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集胞藻PCC6803高效基因表达平台的构建与评价
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作者 齐凤霞 谈晓明 吕雪峰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1332-1342,共11页
针对蓝细菌代谢工程改造的需求,成功构建了可以在模式蓝细菌菌株集胞藻PCC6803中高效表达外源基因的3个基因组整合表达平台,以及1个可以在多株蓝细菌中表达的广宿主穿梭表达平台。该表达平台通过选用集胞藻PCC6803中1,5-二磷酸核酮糖缩... 针对蓝细菌代谢工程改造的需求,成功构建了可以在模式蓝细菌菌株集胞藻PCC6803中高效表达外源基因的3个基因组整合表达平台,以及1个可以在多株蓝细菌中表达的广宿主穿梭表达平台。该表达平台通过选用集胞藻PCC6803中1,5-二磷酸核酮糖缩化酶/氧化酶的启动子驱动外源基因的表达,应用"SD-AUG"翻译融合的策略提高外源蛋白翻译效率,以及加入终止子序列Trbc以提高转录终止效率,实现了对外源基因的高效表达。利用lacZ作为报告基因,检测了所构建表达平台pFQ20在集胞藻中的基因表达效率,结果显示β-半乳糖苷酶的活性为109 Miller。同时,基于pFQ20表达平台在集胞藻PCC6803中表达了来自大肠杆菌的硫酯酶基因tesA’,蛋白印迹实验结果显示了硫酯酶的成功表达。该表达平台为在蓝细菌中开展遗传研究及基因工程改造提供了有用的遗传工具,其构建策略为在蓝细菌中构建高效稳定的外源基因表达元件提供了借鉴。 展开更多
关键词 蓝细菌 集胞藻PCC6803 基因表达平台 Β-半乳糖苷酶 硫酯酶
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论潜在舆论和潜在舆论场及其引导 被引量:7
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作者 童兵 王宇 《当代传播》 CSSCI 北大核心 2016年第3期12-14,30,共4页
本文对官方舆论、民间舆论、海外舆论之外的潜在舆论进行了专题研究。潜在舆论是值得关注的重要舆论品类,具有主体分散、隐匿流传、对象多样、趋利传播等特点。其功能不同于官方舆论,也有别于一般的民间舆论,是当前实施社会综合治理的... 本文对官方舆论、民间舆论、海外舆论之外的潜在舆论进行了专题研究。潜在舆论是值得关注的重要舆论品类,具有主体分散、隐匿流传、对象多样、趋利传播等特点。其功能不同于官方舆论,也有别于一般的民间舆论,是当前实施社会综合治理的新着力点。潜在舆论出自特殊的潜在舆论场,后者是潜在舆论主体便捷安全的运转场域。笔者主张通过立法和开放表达渠道、保护民众安全表达自己意志、改进官媒平台三方面来加强潜在舆论的化解和吸纳。 展开更多
关键词 潜在舆论 潜在舆论场 舆论表达平台
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核糖开关的结构和调控机理 被引量:3
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作者 王少伟 李锡香 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期16-22,33,共8页
一种新发现的RNA分子——核糖开关,通过感知代谢物浓度的变化调控目标基因的表达。它可以调整自身的结构直接结合代谢物小分子,而不需要蛋白因子的参与。在原核生物中发现了大量的核糖开关,在真核生物如植物和真菌中也发现了核糖开关。... 一种新发现的RNA分子——核糖开关,通过感知代谢物浓度的变化调控目标基因的表达。它可以调整自身的结构直接结合代谢物小分子,而不需要蛋白因子的参与。在原核生物中发现了大量的核糖开关,在真核生物如植物和真菌中也发现了核糖开关。核糖开关由适体域和表达平台两个功能域组成,能在不同水平调控基因的表达,如转录终止、翻译起始、mRNA剪辑和加工。核糖开关不需要蛋白因子的参与,因此人们认为它可能是古代RNA世界的遗留物。核糖开关作为RNA传感器可以设计成一种基因控制元件,在未来的基因治疗方面可能具有很大的应用前景。 展开更多
关键词 核糖开关 适体域 表达平台 基因表达调控
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公共引物介导的多重定量PCR技术在转基因大豆检测中的应用研究 被引量:2
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作者 张玲 钱利祥 +5 位作者 陶静 丁威 方坛芬 韩蓉 薛满 孙万平 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第6期2057-2067,共11页
目的建立公共引物介导的多重定量PCR法检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆(包括:MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705、MON87708)的方法。方法设计并筛选出针对本研究涉及的6种转基因大豆对特异性引物,在每对特异... 目的建立公共引物介导的多重定量PCR法检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆(包括:MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705、MON87708)的方法。方法设计并筛选出针对本研究涉及的6种转基因大豆对特异性引物,在每对特异性引物的5’端均加上一段公共引物,形成特异性嵌合引物。以某种转基因大豆DNA为模板,加入多引物体系以及荧光公共引物验证GeXP(geneexpression platform)多重检测体系的特异性,每种转基因大豆DNA模板浓度分别稀释为20、2、1、0.2、0.02ng/μL,运用GeXP多重PCR方法进行单一DNA模板灵敏度分析并优化各对特异性嵌合引物的工作浓度。结果多重PCR检测体系扩增出特异性片段,GeXP检出的各转基因大豆片段长度MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705和MON87708分别为140.75、184.42、274.93、308.47、467.98和517.67 bp, GeXP多重检测体系检测敏感性可达到为1 ng/μL,扩增产物测序结果进一步说明了引物扩增的特异性。结论本研究建立的基于GeXP系统的多重PCR定量检测技术,可以准确鉴别6种转基因大豆,为转基因大豆及其他转基因产品提供了新型的检测方法。 展开更多
