神经前体细胞表达下调蛋白9在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测神经前体细胞表达下调蛋白(NEDD)9在胰腺癌和癌旁组织的表达情况,分析其与胰腺癌进展、预后的关系。方法收集2005年8月-2010年12月于无锡市第三人民医院治疗的98例胰腺癌患者的癌和癌旁组织样本,应用免疫组化技术检测患者胰腺癌和癌旁组织中NEDD9的表达,并对NEDD9表达与胰腺癌临床病理特征的关系进行分析。计数资料组间比较采用χ2检验。结果胰腺癌组织中NEDD9的高表达率明显高于癌旁组织(57.1%vs 41.8%,χ2=4.592,P=0.032)。胰腺癌组织NEDD9的表达与患者TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移相关(χ2值分别为45.02、20.41、36.21,P值均<0.001);与性别、年龄、肿瘤部位、有无肝转移无相关性(P值均>0.05)。结论 NEDD9可能在胰腺癌的发展和侵袭转移中起着一定的作用,有可能作为评估胰腺癌预后的分子指标和治疗靶点。

核仁素表达下调对C_2C_(12) 细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义。方法选取2017年6月~2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-146b-5p和miR-134的表达水平,并分析两者的表达水平与临床病理特征的相关性。结果miR-146b-5p和miR-134在观察组中的相对表达量均低于对照组(P<0.05);miR-146b-5p的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、无静脉浸润和TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)相关(均P<0.05);miR-134的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、有肝硬化、TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)和无肿瘤包膜相关(均P<0.05)。结论肝癌组织中,miR-146b-5p和miR-134表达水平下调,可能参与肝癌的发生和发展,与肝癌临床恶性表型密切相关。

神经元表达下调基因9在人脑胶质瘤中的表达

目的探讨神经元表达下调基因9(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated,NEDD9)在人脑胶质瘤组织中的表达情况。方法采集人脑胶质瘤术中切除组织标本36例作为试验组(低级别胶质瘤组14例,高级别胶质瘤组22例),重型颅脑损伤内减压切除的正常脑组织10例作为对照组。采用逆转录聚合酶链反应法测定NEDD9 mRNA的转录水平,同时采用免疫组织化学SP法检测人脑胶质瘤组织中NEDD9蛋白的表达情况。结果 NEDD9蛋白阳性表达率在正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤中呈明显上升趋势,低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组NEDD9蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组NEDD9 mRNA表达量明显高于对照组,高级别胶质瘤组NEDD9 mRNA表达量明显高于低级别胶质瘤组(P<0.05)。结论 NEDD9在神经胶质瘤中的转录和蛋白表达水平显著增高,且表达率及表达水平随肿瘤恶性程度的加重而增高。

胱硫醚-β-合成酶在SHR脑组织表达下调

内源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）由L-半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase，CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase，CSE）及半胱氨酸转移酶催化作用下产生，它通过中枢机制参与调节心血管活动。高血压时脑内局部H2S浓度的改变可能参与了高血压的发病，自发性高血压大鼠（SHR）脑内CBS表达未见报道。本实验检测CBS在SHR脑组织的分布及表达，探讨其与高血压发病的关系。

细胞信号转导抑制因子-1表达下调对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的大量研究表明,内皮细胞的凋亡参与了动脉粥样硬化的发生与发展。另外有研究表明,细胞信号转导抑制因子-1(SOCS1)的表达下调可促进某些细胞的凋亡。然而,SOCS1表达下调是否与内皮细胞的凋亡有关,目前未见相关报道。为此,本研究利用RNA干扰沉默SOCS1的表达,然后观察内皮细胞凋亡的变化,探讨SOCS1与动脉粥样硬化之间的关系。方法 (1)培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cel,HUVEC),利用RT-PCR和Western Blotting检测SOCS1在HUVEC中的表达。(2)设计并化学合成4对靶向SOCS1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。(3)将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25、50、75、100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光显微镜下观察转染效率,得出有最佳转染效率的浓度。(4)HUVEC根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48小时后收获细胞。利用RT-PCR和Western Blotting,筛选出1对对SOCS1沉默效率最高的siRNA。(5)将筛选出来的沉默效率最高的siRNA和阴性对照siRNA以有最佳转染效率的浓度转染细胞,转染24小时后分为4组:①阴性对照siRNA;②阴性对照siRNA+缺氧20小时/复氧4小时;③SOCS1 siRNA;④SOCS1 siRNA+缺氧20小时/复氧4小时。最后,利用Western Blot检测Caspase3和Bax的表达,利用流式细胞仪检测凋亡。结果 (1)siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率。(2)4对siRNA干扰后,SOCS1的表达水平与四个对照组相比明显下调(P<0.05),其中siRNA-3的沉默效率最高(P<0.05)。(3)对HUVEC进行RNA干扰和缺氧复氧处理后,SOCS1 siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与其它3组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复氧组的Caspase3、Bax蛋白表达水平与阴性对照siRNA组相比明显升高(P<0.05),阴性对照siRNA+缺氧复氧组的Caspase3蛋白表达水平与SOCS1 siRNA组相比明显升高(P<0.05),而阴性对照siR-NA组与SOCS1 siRNA组之间的Caspase3蛋白表达水平差别无统计学意义(P>0.05),SOCS1 siRNA组的Bax蛋白表达水平与阴性对照siRNA组相比明显升高(P<0.05)。(4).对HUVEC进行RNA干扰和缺氧复氧处理后,SOCS1siRNA+缺氧复氧组的凋亡率与其它3组相比明显升高(P<0.05)。阴性对照siRNA+缺氧复氧组的凋亡率与阴性对照siRNA组、SOCS1 siRNA组相比明显升高(P<0.05)。而阴性对照siRNA组与SOCS1 siRNA组之间的凋亡水平差别无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)RNA干扰能有效抑制SOCS1在内皮细胞中的表达。(2)沉默SOCS1表达可加剧缺氧复氧导致的内皮细胞凋亡。

