发酵豆酱中蛋白酶高产细菌的筛选及所产蛋白酶的酶学特性研究

从发酵豆酱中分离出四种产蛋白酶细菌,采用Folin-phenol法测定其蛋白酶活力,筛选出产酶活力最强的菌株,并进行酶学特性的研究。结果表明:该酶的最适反应温度为55℃;最适作用pH为8.5;该酶具有较好的稳定性;在pH6.0～8.5条件下稳定;NH+4对该蛋白酶有明显的激活作用,Pb2+、Fe3+则对其表现出强烈的抑制作用;在55℃、pH8.0条件下,该酶解反应的表观米氏常数为0.056%。

细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶(TPase)活性测定方法的研究

β-胸苷在乙酰短杆菌胸苷磷酸化酶的作用下,反应生成胸腺嘧啶。该文利用紫外分光光度法建立了细胞酶促转化过程中胸苷磷酸化酶活性的测定方法。β-胸苷在胸苷磷酸化酶作用下生成胸腺嘧啶,由于β-胸苷与胸腺嘧啶在300 nm处均有吸光度,反应后通过测量反应液300 nm处的吸光度,可测定反应中生成的胸腺嘧啶的量,从胸腺嘧啶的生成量的多少来判断胸苷磷酸化酶的活性。研究结果表明,在5%菌体浓度、10 mmol/Lβ-胸苷、0.1 mol/L的磷酸缓冲液(pH 6.9)中,37℃反应20 min,即可准确测定胸苷磷酸化酶的活性。利用上述方法测定胸苷磷酸化酶活性,活性能达80%,高于前人报道的方法所测得的酶活性。其中,乙酰短杆菌来源的胸苷磷酸化酶的表观米氏常数Km为11.9 mmol/L。