关键词 转基因大豆 基因表达平台 多重PCR 公共引物
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8种猪呼吸道和繁殖障碍病病原体GeXP检测方法的建立 被引量:13
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作者 张民秀 谢芝勋 +4 位作者 邓显文 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期4996-5006,共11页
【目的】建立了一种同时鉴别H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和猪伪狂犬病8种病毒性呼吸道和繁殖障碍病病原体的GeXP高通量检测方法。【方法】根据这8种病原体的基因保守... 【目的】建立了一种同时鉴别H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和猪伪狂犬病8种病毒性呼吸道和繁殖障碍病病原体的GeXP高通量检测方法。【方法】根据这8种病原体的基因保守序列,设计并合成了9对特异性引物,在每对特异性引物的5'端均加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。运用GeXP单重PCR方法,以单一病毒cDNA/DNA为模板验证引物的可行性;建立GeXP多重PCR方法,以单一病毒cDNA/DNA模板、阳性cDNA/DNA混合模板验证GeXP多重检测体系的特异性和准确性;将含猪圆环病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒靶基因的克隆质粒及体外转录的RNA(H1、H3亚型猪流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪瘟、猪日本乙型脑炎)分别梯度稀释为10^3,10^2,10^1拷贝/μl,运用GeXP多重PCR方法进行单一病原体灵敏度分析;根据单一病原体的灵敏度分析结果,优化各对特异性嵌合引物的工作浓度,将含有体外转录好的6种RNA模板和3种克隆质粒等量混合,将混合物梯度稀释为10^4,10^3,10^2,10^1拷贝/μl,运用GeXP多重PCR方法分析同时检测8种病原体的灵敏度。运用建立好的GeXP多重检测体系对23份临床样品进行检测,并与常规单重PCR进行比较,对该GeXP多重检测体系的临床应用进行评价。【结果】基于GeXP系统的单重PCR检测体系和GeXP多重PCR检测体系均能扩增出特异性片段,验证了引物的可行性、GeXP多重检测体系的特异性和准确性;GeXP多重检测体系的单一病原模板灵敏度分析结果显示,多重检测体系对单一病原体检测的下限均为10-1拷贝/μl;GeXP多重检测体系在8种病原体同时检测的灵敏度分析结果显示,多重检测体系可在10^3拷贝/μl水平可同时检测到8种病原体;比较GeXP多重PCR检测方法和常规PCR方法对临床样品的检测结果,两种检测方法的检测结果相符。【结论】成功建立了基于GeXP系统的多重PCR检测体系,可以同时检测8种猪呼吸道和繁殖障碍性疾病病原体;本研究建立的同时鉴别8种猪呼吸道和繁殖障碍性疾病病原体的GeXP检测方法具有高通量、特异性强和灵敏度高的特点,为猪病毒性呼吸道和繁殖障碍性疾病的分子诊断提供了新型的检测方法。 展开更多
关键词 猪呼吸道和繁殖障碍传染病 GENOME Lab基因表达平台(GeXP) 多重PCR 通用引物 特异性嵌合引物
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小学语文教学师生互动中的话语沟通探析 被引量:5
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作者 李宏艳 《科技风》 2019年第15期68-68,共1页
语文教学是基础教育的重点,在语文教学中,教师与学生之间的话语沟通会对教学质量和效率产生较大影响。对此,本文首先对师生互动话语沟通在小学语文教学中的重要性进行介绍,然后对当前小学语文师生话语沟通互动中的不足进行分析,并对加... 语文教学是基础教育的重点,在语文教学中,教师与学生之间的话语沟通会对教学质量和效率产生较大影响。对此,本文首先对师生互动话语沟通在小学语文教学中的重要性进行介绍,然后对当前小学语文师生话语沟通互动中的不足进行分析,并对加强师生话语沟通互动的措施进行详细探究。 展开更多
关键词 小学语文 话语沟通 重要性 教学方法 语言表达平台
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小学语文教学师生互动的话语沟通
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作者 倪前礼 《中学生作文指导》 2019年第28期111-111,共1页
语文教学是基础教育的重点,在语文教学中,教师与学生之间的话语沟通会对教学质量和效率产生较大影响。对此,本文首先对师生互动话语沟通在小学语文教学中的重要性进行介绍,然后对当前小学语文师生话语沟通互动中的不足进行分析,并对加... 语文教学是基础教育的重点,在语文教学中,教师与学生之间的话语沟通会对教学质量和效率产生较大影响。对此,本文首先对师生互动话语沟通在小学语文教学中的重要性进行介绍,然后对当前小学语文师生话语沟通互动中的不足进行分析,并对加强师生话语沟通互动的措施进行详细探究。 展开更多
关键词 小学语文 话语沟通 重要性 教学方法 语言表达平台
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Research on the Application of Flash Animation Technology in Digital Media
