肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域及神经表皮生长因子样蛋白-1 检测在M型磷脂酶A2受体阴性膜性肾病中的临床意义

目的探讨肾组织血小板反应蛋白1型结构7A域(THSD7A)及神经表皮生长因子样蛋白-1(NELL1)检测在M型磷脂酶A2受体(PLA2R)阴性膜性肾病中的诊断及治疗指导意义。方法选取浙江中医药大学附属杭州市中医院2014至2021年肾穿刺活检确诊为PLA2R阴性膜性肾病共116例,通过免疫组织化学方法检测肾组织THSD7A及NELL1的阳性表达情况,比较各组间临床病理特征及治疗与预后。结果116例PLA2R阴性膜性肾病中THSD7A阳性23例,NELL1阳性9例,其中两者双阳性1例。THSD7A阳性较阴性者IgG4阳性率更高(P=0.010);膜性肾病Ⅰ期占比更少,Ⅱ期占比更多(P=0.002);基底膜增厚更明显(P=0.034)。NELL1阳性较阴性者C1q及IgG2的阳性率更低(P=0.029,P=0.001);炎细胞浸润更多(P=0.033);多部位沉积物更少(P=0.001);基底膜增厚更不明显(P<0.001);不典型膜性肾病比例更低(P=0.010)。继发因素分析显示THSD7A阳性者有1例确诊为乙状结肠癌,NELL1阳性者均未发现恶性肿瘤。生存分析提示THSD7A阳性组肾病复合缓解率(完全缓解或部分缓解)显著低于阴性组(P=0.016),而NELL1阳性组肾病复合缓解率显著优于阴性组(P=0.015),两指标单一阳性组间比较显示NELL1单一阳性组肾病复合缓解率显著优于THSD7A单一阳性组(P<0.001)。结论THSD7A及NELL1阳性膜性肾病更倾向于原发性膜性肾病,且无恶性肿瘤提示价值,但对膜性肾病患者的预后具有一定的预测价值。

人胰岛素样生长因子1受体β结构域蛋白的原核表达及活性检测

目的构建人胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)β亚基胞外结构域(ED)和胞内激酶(PKD)结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD融合蛋白,并检测其活性。方法用PCR方法从乳腺cDNA文库中扩增IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体。重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,最后用GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知蛋白表皮生长因子受体2驱动的细胞运动调节蛋白(MEMO)的相互作用。结果构建得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,测序后与目的序列一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期位置相符的目的蛋白,并经过Western blot检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD两个融合蛋白,GST pull-down证明蛋白GST-IGF1Rβ-PKD可以和MEMO相互作用。结论成功克隆GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD基因,并获得活性良好的GST-IGF1Rβ-ED和GST-IGF1Rβ-PKD蛋白。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1、E-Cadherin和EGFR在胃癌中的表达和临床意义

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌中的表达和及其与临床病理特征的相关性。方法选取50例胃癌患者作为研究对象,并选取正常胃黏膜组织50例作为对照。用免疫组化方法检测两组患者卵巢组织中的LRIG1、E-Cadherin和EGFR的表达,分析LRIG1、E-Cadherin和EGFR的阳性表达率在胃癌患者不同临床病理特征中的差异。采用spearson秩相关分析LRIG1,E-Cadherin和EGFR的阳性表达率的相关性。结果胃癌组的LRIG1、E-Cadherin的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组,胃癌组的EGFR的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组。胃癌中LRIG1、E-Cadherin和EGFR阳性表达率与临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、组织学类型无关(P>0.05)。LRIG1、E-Cadherin和EGFR在胃癌患者中的阳性表达率具有相关性,共同调控参与胃癌的发生和发展。结论 LRIG1、E-Cadherin在胃癌中低表达和EGFR在胃癌中高表达,与胃癌的进展和转移相关。

锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型作为糖皮质激素受体下游基因在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的 验证锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型（ZMYND8）与糖皮质激素受体（GR）之间调控关系,探讨ZMYND8表达量与前列腺癌各临床病理特征之间的关系.方法通过软件预测及在敲除GR基因的前列腺癌细胞PC3中用Western blot实验方法检测ZMYND8表达量,分析GR与ZMYND8之间的关系,并在80例前列腺癌及非癌组织的组织芯片中使用免疫组织化学的方法,对ZMYND8蛋白表达量与前列腺癌各病理特征之间的关系进行分析.结果 ZMYND8 基因受GR基因调控,ZMYND8在癌组织及转移癌中表达上调（免疫组织化学评分：非癌组织为5.700±2.054,癌组织为7.340±2.163,P=0.001,转移癌组织为6.710±2.369,非转移癌组织为8.110±1.595,P=0.028）,差异有统计学意义.结论 ZMYND8的表达受上游基因GR的调控,ZMYND8基因在前列腺癌临床上表现为促癌基因.

