表面增强激光解析电离飞行时间质谱法鉴别良恶性胸腔积液的研究

目的分析表面增强激光解析电离飞行时间质谱法(SELDI-TOF-MS技术)在良恶性胸腔积液鉴别中的应用价值。方法运用SELDI-TOF-MS技术分析已诊断明确的36例恶性胸腔积液和44例良性胸腔积液,运用Biomarker Pattem(BPS)软件分析组间差异蛋白。并通过发现的高表达差异蛋白对50例胸腔积液样本进行盲筛验证,评估其临床运用价值。结果恶性胸腔积液与良性胸腔积液间存在11个差异蛋白波峰,恶性胸腔积液中高表达9个,低表达2个。选用其中质核比2768.14和7346.68的差异蛋白为标志物建立决策树模型,经BPS软件分析,诊断敏感度为90.91%,特异度为96.43%,Youden指数为0.87。结论 SELDI-TOF-MS技术可用于鉴别良恶性胸腔积液,具有较大临床运用价值。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在急性重症胰腺炎预后相关蛋白质谱检测中的应用

目的应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-Ms）技术检测急性重症胰腺炎不同预后相关蛋白质谱，探讨急性重症胰腺炎轻重程度及预后评估的新方法。方法用SELDI-TOF-MS方法检测浙江省人民医院2008年3月至2010年10月23例急性重症胰腺炎患者的蛋白质谱，按是否发生器官功能衰竭、胰腺脓肿、腹内压异常、死亡将全部患者分组进行蛋白指纹图谱比较。结果蛋白质峰谱特征显示，在1094U、2751U、5904U处并发胰腺脓肿（13例）的重症胰腺炎患者峰值（13．21±3．73，45．62±10．31，48．37±9．24）明显高于未并发胰腺脓肿组（70例）（4．33±1．79，8．87±3．21，4．45±1．59），差异有统计学意义，均P〈0．05。在635U并发器官功能衰竭组（11例）峰值（8．56±3．21）明显低于未并发器官功能衰竭组（12例）（37．82±12．65）；而在4103U、4187U处并发器官功能衰竭组（21．63±8．23，9．81±2．32）峰值则高于未并发器官功能衰竭组（3．32±1．29，1．14±0．49）。在4173U处并发腹内压增高组（10例）峰值（8．94±3．58）明显高于无腹内压增高组（13例）（1．97±0．73）；而在5635U处并发腹内压增高组峰值（0．62±0．23）则低于无腹内压增高组（15．78±6．34）。2例死亡患者蛋白指纹表现为血清蛋白全面合成功能减退，峰值降低。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记蛋白，为急性重症胰腺炎并发症的早期诊断与治疗提供了新的路径，对急性重症胰腺炎预后评估具有重要意义。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在血液系统疾病中的应用

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术是当前临床蛋白质组学研究中比较理想的技术平台,文章介绍该技术在评价铁代谢紊乱性疾病与Hepcidin之间关系和戈谢病与CCL18之间关系方面的应用,以及该技术在发现、诊断、治疗管理、病情判定、预后评估血栓性血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性移植物抗宿主病等多种血液系统疾病中的应用。

应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型

目的比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型。结果非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

表面增强激光解析电离化飞行时间质谱在肿瘤(癌)诊断中的应用

表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(Surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrome-try,SELDI-TOF-MS)技术具有高通量、快速、高灵敏性的优点,通过差异蛋白质组学研究,将新的标志物单独、联合或结合已知标志物用于肿瘤诊断,具有较高的敏感性和特异性,在肿瘤早期诊断、分级、筛查方面具有良好的应用前景。本文就SELDI-TOF-MS的原理、特性及其在肿瘤诊断中的应用作一综述。

