表达可能是DNR抑制KG1a细胞增殖的机制之一。

Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察

目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽,用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分子的结合力,筛选出稳定结合的改造表位E1-9V(ILDDIEFFV)、E1-1Y9V(YLDDIEFFV)。用经典肽结合力实验检测各改造表位与HLA-A*0201分子的亲和力。制备天然表位(E1)、E1-9V、E1-1Y9V特异性杀伤性T淋巴细胞(CTLs)。用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测并比较E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7细胞、沉默Eps8的MCF-7细胞(MCF-7/shRNA)和抗HLA-A2抗体预孵育的MCF-7细胞(MCF-7/A2Ab)的杀伤率,E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251、K562、IM-9细胞的杀伤率,E1、E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率。结果 E1-9V、E1-1Y9V均可与HLA-A*0201分子B、F对接口袋的氨基酸形成稳定氢键。肽结合力实验结果显示E1-9V、E1-1Y9V与HLA-A*0201均具有高亲和力,且高于天然表位E1,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7/shRNA、MCF-7/A2Ab细胞杀伤率明显低于MCF-7细胞,P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251细胞杀伤率明显高于K562、IM-9细胞(P均<0.05)。E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率显著高于E1、E1-9V特异性CTLs,P均<0.05。结论 Eps8抗原改造表位E1-9V、E1-1Y9V与天然表位E1相比具有更高的HLA-A*0201分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且E1-1Y9V抗肿瘤免疫效应强于天然表位E1。

胰岛素／胰岛素样生长因子信号转导通路与胰岛β细胞凋亡

胰岛素／胰岛素样生长因子信号转导通路调控胚胎组织的生长、发育及出生后各种组织细胞的增殖和凋亡。完整的胰岛素样生长因子1受体-胰岛素受体底物信号途径为胰岛β细胞生存所必需;磷脂酰肌醇3激酶激活是重要的抗胰岛β细胞凋亡机制,而丝裂原活化蛋白激酶激活可能为诱导胰岛β细胞凋亡的机制之一。核因子κB在胰岛素／胰岛素样生长因子-1的抗凋亡机制中所起的作用,尚无充足证据做出结论。

EPS8与肿瘤关系的研究进展

1 EPS8的发现,结构特点及其作用 表皮生长因子受体通路底物8（EPS8）是细胞内信号通路底物。1993年Fazioli在过表达表皮生长因子受体（EGFR）的小鼠成纤维细胞（NIH-3T3）中,克隆出EGFR受体通路中受到酪氨酸磷酸化的底物,通过构建这些底物的cDNA文库,发现第8号克隆含有一段1.6 kb片段,

miR-4727-5p通过调控EPS8L3表达抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移

目的 探讨微小RNA-4727-5p(miR-4727-5p)靶向表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3,EPS8L3)抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的分子作用机制。方法 选取2019年2月至2021年9月在南通大学附属肿瘤医院(南通市肿瘤医院)乳腺外科手术切除的38例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,以及乳腺癌细胞系MB-MDA-468、SKBR3、MCF-7、T-47D及正常乳腺上皮细胞MCF-10A,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测乳腺癌组织和细胞系中miR-4727-5p的表达。将重组质粒miR-4727-5p或空载质粒转染至T-47D细胞,分别命名为miR-4727-5p组和对照组(Ctrl组)。用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和划痕愈合试验分别分析T-47D细胞的增殖和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-4727-5p与EPS8L3 mRNA非翻译区的靶向关系。qRT-PCR和Western blot检测EPS8L3基因和EGFR信号通路蛋白p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1的表达。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织miR-4727-5p表达显著降低(P<0.01)。与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系中miR-4727-5p表达显著降低(P<0.05)。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组T-47D细胞增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,EPS8L3是miR-4727-5p的靶基因。与Ctrl组比较,miR-4727-5p组EPS8L3基因表达水平明显降低(P<0.01),p-EGFR、p-Raf1、p-MEK1蛋白表达水平明显降低。结论 miR-4727-5p通过靶向抑制EPS8L3基因表达,干扰EGFR信号通路转导,从而抑制乳腺癌T-47D细胞的增殖和迁移能力。

EPS8L3对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响及作用机制

目的探讨表皮生长因子受体激酶底物8样蛋白3(EPS8L3)对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响,并分析可能的作用机制。方法采用RNA干扰下调乳腺癌MAD-MB-231细胞的EPS8L3表达水平,分为shRNA1-EPS8L3组、shRNA2-EPS8L3组、shRNA-NC组(空白对照)。采用qRT-PCR法检测细胞EPS8L3、Rac1 mRNA表达情况,Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,划痕实验检测干扰前后乳腺癌细胞的迁移能力,侵袭实验检测干扰前后乳腺癌细胞的侵袭能力。结果与shRNA-NC组相比,shRNA1-EPS8L3组和shRNA2-EPS8L3组细胞EPS8L3 mRNA、Rac1 mRNA表达水平均降低(均P<0.05),细胞迁移、侵袭能力均减弱(均P<0.05),上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达上调(均P<0.05),间质细胞标志物波形蛋白、纤黏蛋白表达下调(均P<0.05)。结论EPS8L3可能通过影响Rac1表达调节乳腺癌细胞EMT过程和迁移、侵袭,提示EPS8L3与乳腺癌发生、发展相关,可能为乳腺癌诊治提供新的靶点。

