日本血吸虫成虫表膜抗原的诊断效果及疗效考核价值

[目的 ]探讨日本血吸虫成虫表膜抗原 (Sj MAg)检测日本血吸虫病患者的特异性和敏感性及考核疗效价值。 [方法 ]采用 Sj MAg- EL ISA检测治疗前、后不同时期血吸虫病患者血清中特异性 Ig G、 Ig G4及健康人、并殖吸虫、华支睾吸虫及囊尾蚴病患者血清中的交叉抗体。 [结果 ]Sj MAg的敏感性和特异性与可溶性虫卵抗原(Sj SEA)比较 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;用 Sj MAg- EL ISA检测治疗后 12个月患者血清中 Ig G的阴转率为80 .0 % ,显著高于 SEA- EL ISA的 43.3% ,而检测 Ig G4的阴转率为 93.3% ,显著高于 Sj SEA- EL ISA的 6 0 % ,检测治疗后 2 4个月患者血清中 Ig G和 Ig G4的阴转率分别达 92 .9%和 97.6 %。 [结论 ]Sj MAg- EL ISA检测日本血吸虫病具有与 Sj SEA- EL ISA相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。

用抗虫体表膜抗原抗体测定犬细粒棘球绦虫粪抗原

利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接免疫组化方法对E g成虫表膜蛋白进行组织定位。利用双抗体夹心ELISA方法检测感染E g的犬粪抗原。ELISA结果表明E g成虫表膜抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体,抗体不与多头绦虫和泡状带绦虫抗原反应;Western blotting结果表明E g成虫表膜抗原与原头蚴、不成熟E g有共同蛋白成分。免疫组化结果证实虫体表膜蛋白分布在虫体表皮。该抗原抗体系统能检测到感染后13d的犬细粒棘球绦虫。结果表明该E g成虫表膜抗原抗体系统可用于诊断犬细粒棘球绦虫感染。

日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原组分及其保护性免疫力研究

目的 探讨日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原(SjHmAg)的免疫特性,观察其抗日本血吸虫(Sj)的保护效果。方法 用SDS-PAGE电泳技术分析SjHmAg蛋白组分,酶联免疫电转移印迹(EITB)分析感染兔血清(IRS)和正常兔血清(NRS)对SjHmAg的识别;用完整SjHmAg免疫昆明鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条Sj尾蚴,42天后剖杀,计数虫数及肝卵数。结果 用SDS-PAGE电泳获得SjHmAg主带7条,IRS主要能识别SjHmAg23、33和63kDa等10个抗原组分;间接ELISA测其抗体滴度>1:6400,与对照组相比,SjHmAg免疫小鼠的减虫率为16.2％,减卵率为55.4％。结论 用SDS-PAGE获得了不同分子量的SjHmAg蛋白,EITB鉴别出具有免疫活性的蛋白分子,且SjHmAg对Sj攻击感染及雌虫生植似有一定的抗性。

血吸虫表膜抗原分子的研究进展

血吸虫表膜是宿主免疫系统与血吸虫虫体接触的界面 ,组成复杂 ,种类繁多 ,包括蛋白、多肽、糖蛋白、糖脂、脂肪酸等。表膜相关抗原对宿主的免疫、致病起重要作用。本文就已知的几个重要的血吸虫表膜抗原分子的结构。

检测循环表膜抗原考核血吸虫病治疗效果的实验观察

本实验结果证明血吸虫感染免经吡喹酮治疗后循环表膜抗原逐渐下降。用斑点—ＥＬＩＳＡ检测结果表明：接种４条及１０条尾蚴的家兔于治后３个月，接种５０条及１００条尾蚴的家兔于治后６个月循环表膜抗原转为阴性．据此认为检测循环表膜抗原考核治疗效果较检测抗休具有阴转快的优点，值得在病人中进一步验证。

抑制血吸虫排卵对实验感染兔循环表膜抗原检测的影响

目的 :了解循环表膜抗原阳性反应与血吸虫雌虫排卵的关系。方法 :用新西兰兔 15只 ,各经肤接种日本血吸虫尾蚴 2 50条 ,于感染后不同时间口服丙烯基硫脲 ,对比感染前、后逐周血中用斑点 - EL ISA法测出的循环表膜抗原。结果 :第一组兔感染 19d后开始口服丙烯基硫脲 2 95-590 mg/ d,每周连续喂药 3d直至感染后第 8wk,循环表膜抗原始终为阴性。第二组兔于第 4 6d起服同剂量 ,感染后 6wk时斑点 - EL ISA呈阳性反应持续 2 wk。第三组对照兔于感染后 6wk开始亦出现持续 2 wk的斑点 - EL ISA阳性反应。结论 :循环表膜抗原阳性反应与雌虫排卵密切相关。