应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术筛选特发性肺纤维化的差异蛋白

工学校目的筛查特发性肺纤维化（IPF）患者支气管肺泡灌洗液（BALF）和血清中的差异蛋白，以期发现对诊断有价值的生物标志物。方法应用表面加强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术对34例IPF患者（IPF组）和25例非吸烟健康者（对照组）血清和BALF进行检测获得蛋白质指纹图谱，用生物标志物模式软件、生物标志物导向软件对测得的数据进行处理。结果BALF中共检测出247个蛋白峰，与对照组比较，IPF组13个蛋白质峰差异有统计学意义，其中7个标志物峰强度显著增加，质荷比分别为2240．57、3459．32、3501．78、4146．50、4516．51、4615．88、5651．26（均P〈0．01）；6个标志物峰强度显著下降，质荷比分别为4989．91、5043．68、6968．76、11687．70、11782．10、14733．30（均P〈0．01）。血清中共检测出142个蛋白峰，与对照组比较，IPF组9个蛋白质峰差异有统计学意义，且9个标志物峰强度均显著增加，质荷比分别为3382．59、3453．39、4608．28、5825．48、8936．76、9164．27、11525．30、11689．40、11886．00（P〈0．05或P〈0．01）。结论SELDI—TOF—MS技术用于IPF患者BALF和血清蛋白质谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白，为进一步发现对IPF诊断有价值的生物标志物提供了实验基础。

表面加强激光解析电离蛋白质谱技术在乳腺癌血清学诊断中的应用

目的探讨血清表面加强激光解析电离（SELDI）蛋白质谱技术在乳腺癌诊断方面的应用。方法用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）及WCX2蛋白获得病理确诊的101例乳腺癌患者手术前和45名健康人的血清蛋白指纹图谱，用Biomarker Wizard和BPS软件分析差异蛋白，建立乳腺癌的分类树诊断模型，并对其进行盲法验证。结果乳腺癌组与健康对照组共有49个蛋白质差异有统计学意义（P〈0．05）；以其中3个蛋白质生物标志物（M／Z：5627、8124和2864）组建的诊断模型检测正确率为95％（139／146）。经盲法验证，其灵敏度为97％（98／101），特异度为91％（4l／45）。结论SELDI蛋白质谱技术可以有效的区分乳腺癌患者和健康人，其灵敏度和特异性高。SELDI—TOF—MS在乳腺癌的诊断及乳腺癌特异性的生物标志物分子的筛选方面具有一定的应用价值。

肝癌、肝硬化患者前期处理后腹水中差异蛋白质组学分析及意义

目的分析肝癌、肝硬化患者腹水前期处理后的蛋白质组学变化,并探讨其意义。方法采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS技术)对27例肝癌(肝癌组)、46例肝硬化患者(肝硬化组)腹水前期处理后蛋白质进行检测,对蛋白质波谱进行分析。结果肝癌组在7 852 Da、11 467 Da蛋白质表达量高于肝硬化组,在4 475 Da蛋白质表达量低于肝硬化组(P均<0.05)。SELDI-TOF-MS技术检测7 852 Da、11 467 Da、4 475 Da区分肝癌和肝硬化灵敏度为81.48%(22/27),特异性为86.96%(40/46)。结论腹水经前期处理后,肝癌、肝硬化患者在7 852 Da、11 467 Da、4 475 Da蛋白质峰有显著差异,通过这三个蛋白质峰检测可以区分肝癌与肝硬化。

孕中期血清差异蛋白变化在妊娠期高血压疾病的意义

目的 探讨血清差异表达蛋白质变化在孕中期妊娠期高血压疾病中的意义.方法 对接受产前检查及住院分娩的30例产妇采用蛋白芯片和表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术测定其血清蛋白质谱图.分别比较7例孕中期妊娠期高血压疾病患者（简称妊高症）和正常妊娠孕妇及8例晚孕期妊娠期高血压疾病患者和晚孕期正常妊娠孕妇血清蛋白质谱图的差异.结果 孕中期妊高症组血清蛋白质谱在1 000～20 000范围内有4个不同的蛋白质谱,质荷比为1 539、3 887、5 245、5 960,相对含量均低于正常妊娠组;孕晚期妊高症组有3个不同的蛋白质谱,质荷比1 539、3 887、5 960,相对含量均低于正常妊娠组,差异均有统计学意义;孕中期妊高症组血清中3个不同的蛋白质谱,两组质荷比为1 539、5 960的相对含量比较,差异有统计学意义;蛋白质谱3 887的相对含量比较,差异无统计学意义.结论 妊娠期高血压疾病患者与正常妊娠孕妇血清蛋白质谱有差异,存在差异的蛋白质有可能成为妊娠期高血压疾病早期筛查的血清标志物.

