牦牛TLR2和TLR4基因mRNA在不同组织中的表达分布研究

为检测牦牛TLR2和TLR4基因m RNA在不同组织中的表达分布,本研究根据Gen Bank中牛TLR2和TLR4序列设计特异性引物,以β-actin为参照基因,建立了检测牦牛天然免疫受体TLRs家族TLR2和TLR4基因的荧光定量PCR方法,并对TLR2和TLR4基因在牦牛各组织中的表达分布进行了研究。结果表明,TLR2和TLR4基因在牦牛所有组织中均有表达,其中TLR2基因在小肠表达量最高,在卵巢表达量最低,在肾、肺、肝、心、脾、乳腺、大肠、肌肉等组织依次有较高的表达;TLR4基因在乳腺表达量最高,在肌肉表达量最低,在脾、肝、小肠、肾、卵巢、肺、心、大肠等组织依次有较高水平的表达。该研究结果提示TLR2和TLR4基因可能在牦牛抗病免疫分子机制中发挥重要的作用,对研究高原动物免疫机制和应对牦牛及其他高原动物重大疫病具有重要意义。

牦牛TLR6基因的克隆、序列分析及其表达分布研究

为了解牦牛TLR6基因特点及其在牦牛各组织动态表达分布规律,根据GeneBank中野牦牛TLR6序列设计引物克隆并对所得序列进行生物信息学分析,建立荧光定量PCR方法,对TLR6基因在牦牛组织中的表达分布进行研究。基因序列分析表明,克隆得到牦牛TLR6基因编码区全长2 397 bp,编码氨基酸798个,N端含有26个氨基酸组成的信号肽,分子质量91.5719 ku,理论等电点6.45。蛋白预测结果表明,TLR6编码蛋白整体表现为疏水性。同源性分析表明,10条序列当中牦牛与野牦牛、普通牛、藏羚羊等物种具有较高同源性,在系统发育树中距离最近。该结果说明TLR6基因序列具有较高保守性。荧光定量结果表明,TLR6基因在牦牛所有组织中均有表达,TLR6基因在脾脏表达量最高,在肌肉表达量最低,在卵巢、肺、小肠、肝、肾、心等组织依次有较高表达。该结果可为进一步研究TLRs在牦牛等其他高原动物体内的分布及动态表达规律,以及牦牛抗病免疫及育种奠定基础。

人血管生成素cDNA克隆及其在组织细胞中表达分布研究

血管生成素是一种具有明显促血管新生的蛋白因子,属于有特殊生物学功能的RNA酶家族。我们从人外周血白细胞中克隆了血管生成素cNNA,进行了DNA序列对比分析。同时对其在不同组织和细胞系中的表达情况进行了检测,并首次利用RT-PCR法在 KG-1、Jurkat、HepG2、Tf-1、HL60、HEL和神经胶质细胞中检出血管生成素mRNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

绿头鸭RIG-Ⅰ基因的分子特征及其在体内的表达分布

为揭示野生绿头鸭视黄酸诱导基因Ⅰ(Retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)的分子特征及其在体内的表达分布规律,对野生绿头鸭RIG-Ⅰ(MdRIG-Ⅰ)基因的CDS序列进行了克隆和序列分析,并应用荧光定量PCR方法对RIG-Ⅰ基因在绿头鸭不同组织中的表达水平进行了测定。结果显示:MdRIG-Ⅰ基因的CDS序列全长2 802 bp,编码933个氨基酸,与哺乳动物和鱼类的RIG-Ⅰ基因同源率较低,为43.7%~46.7%与52.2%~54.9%;与鸟类的RIG-Ⅰ基因同源率较高,为78.7%~99.8%;与番鸭和绍兴麻鸭的RIG-Ⅰ基因同源率为98.3%和99.8%,有较强的种间特异性;MdRIG-Ⅰ基因mRNA在体内不同器官的表达量均高于SPF鸭(绍兴麻鸭),且不同组织表达量各不相同:在肝脏中表达水平最高,其次是肠,在心和脾表达呈中等水平,在肺和肾表达呈低等水平。研究结果揭示了RIG-Ⅰ通路在鸭科动物抗病毒中的作用及其分子机制,为水禽先天性免疫研究奠定良好的基础。