心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下表达下调基因的分离和鉴定

目的:对成年大鼠心肌成纤维细胞(CF)受血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激后下调基因表达谱进行筛选及分析。方法:以受AngⅡ刺激CF为驱动方,未刺激CF为实验方,进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库。经斑点杂交筛选文库后将部分阳性克隆测序及进行同源性分析。结果:共获得17条下调表达基因,分别与胞内信号转导、转录抑制、纤维沉积和细胞骨架重构相关,并克隆到4条新基因表达序列标签(EST)。结论:SSH有效地克隆了成年大鼠CF受AngⅡ刺激后下调表达基因,对这些基因的研究将有助于阐明心肌改建的分子机制。

ZEB1过表达及E-cadherin、mR-NA-200s表达下调是未分化子宫内膜癌的特征性表现

未分化子宫内膜癌是一种侵袭性极强的高级别子宫内膜癌，被定义为一种由中等大小或大细胞构成的、完全缺乏腺样结构、缺乏或伴极少（〈10％）神经内分泌分化的肿瘤，约占子宫内膜癌的9％。目前，由于病理医师对未分化子宫内膜癌的认识不足，使其经常不能被诊断，或者将其归入FI-GO3级子宫内膜样腺癌中。

神经前体细胞表达下调因子8类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的观察神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）类泛素修饰抑制因子MLN4924对单核巨噬细胞白血病细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1与U937细胞、THP-1细胞、Mo7e细胞和RAW264.7细胞作用24 h,采用MTT法检测细胞存活。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1与RAW264.7细胞作用24 h,用Western蛋白质印迹法检测NEDD8类泛素化修饰的主要底物cullin蛋白表达水平。MLN4924 0.5μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果 MLN4924 0.25~4.0μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞、U937细胞、THP-1细胞和Mo7e细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52,3.11,2.89和0.76μmol·L-1;对正常小鼠骨髓巨噬细胞增殖无明显影响。MLN4924 0.25~8.0μmol·L-1作用24 h,NEDD8类泛素化修饰的cullin蛋白表达减少（P〈0.01）,表明RAW264.7细胞NEDD8修饰逐渐减少。MLN4924 0.5,1.0和2.0μmol·L-1作用于RAW264.7细胞24 h,G0/G1期细胞百分率由正常对照组的（61.3±1.3）%分别升高到（64.5±1.5）%（P〈0.05）,（69.5±2.3）%（P〈0.01）和（72.8±1.7）%（P〈0.01）,细胞凋亡率由正常对照组的（1.5±0.3）%分别升高到（2.3±0.5）%,（4.3±0.9）%（P〈0.05）和（7.5±0.8）%（P〈0.01）。结论 MLN4924能够明显抑制单核巨噬细胞白血病细胞增殖,并诱导其细胞周期阻滞和细胞凋亡。

钙调神经磷酸酶1基因亚型4的调节器在肝细胞癌中表达下调并通过抑制NFAT1核转位而阻止癌细胞增殖、迁移和侵袭活性以及原位瘤的转移

【据《Gastroenterology》2017年9月报道】题：钙调神经磷酸酶1基因亚型4的调节器在肝细胞癌中表达下调并通过抑制NFAT1核转位而阻止癌细胞增殖、迁移和侵袭活性以及原位瘤的转移（作者Jin HJ等）