多西环素作用前后小鼠胸腺上皮细胞蛋白质表达谱的变化

目的:探讨多西环素(doxycycline,Dox)作用前后小鼠胸腺上皮MTEC1细胞系蛋白质表达谱的差异,为阐明多西环素对胸腺细胞作用的机制奠定基础。方法:利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析H4和WCX2芯片捕获的多西环素作用前后差异蛋白表达谱,然后利用蛋白质序列数据库搜索和分析表达改变的蛋白。结果:SELDI-TOF蛋白芯片中H4芯片捕获了13种表达增高蛋白,5种蛋白表达降低。WCX2芯片捕获了14种表达增高蛋白,4种蛋白表达降低。共有5种蛋白在两种芯片中均显示表达增高,其中与细胞增殖和凋亡有关的蛋白为硫氧还原蛋白(thioredoxin,Trx)。结论:多西环素对MTEC1细胞的蛋白表达具有调控作用,有可能促进MTEC1细胞抵抗凋亡。

原发性肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白表达差异

目的探讨原发性肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白差异表达,并分析其意义。方法将154例原发性肝癌患者按中医辨证分为肝郁证(37例)、脾虚证(45例)、湿热证(18例)、血瘀证(28例)及阴虚证(26例),应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱法(surface enhanced laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析其血清蛋白指纹图谱,并结合中医证候特点,探讨肝癌介入治疗围手术期不同中医证型的血清蛋白差异表达。结果介入前1周,M/Z为3392、4970、5911、6200、8575Da的血清蛋白峰在各证型间的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);上述5个差异蛋白峰同时出现于脾虚证和血瘀证中。介入后1周,阴虚证M/Z为8575Da的血清蛋白峰表达下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌介入治疗围手术期不同证型间出现血清差异蛋白质峰。

蛋白指纹图谱在原发性肝癌中医辨证分型应用的初步研究

目的应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测肝细胞性肝癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选特异性候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测56例肝郁气滞证和55例肝胆湿热证肝癌患者血清,获得弱阳子交换型蛋白质芯片(CM10)蛋白表达图谱,用Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果应用CM10在肝郁气滞证和肝胆湿热证肝癌血清中检测到在不同质荷比(M/Z)有2个差异蛋白质峰8 576 Da、8 780 Da,其蛋白质含量有显著性差异(P<0.05)。经蛋白质数据库搜索,与这2种差异蛋白质分子量最接近的蛋白质分别为细胞色素C6和细胞色素C氧化酶合成因子5。结论应用SEIDI-T0F-MS可以筛选不同中医证型肝癌患者血清特异性生物标志物,检测到的2个差异蛋白质可能是鉴别肝郁气滞型与肝胆湿热型的血清生物学指标。

SELDI-TOF-MS技术筛选鼻咽癌血清肿瘤标志物

目的筛选鼻咽癌患者血清蛋白差异表达并建立诊断模型,分析不同临床特征患者的血清蛋白质谱差异。方法应用SELDI技术分析102例鼻咽癌患者及118例健康对照的血清样本,Bio-marker Wizard和Biomarker Pattern软件分析两组之间的差异,建立分类树诊断模型并进行盲筛验证;进一步分析鼻咽癌不同临床分型及EB病毒感染状态对患者血清蛋白质表达谱的影响。结果发现鼻咽癌与健康对照之间有25个血清蛋白质谱峰差异有统计学意义(P<0.01),13个蛋白峰表达下调,12个蛋白峰表达上调。经Biomarker Pattern软件建立分类树模型,盲法验证其敏感度为97.56%,特异性为88.89%,准确率达92.63%;上行型和下行型鼻咽癌之间发现M/Z为10286Da、7569Da及8149Da的3个血清蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05);EB阳性和EB阴性鼻咽癌间M/Z为9354Da及4596Da的2个血清蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SELDI-TOF-MS技术可筛选出鼻咽癌差异性蛋白并建立鼻咽癌诊断的分类树模型,有望成为鼻咽癌早期诊断的辅助指标;并且用SEDLI技术可以发现一些与鼻咽癌临床特征相关的血清蛋白差异峰。