汉坦病毒核酸疫苗在小鼠体内表达分布的初步研究

运用生物荧光技术,肌肉免疫接种小鼠含汉坦病毒S抗原基因片段的核酸疫苗,观察重组核酸疫苗在其体内的表达分布。进一步探讨汉坦病毒核酸疫苗的应用前景。扩增纯化已构建好的含有汉坦病毒S抗原基因片段和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组质粒pEGFP/S;免疫接种小鼠胫前肌,观察pEGFP/S在小鼠体内的表达分布。免疫接种3 d后在实验组小鼠肝、肾、脾、肌肉各组织均检测到较强的绿色荧光。重组质粒pEGFP/S能在小鼠的多个组织器官表达,为深入研究汉坦病毒核蛋白和有效的核酸疫苗奠定了基础。

神经肽Phoenixin的表达分布与功能机制的研究进展

近年来,随着神经分子生物学和生物信息学的快速发展,以及人类基因组计划所提供的丰富信息,科学家从大鼠下丘脑和牛心脏中分离出了一种新的神经肽Phoenixin(PNX)。PNX有PNX-14和PNX-20两个亚型。PNX通过激活受体GPR173而广泛表达于多种动物的外周组织及中枢系统中,根据表达分布的不同,PNX起到了多种生物功能。综合近10 a的研究进展,本文总结了PNX在动物体内的表达分布以及在各表达位点的功能机制。PNX在下丘脑中的作用最为重要与复杂,可能与调节GnRH的脉冲式分泌有关。望能为PNX未来的研究理清思路,以期PNX成为新的诊断标志物和靶点治疗药物。

褪黑素受体Mel1b在皖西白鹅不同组织中的分布与表达

褪黑素是动物体内一种重要的神经激素,其通过与褪黑素受体结合发挥多种生物学作用。旨在探究褪黑素受体Mel1b在皖西白鹅不同组织中的分布特点与表达水平。采集皖西白鹅的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、胰腺、胸肌、卵巢和分级卵泡,利用免疫组化和Real-time PCR技术检测各组织中Mel1b的分布特点及表达水平。结果表明:Mel1b在皖西白鹅的心、肝、脾、肺、肾、脑、胰腺、胸肌、卵巢及分级卵泡中广泛分布,且各组织间Mel1b基因和蛋白表达水平存在一定差异,卵巢中表达量最高,且随卵泡发育分级卵泡内表达量逐渐增加,其次是胰腺、脾、肾、肺,在脑、心、肝和胸肌中的表达量最少。可见,皖西白鹅各组织中均存在褪黑素受体Mel1b,且各组织间的表达量不同,结果为进一步探究褪黑素及其受体参与调控皖西白鹅机体内广泛的生物学作用奠定了理论基础。

H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点突变对小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4表达和分布的影响

PB2蛋白627位点被证实是决定甲型流感病毒宿主范围和致病性的关键因子,为深入探究H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)及其PB2蛋白627位点突变株对BALB/C小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4基因表达和组织分布的影响,该研究使用H9N2 AIV(V_(K627))和该毒株PB2蛋白627位点突变株(rV_(K627E))感染BALB/C小鼠,分别在攻毒后第1、3、5、6 d采集肺组织,通过qRT⁃PCR和免疫组织化学技术对RIP3、Slit2和Robo4基因在小鼠肺组织中的特异性表达和分布进行研究。结果显示,攻毒组小鼠肺脏RIP3的表达量与对照组相比显著上升,同时VK627组RIP3的表达量显著高于rV_(K627E)组;Slit2和Robo4的表达量在攻毒后第1 d明显低于对照组,之后rVK627E组的表达量与对照组和VK627E组相比显著上升。免疫组织化学检测结果显示,RIP3蛋白主要分布在小鼠肺泡壁上皮细胞以及肺动脉血管内皮细胞,呈弱阳性表达,而攻毒组RIP3蛋白在气管粘膜下层细胞也有中至强阳性表达;Slit2蛋白在对照组和rVK627E组小鼠的肺泡上皮细胞以及气管粘膜上皮细胞中呈现中强阳性表达,而在VK627组中呈现弱阳性表达。Robo4蛋白的分布和表达情况与Slit2蛋白相似。综上所述,H9N2 AIVs感染小鼠后,会显著影响RIP3和Slit2/Robo4的表达和分布,且其表达和分布与H9N2 AIVs对小鼠的致病性密切相关;PB2蛋白627位点的突变在H9N2 AIVs影响RIP3、Slit2和Robo4表达和分布中起着重要作用。该研究结果将为进一步探究H9N2 AIVs及其点突变毒株介导宿主病理发生的分子机制和抗炎策略的选择提供基础数据。