重度子痫前期胎盘中的双特异性磷酸酶9表达下调

目的：胎儿生长受限（FGR）和子痫前期（PE）是胎盘功能不全严重的、重要的临床表现。在小鼠中，双特异性磷酸酶9（DUSP9）是胎盘发育的关键。本研究旨在观察DUSP9在正常妊娠者以及胎盘功能不全患者中的表达特性。研究设计：应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫组化法以及蛋白印迹技术检测重度FGR和（或）重度子痫前期的妊娠妇女中DUSP9的基因表达及蛋白水平。应用DUSP9启动子甲基化来探索在病理性及早产胎盘中的潜在表观遗传学调控，应用沉默RNA的DUSP9干扰早孕期绒毛及BeWo细胞来研究其下游通路。胎盘缺氧是子痫前期的标志，因此，通过低氧培养环境中的胎盘培养来确定氧气对DUSP9体外表达的影响。结果：在发育过程中，DUSP9绒毛滋养层中的表达显著下降。重度子痫前期患者胎盘中的DUSP9蛋白水平显著低于重度FGR者。从表观遗传学角度，这并不是由启动子的高甲基化介导的，且下游通路细胞外信号调节激酶（ERK）1／2并未受显著影响。低氧（3％氧浓度）培养环境中培养的妊娠早期胎盘中，DUSP9表达显著降低[（74＋20）％]。利用DUSP9沉默RNA处理的BeWo细胞及体外培养的胎盘绒毛中，DUSP9的表达分别降低了61％和62％。在DUSP9下调的细胞及体外培养的绒毛中，其下游靶蛋白ERK1／2的磷酸化有增强的趋势。结论：DUSP9蛋白的表达在重度子痫前期患者胎盘中被显著抑制，但在严重的FGR患者中却没有。这种抑制可能是由子痫前期中的持续低氧环境所导致的。

维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织中EGR1和ID4基因表达下调与HPV感染的关系

目的：探讨宫颈癌及癌前病变组织中基因下调表达调控与人乳头状瘤病毒（human papillomavirus， HPV）感染的依存关系，为建立 HPV 筛查预警的宫颈癌辅助诊断指标提供依据。方法收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌（cervical squamous cell carcinoma，CSCC）、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ～Ⅲ及宫颈炎患者的新鲜宫颈上皮组织标本共100例，提取组织 DNA 和 RNA，鉴定 HPV 阳性和型别，选择 HPV 阳性CSCC 和 CINⅡ～Ⅲ及 HPV 阴性宫颈炎组织 RNA，利用荧光定量 RT-PCR 方法鉴定早期生长反应基因-1（EGR1）、DNA 结合抑制因子4（ID4）、FBJ 鼠科骨肉瘤病毒原癌基因（FOS）和早期应急蛋白2（IER2）基因的转录表达水平。结果通过 HPV 阳性鉴定和分型，鉴别出 HPV16、18、45、31等8种 HPV 感染型别，宫颈癌、CIN 和宫颈炎组织的 HPV 阳性率分别为94．4％、75．0％和31．3％，其中 HPV16阳性率为66．6％、68．7％和31．3％；HPV 阳性的 CSCC 组织中 EGR1、ID4、FOS 和 IER2基因的 mRNA 表达水平低于 HPV 阳性的 CIN 和 HPV 阴性宫颈炎，且 CSCC 与 CIN 或 NC 比较差异均有统计学意义（P ＜0．05），而 HPV 阳性的 CIN 组织中4种基因的表达水平均低于 HPV 阴性的宫颈炎组织，两者 EGR1和 ID4基因表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05）；从 HPV16感染的角度分析，CSCC 或 CIN 与宫颈炎 EGR1和 ID4表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05），但是 CSCC 与 CIN 相比较，只有 EGR1基因表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05），而 ID4基因差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论宫颈癌及癌前病变与依赖于 HPV 感染的 EGR1和 ID4基因表达下调有关，其中 EGR1基因表达水平变化可能与癌前病变和 HPV16感染的关系更为密切，可能成为 HPV 筛查预警的宫颈癌辅助诊断指标，并为揭示 HPV感染的致病和致癌分子机制提供了重要依据。

葡萄糖6磷酸脱氢酶表达下调对皮肤鳞癌细胞系A431细胞凋亡和侵袭能力的影响

皮肤鳞癌是世界范围内第二大最常见的皮肤癌。具有侵袭表型的皮肤鳞癌能增加转移的风险，导致患者的存活率显著下降，具有淋巴结转移的皮肤鳞癌患者的5年生存率仅为26％．34％。因此寻找新的分子靶点治疗皮肤鳞癌显得极为重要。