SELDI-TOF-MS技术筛查预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物

目的:应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)比较乳腺癌曲妥珠单抗治疗耐药患者与非耐药患者血清蛋白质谱的差异,筛选预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的标志蛋白。方法:选择福建省肿瘤医院2008年1月至2009年10月曲妥珠单抗治疗的乳腺癌患者35例,以临床界定标准将患者分为耐药组(11例)和非耐药组(24例)。应用SELDI-TOF-MS技术检测两组患者外周血蛋白质表达谱的差异,以差异蛋白峰值比1.5为耐药的蛋白界定标准,以此标准判定患者耐药与否。分析该蛋白界定标准评判曲妥珠单抗耐药的灵敏度、特异度以及阳性预测值、阴性预测值。结果:以临床界定标准评判的曲妥珠单抗耐药的发生与患者年龄、分期、腋窝淋巴结转移和ER/PR双阴无关。临床耐药组和非耐药组患者外周血蛋白质表达谱比较显示,耐药患者的蛋白质峰7971Da、9284Da显著降低(P<0.05)。以蛋白界定标准评判患者曲妥单抗耐药与非耐药,7971Da评判时的灵敏度为81.82%(9/11)、特异度为83.33%(20/24)、阳性预测值为69.23%(9/13)、阴性预测值为90.91%(20/22);以9284Da评判时的灵敏度为72.73%(8/11)、特异度为79.17%(19/24)、阳性预测值为61.54%(8/13)、阴性预测值为86.36%(19/22)。结论:应用SELDI-TOF-MS技术检测的差异蛋白质峰7971Da、9284Da似可作为预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物。

应用SELDI-TOF MS技术分析肝癌血清差异表达蛋白

目的应用蛋白质组学技术分析肝癌血清中差异表达蛋白的临床意义。方法应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDITOFMS)技术,对肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎及健康对照组血清蛋白质进行检测,应用Ciphergen公司软件对蛋白质波谱进行分析。结果质荷比(m/z)为11492.92的蛋白质波峰强度仅肝癌组明显增强,与患者的肝功能、AFP等均无相关性。以波峰的信号噪声比(S/N)大于5为标准,该蛋白质诊断肝癌的灵敏度为50.8%,特异性为95.6%。结论质荷比(m/z)为11492.92的蛋白质可能是肝癌的生物学标志物,对AFP阴性患者的实验室诊断可能具有辅助作用。

SELDI-TOF-MS技术筛选NSCLC血清肿瘤标志物

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)血清蛋白表达谱的改变,筛选并建立NSCLC血清蛋白的差异表达谱。方法应用表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS,简称SELDI-TOF或SELDI)技术,分析100例NSCLC患者和100例正常对照血清,获得蛋白表达图谱。用Biomarker Pattern(BPS)软件分析NSCLC差异蛋白并初步建立诊断模型。通过盲筛进一步验证诊断模型。结果发现NSCLC患者血清与正常人有16个显著差异的蛋白波峰,显著高表达8个(P<0.001)。显著低表达8个(P<0.001)。经BPS软件分析,建立分类树模型,其诊断的灵敏度为100%,特异度为100%。100例样本盲筛验证结果显示,其灵敏度为96.15%,特异度为95.83%。无吸烟史患者较有吸烟史患者血清中显著高表达蛋白质波峰有3个(P<0.05)。鳞癌患者较腺癌患者血清中显著高表达蛋白质波峰有2个(P<0.01)。不同病理分期患者之间未发现差异蛋白峰。结论SELDI-TOF-MS技术可筛选出NSCLC差异性蛋白并建立NSCLC诊断的分类树模型,有望成为NSCLC早期诊断的辅助指标。