5种肺癌标志物在血清中的表达分布及组合检测的分类学价值

目的研究5种肺癌标志物在血清中表达分布及组合检测的分类学价值。方法应用免疫发光方法,检测143例肺癌患者和52例非良性疾病患者血清中的5种肺癌标志物的表达水平,采用统计学分析它们组合检测的分类学价值。结果不同病理分型肺癌患者血清细胞角蛋白19可溶性片段(CYfra21-1)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、糖类抗原-153(CA-153)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、胃泌素释放肽前体(pro-GRP)表达水平均高于肺良性病变组(P<0.01);NSE和pro-GRP在小细胞肺癌(SCLC)患者血清内的表达水平明显高于非小细胞肺癌(NSCLC)患者组(P<0.01);SCC-Ag在肺腺癌和鳞癌中的表达水平高于大细胞肺癌(LCLC)和小细胞肺癌(P<0.05)。结论组合检测NSE+pro-GRP可以把肺癌区分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类别;SCC-Ag+CA-153更利于从非小细胞肺癌患者中做出鳞癌的分型诊断;CYfra21-1+CA-153可以对腺癌作出鉴别诊断;SCC-Ag在T1、T2期的表达水平高于其他标志物(P<0.05)。

番鸭TLR5基因的序列分析及其在组织中表达分布的检测

为了解番鸭TLR5的全基因序列和它在不同组织器官中的表达分布,采用PCR方法对番鸭TLR5全长O RF区进行扩增,并建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,用该方法对番鸭TLR5 mRNA在组织器官中的分布进行了测定。结果显示,番鸭TLR5基因编码区序列全长2 580 bp,由跨膜区、11个富亮氨酸重复序列(LRR)、1个富亮氨酸重复C端结构域(LRR-CT)以及1个TIR区组成;番鸭与同属的翘鼻麻鸭、绿头鸭比对,TLR5基因序列的同源性分别为98.9%、99.9%,TLR5氨基酸序列的同源性分别为97.7%、99.7%。番鸭TLR5 mRNA在脾、肝、肺中表达量最高,肾、脑、直肠、空肠、十二指肠次之,心、回肠、盲肠最低。

基于文档分布式表达的新浪微博情感分类研究

[目的/意义]拥有庞大用户群体的新浪微博每天都产生海量的文本数据,对其进行情感分类有助于分析社会的舆论走向,为舆情监测提供帮助。其中,如何挖掘微博中的文本特征与情感信息是微博情感分类研究的关键。[方法/过程]将能有效考察上下文语境的基于文档分布式的特征表达方法引入到微博情感分类研究中,通过综合考虑上下文的语义、语序和情感信息,将微博文本转化为高维空间的特征向量,然后利用SVM分类器判断文本的情感极性。[结果/结论]实验表明,对微博文本进行文档分布式特征表达后,其分类准确率可达90.46%,优于其他特征表达方法。