血吸虫病患者血清中循环25kD表膜抗原的检测

采用细胞杂交瘤技术获得一株血吸虫成虫抗原的单克隆抗体SM 38-3。其靶抗原为成虫表膜,免疫球蛋白型为1gG 2a,能识别血吸虫分子量为25k D的表膜蛋白抗原表位。该单克隆抗体纯化后标记过氧化物酶,用于Dot-ELISA测定慢性血吸虫病人血清115份,阳性反应103份,阳性率为89.6％;测定急性病人血清89份,阳性反应85份,阳性率为95.5％;测定141份正常人血清,阳性反应2份,假阳性率为1.4％。与血吸虫肠相关抗原的检测比较,结果阳性率与抗原滴度均无明显差别。

细粒棘球绦虫成虫表膜抗原特异性基因的筛选及克隆

为筛选细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,Eg）表膜抗原基因或具有诊断性的特异性基因,提取Eg成虫表膜抗原,经ELISA、Western blot对该抗原的免疫学特性进行初步研究。以Eg成虫表膜抗原高免鼠血清为探针,筛选Eg成虫cDNA文库,将阳性噬菌斑的PCR产物和pGEM-T载体连接,转染到DH5α,对得到的重组子进行测序,并进行同源性分析。ELISA检测显示,表膜抗原免疫鼠诱导产生了特异性抗体,Western blot鉴定该抗体能识别Eg成虫表膜抗原、原头蚴、Eg发育不成熟、Eg发育成熟抗原。筛选出6个阳性克隆,DNA片段大小在1~2kb之间。对阳性克隆进行同源性分析,结果与EgP-29mRNA同源性为99%,与Eg14-3-3蛋白mRNA同源性80%-99%。筛选Eg成虫cDNA文库所获得的基因,证明了Eg虫体表膜抗原的存在,有望成为犬细粒棘球绦虫的诊断抗原以及犬抗细粒棘球绦虫的候选基因。

血吸虫表膜抗原的生化研究进展

血吸虫抗原能诱发宿主的保护性免疫反应。近几年来,在虫体表膜保护性抗原的生化研究及疫苗的研制方面取得了显著进展。本文主要通过以下几方面进行综述:(1)表膜结构与标志;(2)表膜受体与粘附;(3)表膜抗原性质;(4)抗原基因克隆与疫苗。

华支睾吸虫表膜抗原制备方法的比较

国内对华支睾吸虫免疫诊断的报道较多,而表膜抗原在使用中效果更好。本文试用了几种方法制备华支睾吸虫表膜抗原,并就此进行检测比较,同时作扫描及透射电镜的观察。

用噬菌体多肽库筛选日本血吸虫表膜抗原的模拟表位

为探索可用于诊断的模拟表膜抗原。采用纯化的兔抗表膜抗原IgG作探针 ,免疫筛选噬菌体随机十二肽库 ,经 3轮生物淘洗后 ,随机挑选 30个噬菌体克隆 ,用ELISA检测其与筛选抗体的特异性结合 ,选择两个阳性克隆进行DNA序列测定 ,并用斑点ELISA比较检测正常人和日本血吸虫病患者血清各 10份。结果显示 ,随机挑选的 30个克隆中有 9个噬菌体克隆与筛选的抗体有特异性的结合反应。DNA测序结果显示 ,两个阳性噬菌体克隆 (携带的抗原表位 )所演绎的氨基酸序列与GenBank已知的氨基酸序列无同源性。

噬菌体表达短肽模拟日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原表位的研究

目的 从噬菌体随机 12肽库免疫筛选日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原 (SjHmAg)的模拟短肽分子 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法 以纯化的SjHmAg免疫血清IgG为配基免疫筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并测序 ;用混和噬菌体克隆皮下免疫小鼠 3次 ,分别在 0、2、4周进行 ,第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴 ,4 2d后剖杀冲虫 ,观察减虫及减卵效果。结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到有效的富集 ,产出率为第一轮的 2 10倍 ;随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA鉴定 ,有 2 1个克隆能与SjHmAg免疫血清特异性反应 ;自动测序仪测序 ,结果发现它们的外源肽具核心序列 (STRKD) ;与对照组相比 ,混和噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 16 .2 % ,减卵率为 5 9.0 %。结论 利用噬菌体展示技术可获得模拟SjHmAg短肽 ,这些短肽分子能诱导部分抗日本血吸虫保护力。

弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和抗原性分析

目的试验分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分及其抗原性。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析弓形虫速殖子表膜蛋白的组分和用弓形虫病人阳性血清及兔抗弓形虫表膜抗原血清识别硝酸纤维膜载体上的速殖子表膜抗原的免疫反应靶位。结果弓形虫速殖子表膜抗原的独特蛋白区带分子为16和17kDa,弓形虫病人特异性抗血清识别的速殖子表膜抗原的免疫反应位点为16kDa,免抗血清识别出64,35,32,26,16kDa等8个位点。结论弓形虫速殖子表膜蛋白存在特异的抗原决定簇和可被特异性抗体识别的受体,证明速殖子表膜蛋白具有较好的抗原性,此对于弓形虫病的免疫学诊断具有重要的意义。

弓形虫表膜抗原SAG1的研究及应用进展

刚地弓形虫是一种原生动物,被其感染后引起一系列的病理变化和症状。刚地弓形虫表膜抗原SAG1是一类重要的膜蛋白,研究发现其表膜抗原SAG1在制备单克隆抗体、疫苗和临床快速诊断等方面都有着重要的作用。本文主要就弓形虫表膜抗原SAG1的分子生物学信息、SAG1在机体内的免疫应答和应用研究进行综述。

华支睾吸虫表膜相关抗原重组表达载体的构建

目的 通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并构建 2 0 8kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA2 0 8)重组表达载体 ,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选 ,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifscan、NCBIConservedDo mainSearch等程序对其进行结构域分析。将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX - 4T - 1和PcDNA3上 ,构建的PGEX - 4T - 1-CSTA2 0 8、PcDNA3-CSTA2 0 8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。结果 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 ,完整阅读框含 5 5 5个碱基 ,编码 184个氨基酸 ,理论分子量为 2 0 8kDa ,理论pI为 4 33。序列分析表明 ,华支睾吸虫CSTA2 0 8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,CSTA2 0 8具有完整的钙结合蛋白保守功能域。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 。

细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性分析

【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为2.54mg.mL-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG、IgM和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG、IgM和IgA的P/N值分别为4.9、3.2和6.4。未检测到特异性IgE。Wenstern-blot检测结果显示,抗血清与原头蚴粗提虫体蛋白、细粒棘球绦虫成虫表膜蛋白、表膜糖抗原有效识别。IFA显色结果显示糖抗原在细粒棘球绦虫虫体表膜中有表达。【结论】经蛋白酶K消化后提取的细粒棘球绦虫表膜糖抗原具有良好的的免疫原性和免疫反应性,有望用于包虫病的诊断和免疫。

抗伊氏锥虫表膜单克隆抗体的研究 Ⅱ.用抗伊氏锥虫表膜抗原McAb检测循环抗原

利用抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb双抗体夹心法,检测了48匹健康马(骡)、5匹人工接种伊氏锥虫马(骡),9匹先用锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻毒马(骡)共278份血清的循环抗原(CA),同时用常规间接ELISA检测了相应的循环抗体(CAb)。结果: 278份血清的CA、CAb阳性率无显著差异,但其阳性检出时机不完全吻合;人工接种马(骡)的CA阳性检出率高于CAb,于接虫后经1-2个CA高峰而死,濒死前4/5动物的CA呈现阳性,免疫马(骡)在攻虫前CA即可呈现阳性,多经1-3个CA高峰后逐渐转阴;人工接种马(骡)的CA水玉高于免疫马(骡),二次攻虫后的CA水平高于首次。

弓形虫表膜P30抗原的研究进展

弓形虫表膜Ｐ３０抗原的研究进展泰山医学院寄生虫学教研室泰安２７１０００李永华，陈秀春沈继龙（审校）在最初的弓形虫疫苗研究中，涉及较多的是利用温度或辐射等理化因素定向选育弓形虫“变异虫株”减毒全虫疫苗，如Ｗａｌｄｅｌａｍｅｄ（１９８３）的热敏变异株ｔ－...