氧化前胡素下调表阿霉素耐药乳腺癌细胞外泌体miR-222-3P逆转其耐药的作用研究

目的:通过生物信息学分析筛选出表阿霉素耐药乳腺癌细胞(MCF-7/EPI)和敏感乳腺癌细胞(MCF-7)外泌体中差异表达miRNA,并对其靶基因功能进行分析预测;探讨氧化前胡素逆转表阿霉素乳腺癌耐药的作用及其对MCF-7/EPI外泌体中靶基因miRNAs表达的影响。方法:采用CCK-8法确证氧化前胡素逆转表阿霉素乳腺癌耐药的作用,结合鼠源乳腺癌4T1细胞移植瘤模型验证氧化前胡素联合表阿霉素的抗肿瘤作用;差速离心法分离提取MCF-7/EPI和MCF-7外泌体,利用微阵列技术评估两种外泌体中miRNA的表达,通过生物信息分析预测失调miRNAs的靶基因;激光共聚焦分析MCF-7对MCF-7/EPI外泌体摄取情况、摄取MCF-7/EPI外泌体后MCF-7细胞增殖的变化及氧化前胡素对其变化的影响;RT-qPCR技术考察氧化前胡素对MCF-7/EPI外泌体中靶基因miRNAs表达的影响。结果:体外实验中建立的MCF-7/EPI对表阿霉素耐药倍数为6.30倍,氧化前胡素可逆转MCF-7/EPI对表阿霉素耐药;体内试验结果也显示,与单独的表阿霉素组相比,用氧化前胡素联合表阿霉素治疗2 w后,肿瘤质量显著降低(P<0.01),进一步的结果表明MCF-7可摄取MCF-7/EPI外泌体,且摄取耐药外泌体后的MCF-7细胞在表阿霉素干预下细胞增殖能力增强,氧化前胡素可抑制MCF-7细胞对MCF-7/EPI外泌体摄取,抑制MCF-7细胞在表阿霉素干预下细胞增殖能力(P<0.01);生物分析发现miRNA-222-3p为MCF-7与MCF-7/EPI两种外泌体中差异显著的基因,miRNA-222-3p在MCF-7/EPI外泌体中表达显著上调,而氧化前胡素可下调miRNA-222-3p基因表达(P<0.01)。结论:外泌体miR-222-3p可能是预测乳腺癌患者表阿霉素敏感性的潜在预后生物标志物。氧化前胡素可能通过抑制MCF-7对MCF-7/EPI外泌体的摄取,下调miRNA-222-3p表达逆转表阿霉素乳腺癌耐药。