肝病良恶性腹腔积液前期处理后差异蛋白质组学分析

目的 分析肝炎后肝硬化及其相关性原发性肝癌患者腹腔积液前期处理后差异蛋白质组学,探讨肝病癌性腹腔积液具有特征性的标志蛋白组合模式.方法 应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术,对46例肝炎后肝硬化（肝硬化腹腔积液组）及27例肝炎后肝硬化相关性原发性肝癌患者（肝癌腹腔积液）腹腔积液前期处理后蛋白质进行检测,对蛋白质波谱进行分析,并寻找合理运算规则以确定能够区分原发性肝癌和肝炎后肝硬化腹腔积液患者的蛋白质组学图谱.结果 浓缩前肝硬化腹腔积液组的蛋白质浓度低于肝癌腹腔积液组[（8 ±4）g/L比（39±4） g/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.浓缩后,肝硬化腹腔积液组蛋白质浓度与肝癌腹腔积液组的蛋白浓度接近[（54±5）g/L比（58±5）g/L],差异无统计学意义（P＞0.05）.离心前,肝癌腹腔积液组腹腔积液细胞计数明显多于肝硬化腹腔积液组[（3146±1362）×10^6/L比（287 ±51）×10^6/L] （P＜0.05）;离心1次后,肝硬化腹腔积液组腹腔积液细胞计数为（9 ±3）×10^6/L,肝癌腹腔积液组腹腔积液细胞计数为（19 ±7）×10^6/L,2组差异无统计学意义（P＞0.05）;离心2次后,2组腹腔积液中细胞计数均为0.在质荷比为11 467、4 475时,肝癌腹腔积液组特征峰表达值均高于肝硬化腹腔积液组,7 852时,肝癌腹腔积液组特征峰表达值低于肝硬化腹腔积液组.SELDI-TOF-MS技术检测肝癌与肝硬化的灵敏度为81.5％（22/27）,特异性为87.0％（40/46）.结论 腹腔积液前期处理能满足SELDI-TOF-MS技术的要求,确立的标志蛋白组合模式的特异性及敏感度较高.

应用SELDI-TOF-MS技术建立SLE患者血清蛋白质指纹图谱筛选模型

目的筛选系统性红斑狼疮(SLE)血清蛋白质指纹图谱模型,并探讨其意义。方法用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SEIDI-TOF-MS)技术获得SLE、类风湿关节炎患者(RA组)、健康人群(对照组)血清中的蛋白质谱,用计算机软件比较分析,建立SLE血清蛋白质指纹图谱筛选模型,并验证该模型诊断SLE的灵敏度和特异性。结果SLE组与非SLE组共有11种蛋白质表达有显著性差异;以其中4个蛋白质生物标志物(5 739 Da、10 832 Da、4 650 Da、15 797 Da)组建的筛选模型,经双盲法验证其灵敏度为84.4%,特异性为90.3%。结论应用SEIDI-TOF-MS技术建立的血清蛋白质指纹图谱模型在SLE的早期诊断中具有一定价值。

应用蛋白质芯片技术筛选阿尔茨海默病血清标志物

目的用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片检测阿尔茨海默病(AD)患者血清蛋白质指纹图谱,探讨诊断模型在AD诊断中的临床应用价值。方法用SELDI-TOF-MS技术和CM10蛋白质芯片检测45例患者AD和60例健康老人的血清蛋白质指纹图谱,并建立诊断模型。结果筛选出11个有明显表达差异的蛋白质,其中以质荷比(m/z)分别为4604.2、7775.7和9200.6的3个蛋白质建立的诊断模型对AD检测的灵敏度为88.9%(40/45),特异性为85.0%(51/60),总准确率为86.67%(91/105)。结论 SELDI-TOF-MS对AD诊断具有较高的敏感性和特异性,在AD的诊断及标志物筛选等方面具有较好的诊断价值。