白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠海马NMDAR1亚基蛋白分布及表达的影响

目的:以PMDD肝气逆证模型大鼠为载体,研究PMDD肝气逆证的病机以及白香丹胶囊对本病的干预机制。方法:改进情志刺激为主多因素分段刺激造模法,复制PMDD肝气逆证大鼠模型;用白香丹胶囊和氟西汀分散片予以干预,最后进行旷场实验评价模型;免疫荧光技术和蛋白印迹技术检测大鼠海马CA1、CA3区NMDAR1受体亚基分布情况及表达水平。结果:模型组大鼠与正常组相比较,其旷场实验的运动总距离明显增加(P<0.001)、中央区域的进入次数及停留在中央区域的时间显著减少(P<0.01),海马CA1、CA3区细胞呈现稀疏杂乱的分布状态,且同氟西汀组一样,其NMDAR1蛋白表达量明显降低;白香丹组大鼠与模型组相比较,其旷场实验的运动总距离明显降低(P<0.05)、中央区域的进入次数和停留在中央区域的时间明显增多(P<0.05),而氟西汀组与之相比,除了运动总距离明显降低(P<0.05),其它指标不存在显著性差异,同氟西汀组一样,白香丹组大鼠海马CA1、CA3区细胞分布、排列无显著异常,但其NMDAR1蛋白表达量显著升高(P<0.000 1);氟西汀组大鼠与白香丹组相比较,其NMDAR1蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:情志刺激为主多因素分段刺激造模法对大鼠学习记忆能力的损伤机制可能与大鼠海马CA1、CA3区神经细胞的减少和NMDAR1亚基的表达量降低有关,白香丹胶囊通过调整NMDAR1蛋白表达量纠正上述异常改变,从而改善大鼠的学习记忆能力。

SD大鼠层黏蛋白受体组织特异性的分布和表达

利用RT-PCR和SABC免疫组织化学染色的方法,对SD大鼠进行了层黏蛋白受体在mRNA和蛋白2个水平上分布和表达的检测。结果表明,层黏蛋白受体mRNA和蛋白在大鼠检测组织内均有表达,表达的细胞类型为大脑、海马和小脑的神经细胞及心肌细胞、肝细胞、淋巴细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞和肾小管上皮细胞。为探讨层黏蛋白受体的分布、功能及在信号转导途径中的作用提供数据。

基于加权主题分布表达的微博文本摘要生成研究

对微博文本的向量化表达及摘要效果的评测问题进行了研究.引入Word2vec模型实现微博文本词语的向量化表达,进而对词向量聚类生成主题词类.计算微博文本到主题词类的隶属度,结合主题词类的权重,生成微博文本的加权主题分布表达.在此基础上划分类簇实现摘要句的提取.基于类簇H指数选出高频词作为标准摘要词集,考察了生成摘要与标准摘要词集中共现词的词频分布,实现对自动摘要效果的评测.实验结果表明,本文提出的方法有助于提升微博短文本集的摘要生成效果.

STC-1基因在大、小体型猪中表达与分布的差异分析

试验分别采集40日龄小体型猪(巴马猪)和大体型猪(大白猪)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、头骨、骨骼肌组织,利用实时荧光定量PCR检测斯钙素-1(stanniocalcin 1,STC-1)基因mRNA在各个组织中的表达水平,并通过Western blotting检测STC-1蛋白在各个组织中的分布。实时荧光定量PCR检测结果表明,STC-1基因mRNA在巴马猪和大白猪肺脏、肾脏中相对表达水平较高,在骨骼肌中的表达水平最低;除心脏和骨骼肌外,巴马猪其余各组织中STC-1基因mRNA表达水平均显著高于大白猪(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,巴马猪肝脏中STC-1蛋白的表达量最高,而大白猪脾脏中STC-1蛋白表达量最高,两者差异显著(P<0.05);巴马猪肺脏、肝脏、骨骼肌及心脏组织中STC-1蛋白表达量均极显著高于大白猪(P<0.01);而巴马猪肾脏、脾脏中STC-1蛋白表达量极显著低于大白猪(P<0.01)。本研究首次对大、小体型猪不同组织的STC-1基因mRNA表达水平及其STC-1蛋白分布进行检测,导致该基因表达与分布差异的原因可能与两种猪受外界环境应激及生长发育差异有关。