血管生成素1对大鼠血-脊髓屏障功能的增强作用

目的:探讨血管生成素1(Ang1)对大鼠血-脊髓屏障功能的增强作用,及表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)在此增强过程的作用。方法:分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型。以Ang 1处理的SCMEC为Ang1处理组,未处理的为对照组。于Ang1处理后于不同时间点(0 h、4 h、8 h、12 h)测定各组跨内皮电阻(TEER)值,比较2组Eps8蛋白的表达水平。再将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Angl组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang 1处理,比较不同组间Eps8蛋白的表达水平与TEER值。结果:Ang1处理组4 h、8 h、12 h SCMEC的TEER值均明显高于对照组(P<0.05),Eps8蛋白的表达水平均高于对照组(P<0.05)。Eps8 siRNA组SCMEC中Eps8蛋白的表达水平明显低于对照siRNA组(P<0.05),而与Eps8 siRNA+Ang1组间差异无统计学意义(P>0.05);Eps8 siRNA组不同时间点TEER值均明显低于对照siRNA组(P<0.05);Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组间TEER值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Ang1可增强大鼠血-脊髓屏障的功能,其机制可能与Eps8有关。

海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞的抑制作用及机制研究

本文阐述了海兔素(Aplysin)对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨了其可能的作用机制。分别采用CCK-8法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定不同剂量海兔素对SK-BR-3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并以Western blot测定SK-BR-3细胞中EGFR、Akt及ERK表达水平和磷酸化水平。结果发现,20、30、40、45、50、55、60 mg/L海兔素处理SK-BR-3细胞24 h后,细胞的生长增殖明显受到抑制,呈量效依赖性,其IC25和IC50值为分别为29.4和33.7 mg/L;IC25和IC50剂量海兔素可明显诱导细胞凋亡,并下调SK-BR-3细胞EGFR、Akt及ERK的磷酸化蛋白表达水平,但是不影响总蛋白表达水平。表明海兔素对人乳腺癌SK-BR-3细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与海兔素抑制细胞中EGFR蛋白磷酸化,进而阻断下游效应分子Akt和ERK的活化有关。

血管生成素1通过调节Eps8的表达增强大鼠血-脊髓屏障功能

目的探讨表皮生长因子受体底物蛋白8（Eps8）在血管生成素1（Ang1）增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用。方法分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞（SCMEC），建立体外血-脊髓屏障模型。（1）SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点（0h、4h、8h、12h）测定跨内皮电阻（TEER）值，Westernblotting检测Eps8蛋白的表达水平，以未用Ang1处理者为对照。（2）将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA＋Ang1组、Eps8siRNA组及Eps8siRNA＋Ang1组，分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理。Westernblotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值，荧光分光光度计测定荧光素钠（Na-F）、伊凡斯兰（ESA）的通透率，纤维型肌动蛋白（F—actin）荧光染色观察细胞骨架变化。结果（1）Ang1处理后4h、8h、12hSCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）Eps8siRNA组SCMECEps8的表达水平较对照siRNA组降低约75％，差异具有统计学意义（P〈0．05）；而Eps8siRNA＋Ang1组较Eps8siRNA组Eps8的表达水平无明显改变。Eps8siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低，对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而Eps8siRNA＋Ang1组与Eps8siRNA组相比，TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变。对照siRNA＋Ang1组SCMEC经Ang1处理4h后,F—actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强。而Eps8siRNA＋Ang1组则无此改变。结论Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血．脊髓屏障的分布,进而影响大鼠血,脊髓屏障功能。

2型糖尿病合并骨质疏松大鼠胰岛素信号通路相关基因表达的变化

雌激素减少和2型糖尿病对骨代谢的损害是非常明确的，两者对骨代谢的影响部分可能是通过减少骨质中胰岛素受体底物1、2（IRS-1、IRS-2）及胰岛素样生长因子1（IGF-1）起作用的。但雌激素减少是否会加剧2型糖尿病对骨代谢损害的作用仍不明确。因此，本研究旨在确定卵巢切除后长期高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导的2型糖尿病大鼠的骨密度（BMD）是否较单纯卵巢切除大鼠或2型糖尿病大鼠降低更为明显、卵巢切除的2型糖尿病大鼠的胰岛素信号通路中重要分子（如IRS-1、IRS-2和IGF-1）的表达是否会明显降低。