亲和毛细管电泳法研究锌离子与人血清白蛋白的结合反应机制

建立了研究金属离子与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)相互作用的亲和毛细管电泳(Affinity capillary electrophoresis,ACE)方法。生理条件下,构建配体(Zn2+)-受体(HSA)相互作用模型,以N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)为内标物,基于Scatchard方程,依据有效淌度的变化,通过非线性模拟方程计算Zn2+-HSA结合反应的表观结合常数KB,定量表征了Zn2+-HSA相互作用的强度,并解析电泳谱图获得了Zn2+-HSA结合反应为一快平衡体系的结论。结果表明,建立的ACE方法简捷、有效,Zn2+-HSA相互作用的强度与Zn2+浓度之间存在明显的量效关系。

重金属Cr(Ⅵ)与血清蛋白质组的结合反应性能研究

利用亲和毛细管电泳(Affinity capillary electrophoresis,ACE)方法,基于位点结合模型,构建配体(Cr(Ⅵ))-血清蛋白质组受体(Fetal bovine serum,FBS)结合反应方程,研究重金属离子Cr(Ⅵ)和血清蛋白质组的结合反应性能。结果表明,组学条件下,Cr(Ⅵ)与FBS中高丰度组分白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、转铁蛋白(Bovine apo transferrin,bATF)、免疫球蛋白(Bovine IgG,IgG)之间形成Cr髩-蛋白质络合物;结合反应均为快平衡反应;依据有效淌度的变化,通过结合方程测得结合反应的表观结合常数KCr(Ⅵ)-bATF=1.27×104L.mol-1、KCr(Ⅵ)-IgG=4.91×104L.mol-1、KCr(Ⅵ)-BSA=8.98×104L.mol-1;同时根据实验数据非线性模拟结果表明,Cr髩与FBS中高丰度组分发生相互作用的强度与Cr(Ⅵ)浓度之间存在明显的量效关系。本文有关工作可为重金属离子-蛋白质络合物结合性能等生物无机化学研究内容提供参考。

金属元素组与血清白蛋白的竞争结合反应性能研究

利用亲和毛细管电泳(Affinity capillary electrophoresis,ACE)法研究金属元素组和血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)的竞争结合反应性能。基于位点结合模型,构建双金属组[Zn2+,Cu2+]与血清白蛋白结合反应模型,建立多元金属组与生物大分子竞争结合的理论方程,测定结合参数并解析动力学机制。结果表明,金属元素组[Zn2+,Cu2+]与BSA发生竞争结合反应形成配合物Zn2+-BSA和Cu2+-BSA。依据有效淌度变化,通过建立的理论方程非线性拟合竞争结合反应的平均表观结合常数KZn2+-BSA=4.01×104L·mol-1、KCu2+-BSA=7.75×104L·mol-1。结合反应均为快平衡反应,Cu2+对Zn2+离子的结合作用有明显拮抗作用。分析ACE谱显示配合物的峰高与配体结合能力大小、配合物稳定性之间存在量效关系。

硫酸阿托品拮抗次乌头碱毒性的荧光光谱研究

目的研究次乌头碱(HA)与牛血清白蛋白(BSA)非共价结合特征,并进一步探讨硫酸阿托品(AT)对HA与BSA结合的影响。方法模拟人体生理pH条件,应用荧光光谱及紫外光谱技术,确定HA与BSA作用方式、作用力类型及AT对它们结合的影响。结果 HA通过动态猝灭机制导致BSA荧光猝灭。HA与BSA表观结合常数K2b98K=1.10×102、K3b10K=3.18×105L.mol-1,结合位点数n298K=0.59、n310K=1.24;结合距离4.64 nm;主要作用力为疏水力;HA与BSA的结合反应是一个高温自发过程;HA与BSA结合后色氨酸残基所处微环境疏水性增强。AT使HA与BSA的Kb和n均减小。结论 HA与BSA作用形成一种超分子。AT能降低二者的结合程度,通过减少HA在生物体内的积累,加快代谢,发挥解毒作用。

有机酸类化感物质的血清蛋白输运机制研究

利用亲和毛细管电泳(Affinity Capillary Electrophoresis,ACE)建立有机酸类化感物质与血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)结合反应的分析方法。模拟典型有机酸类化感物质与血清白蛋白的结合反应,构建配体(有机酸)-受体(BSA)相互作用体系,采用ACE法研究不同浓度柠檬酸(Citric Acid,CA)/磺基水杨酸(Sulfosalicylic acid,SA)与BSA的结合反应机制并比较不同有机酸作用机理异同。结果表明,有机酸类化感物质CA/SA与BSA发生结合反应形成复合物CABSA和SA-BSA。依据有效淌度变化,理论方程非线性拟合结合反应的表观结合常数KCA-BSA=(1.82±0.11)×104L·mol-1、KSA-BSA=(2.12±0.12)×104L·mol-1,结合反应均为快平衡反应。相关工作阐明了血清蛋白输运有机酸类化感物质的生理作用,为化感物质与生物大分子结合反应的深入研究提供相应理论参考。