五苓散对肾阳虚型口干燥症小鼠颌下腺AQP-5的分布表达研究

目的通过研究五苓散对肾阳虚模型小鼠颌下腺AQP-5分布表达的作用,探究五苓散治疗肾阳虚型小鼠口干燥症的机制。方法将27只ICR小鼠随机分为空白组、模型组、五苓散组,除空白组外,其余各组采用肌肉注射氢化可的松诱导联合限制日摄食量法建立气虚基础上的肾阳虚模型。造模后给予相应的药物干预10d,空白组、模型组均灌胃0.2mL/10g蒸馏水,五苓散组以每日0.2mL/10g灌胃五苓散汤剂,观察给药后的小鼠一般情况,测量小鼠的饮水量、唾液流量,检测颌下腺形态及AQP-5分布表达。结果与空白组相比,模型组出现颌下腺萎缩,饮水量减少,唾液流量减少,AQP-5主要表达在基底膜和顶膜中,较空白组染色较弱;相比于模型组,五苓散组颌下腺萎缩减少,饮水量增加,唾液流量,并且一定程度上AQP-5表达分布染色较模型组强。结论五苓散能抑制颌下腺萎缩,增加饮水量和唾液流量,可能通过改变AQP-5的分布表达改善小鼠在气虚基础上的肾阳虚证引起的口干症状。

鹅褪黑素受体Mel1c基因的组织表达特征

采用qRT-PCR等技术探究了Mel1c在鹅不同器官组织(心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及F1、F2、F3、F4、F5卵泡)中的表达分布。结果表明,Mel1c m RNA在鹅的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及各级卵泡中均有表达;其表达量在各组织中存在差异,且以胰脏、脾脏、肾脏、卵巢中表达量较高,肺脏次之,心脏、胸肌、大脑水平相当,肝脏中最少。而在卵泡组织中,F4级卵泡中最高,其次为F5级卵泡,F1级卵泡中表达量最少。Mel1c在鹅各组织中普遍表达分布,进一步说明了褪黑素在机体中有着广泛的生物学作用,特别是对卵泡发育的影响。

中枢神经系统相关水通道蛋白的研究进展

水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是一族表达于细胞膜上,对水分子高效通透的特异性孔道蛋白,其在全身广泛分布,与多个生物过程关系密切,同时也与较多神经系统疾病的发生发展存在联系。AQPs与中枢神经系统内的液体流动、能量代谢、神经修复与发生、血脑屏障的发育与稳定、信号转导以及CSF的产生与循环密切相关。AQPs还与脑水肿、阿尔茨海默病、视神经脊髓炎、原发性颅内高压及帕金森病等中枢神经系统疾病的发生发展有关。在中枢神经系统中,虽然已经发现较多种类的AQPs存在,但研究成果主要集中于AQP1、AQP4及AQP9三个水通道蛋白上。对于AQPs的研究有助于加深中枢神经系统的认识,并提供疾病的潜在治疗靶点。本文综述了AQPs在中枢神经系统的表达分布、调节机制、生理功能及其与中枢神经系统疾病的关联,为相关神经科学研究提供新思路。

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。

南瓜实蝇气味结合蛋白基因鉴定及组织分布

【目的】克隆南瓜实蝇(Bactrocera tau)的气味结合蛋白(odorent binding proteins,OBPs)基因,并分析其相关生物学信息,为了解南瓜实蝇的嗅觉机制提供参考。【方法】基于南瓜实蝇转录组测序结果筛选获得OBPs基因并进行生物信息学分析,通过基因克隆测序验证鉴定OBPs基因,并采用sqRT-PCR检测OBPs在雌、雄虫不同组织中的分布情况。【结果】经PCR产物测序验证和BLAST比对后共鉴定得到6个南瓜实蝇OBPs基因,序列长度在498~955 bp,编码128~314 aa,预测分子量大小为14.67~36.24 kDa,等电点为4.69~8.16,且每个OBP序列的N端均具有16~26 aa组成的信号肽序列,属于1个Minus型和5个Classic型。不同类型的OBPs均具有各自典型保守的Cys位点。6个OBPs分化明显,序列相似度在30%~51%。系统进化树表明,6个OBPs与瓜实蝇(Zeugodacus cucurbitae)的OBPs亲缘关系较近,柑橘大实蝇(Bactrocera minax)次之。半定量RT-PCR检测显示,6个OBPs在雌、雄虫不同组织中均有表达,而OBP14在雄虫腹部不表达,OBP15在雌虫腹部不表达。【结论】上述研究结果为进一步研究南瓜实蝇嗅觉识别分子机制和引诱机制奠定了基础。