泛素-蛋白酶体系统参与急性炎症状态下大鼠肝P-糖蛋白表达下调

目的研究急性炎症状态下大鼠肝P-糖蛋白翻译后修饰的机制。方法 20只大鼠随机分成2组,模型组10只,对照组10只。模型组予以腹腔单次注射5 mg·kg-1脂多糖,对照组予以腹腔单次注射等体积0.9%氯化钠。24 h后,取肝组织,制备匀浆,分别用Western blot、免疫沉淀法和荧光法检测模型组和对照组的肝P-糖蛋白表达水平、P-糖蛋白泛素化水平和26S蛋白体活性的变化。结果与对照组相比,模型组肝P-糖蛋白蛋白表达水平显著降低(P<0.01),肝P-糖蛋白泛素化水平显著升高(P<0.01),26S蛋白体的活性显著升高(P<0.01)。结论泛素-蛋白酶体途径参与急性炎症状态下大鼠肝P-糖蛋白的下调。

细胞色素P450相关基因表达下调与原发性肝癌的发生发展有关

目前肝细胞癌（HCC）是全球死亡率居第三位的恶性肿瘤,其病因比较明确,临床研究进展很快,但复发率仍较高.研究一系列肝癌预后分子标志物,可及早预测癌细胞转移,阻止肿瘤生长,判定患者预后,最终达到满意控制肿瘤的目的.

转录激活因子ELK-1在持续性心房颤动患者心房肌中表达下调

心房颤动（房颤）是临床上最常见的心律紊乱之一，其发病机制尚不甚清楚。目前证实，心房肌的电生理重构和结构重构是房颤发生、发展的基础。最近发现，心房肌在房颤状态下的重构是适应性的逆向分化。转录激活因子ETS样蛋白1（ETS-1ike1，ELK-1）作为ETS家族（命名缘于禽类白血病病毒基因E26）成员之一，在细胞分化调节中起着重要作用。因此推测，转录激活因子ELK-1参与调控房颤心房肌的分子和结构重构。本实验采用Western blot和免疫组化技术，观察了转录激活因子ELK-1在房颤心房肌的表达改变，以验证假设是否成立。

微管解聚蛋白Stathmin表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是继肺癌之后的第二大肿瘤，其发病率和病死率均位居各恶性肿瘤的前列。我国是胃癌高发区，约占全球范围的40％。目前特异度和灵敏度高的胃癌肿瘤标志物很少，其5年生存率依然很低。

酪氨酸激酶受体RON表达下调对膀胱癌5637细胞增殖、迁移和侵袭的影响

酪氨酸激酶受体（RON）是Met原癌基因家族的重要成员之一，大量研究结果表明其在调节细胞生长、增殖、凋亡和迁移方面发挥着重要的作用。目前RON对膀胱癌细胞生长和侵袭的调节能力尚不清楚，我们通过转染RON小干扰RNA（siRNA）的方法，观察RON对膀胱癌5637细胞生长、侵袭能力的影响。

抑制神经前体细胞表达下调因子8对前列腺癌细胞生物学行为及其雄激素受体表达的影响

目的 慢病毒介导短发卡RNA（shRNA）靶向抑制前列腺癌细胞株LnCaP、VCaP 细胞的抑制神经前体细胞表达下调因子8（NEDD8）的表达,观察其对雄激素受体（AR）、前列腺特异性抗原（PSA）的表达以及细胞生物学行为的影响.方法 构建NEDD8短发夹RNA（NEDD8-shRNA）稳定转染的LnCaP、VCaP 细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）及Western blot法检测NEDD8、AR及PSA mRNA及蛋白表达.细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、TranswellTM 实验检测细胞侵袭能力.结果 NEDD8-shRNA慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8 mRNA表达量分别是空白对照组的（0.11±0.03）、（0.16±0.04）倍,AR mRNA表达量分别为（0.52±0.04）、（0.42±0.05）倍,PSA mRNA的表达量分别为（0.49±0.04）、（0.59±0.06）倍.慢病毒转染后,LnCaP、VCaP 细胞NEDD8蛋白相对表达量分别为（11.26±2.65）%、（6.26±2.04）%,AR蛋白相对表达量分别为（30.36±4.35）%、（15.36±3.37）%,PSA蛋白相对表达量分别为（13.37±2.70）%、（11.36±2.67）%.与对照组比较,NEDD8、AR、PSA mRNA及蛋白表达均显著下降（P=0.000）.慢病毒转染后,与对照组比较,LnCaP、VCaP 细胞增殖显著抑制;转染后 LnCaP、VCaP细胞株凋亡率分别为（15.08±1.23）%、（20.37±1.76）%,与对照组比较显著增加（P=0.001、0.000）;穿膜细胞数显著减少（P=0.000、0.004）,分别为（55.5±12.5）、（60.8±11.3） 个.结论 NEDD8可能在转录水平参与了对AR表达调控,通过抑制NEDD8基因能有效抑制LnCaP、VCaP中AR表达及细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.