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作者 Yong Zhang Peng Li 《International Journal of Technology Management》 2014年第5期115-117,共3页
This article first respectively introduces the characteristics of product design and digital media technology, combined with knowledge of the new economic background and user participation trends in innovation, analyz... This article first respectively introduces the characteristics of product design and digital media technology, combined with knowledge of the new economic background and user participation trends in innovation, analyzed the shortcomings of traditional design expression and digital media technology, through the use of digital media flash design expression and method, to solve the problem of traditional design expression. Finally, through the expression model of digital media and interactive animation based on flash animation technology, showed that flash obtained the rapid development and application in the multimedia platform. 展开更多
关键词 Digital media Flash animation technology interactive animation
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A novel method for singularity analysis of the 6-SPS parallel mechanisms 被引量:15
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作者 CHENG ShiLi WU HongTao +2 位作者 WANG ChaoQun YAO Yu ZHU JianYing 《Science China(Technological Sciences)》 SCIE EI CAS 2011年第5期1220-1227,共8页
Singularity analysis is a basic problem of parallel mechanism, and this problem cannot be avoided in both workspace and motion planning. How to express the singularity locus in an analytical form is the research empha... Singularity analysis is a basic problem of parallel mechanism, and this problem cannot be avoided in both workspace and motion planning. How to express the singularity locus in an analytical form is the research emphasis for many researchers for a long time. This paper presents a new method for the singularity analysis of the 6-SPS parallel mechanism. The rotation matrix is described by quaternion, and both the rotation matrix and the coordinate vectors have been expanded to four-dimensional forms. Through analyzing the coupling relationship between the position variables and the orientation variables, utilizing properties of the quaternion, eight equivalent equations can be obtained. A new kind of Jacobian matrix is derived from those equations, and the analytical expression of the singularity locus is obtained by calculating the determinant of the new Jacobian matrix. The singularity analysis of parallel mechanisms, whose moving platform actuated by 6 links and the vertices of both the base and the moving platforms has been placed on a circle respectively, can be solved by this analytical expression. 展开更多
关键词 parallel mechanism singularity analysis QUATERNION Jacobian matrix
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