真核质粒在组织细胞内的表达时效

目的观察真核质粒在机体细胞内的表达时效,为临床基因治疗的给药间隔提供理论依据。方法取PCDNA3.1(+)-EGFP,pEGFP-C3,pIRES-GFP 3种绿色荧光真核质粒,利用脂质体2000转染机体细胞,观察绿色荧光蛋白在细胞的表达时间推断质粒在机体内的表达时效。结果 3组绿色荧光均在12 h开始表达,48 h达高峰,持续35 d后衰减。结论在基因治疗中真核质粒连接目的基因能在机体细胞内稳定表达35 d,基因给药间隔可选定为30 d。

热应激 脂多糖 谷氨酰胺 诱导牛睾丸支持细胞HSP72时效表达

为了探讨温和热应激、脂多糖(LPS)和谷氨酰胺(Gln)诱导牛睾丸支持细胞(b SCs)HSP72的时效表达规律,本试验将传至第3代b SCs分成热应激、LPS和Gln处理组,用CCK-8试剂盒检测细胞活性,用RT-PCR和Western-Blot方法分别检测处理后0、2、4、6、8、12、14h和16 h时细胞内HSP72 mRNA和蛋白表达。结果显示,3种方式均能诱导HSP72表达,且HSP72蛋白分别在热应激、Gln和LPS预处理后2、4h和12 h时表达量最高。结果表明,热应激或Gln均比LPS诱导牛睾丸支持细胞HSP72表达的时间早,提示可考虑用Gln减少由LPS诱导的细胞损伤。