基于G蛋白偶联雌激素受体介导的EGFR/PI3K途径探讨四物汤对MC3T3-E1细胞增殖的影响

目的探讨四物汤通过G蛋白偶联雌激素受体(GPER)介导的表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)途径影响小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)的增殖效应及其分子机制。方法将40只SD雌性大鼠随机分为5组:正常组,雌二醇组,四物汤高、中、低剂量组,每组8只。以雌二醇药物血清为阳性对照,用高、中、低剂量四物汤药物血清干预MC3T3-E1细胞,以MTT细胞增殖实验检测各药物血清干预24 h对MC3T3-E1细胞增殖的影响;Western blot及免疫荧光技术检测高剂量四物汤对MC3T3-E1细胞EGFR、PI3K、cyclin B1、cyclin D1蛋白表达情况的影响;并应用GPER激动剂G1、拮抗剂G15,EGFR抑制剂AG1478,PI3K抑制剂LY294002进一步检测高剂量四物汤影响MC3T3-E1细胞增殖的作用途径和分子机制。结果与正常血清组比较,高、中、低剂量四物汤药物血清均能促进MC3T3-E1细胞的增殖(P<0.01),加入G1可使高剂量四物汤促增殖作用提高(P<0.01),而加入G15、AG1478、LY294002使高剂量四物汤的促增殖作用减弱(P<0.01)。Western blot和免疫荧光结果均显示,四物汤药物血清增加MC3T3-E1细胞EGFR、PI3K、cyclin B1、cyclin D1的蛋白表达,与正常血清组比较差异有统计学意义(P<0.01),G1同时干预时上述蛋白表达量较高剂量四物汤增加(P<0.01),分别加入G15、AG1478、LY294002后上述蛋白的表达量较高剂量四物汤组降低(P<0.01或P<0.05)。结论四物汤对小鼠MC3T3-E1细胞增殖有明显的促进作用,其作用机制可能为GPER介导的EGFR/PI3K信号通路的传导。

肉芽肿小叶性乳腺炎导管病理学特征

目的:肉芽肿小叶性乳腺炎患者多伴发乳腺导管扩张症且导管内含大量油脂样分泌物。本研究以HE染色、免疫组织化学染色及免疫荧光染色为途径探讨肉芽肿小叶性患者乳腺导管的病理学特征,并为其病因学及临床治疗提供线索。方法:对东直门医院病理诊断为肉芽肿小叶性乳腺炎的28例患者的未扩张导管、扩张导管、病变小叶及肉芽肿灶进行HE染色及表皮生长因子样结构含黏蛋白激素样受体1(epidermal growth factor-like modulecontaining mucin-like hormone receptor-like 1,F4/80)、淋巴细胞分化簇(cluster of differentiation,CD)11c的免疫组织化学和免疫荧光染色,分析其病理学特征并进行巨噬细胞计数。结果:免疫组织化学染色示:扩张大导管及小叶周围可见CD11c阳性的巨噬细胞聚集性表达,被完全破坏乳腺小叶结构的肉芽肿及未扩张的导管周围表达不明显。扩张大导管、被完全破坏乳腺小叶结构的肉芽肿、未完全破坏乳腺小叶结构的肉芽肿可见F4/80阳性的巨噬细胞聚集性表达,未扩张的导管周围表达不明显。免疫荧光染色示:F4/80、CD11c共标志阳性的细胞在扩张导管、病变小叶周围聚集性表达,在无扩张的导管及肉芽肿病灶周围无表达。结论:肉芽肿小叶性乳腺炎的发病机制可能为乳腺导管巨噬细胞的吞噬功能障碍激发的IV型变态反应。