表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在急性重症胰腺炎预后相关蛋白质谱检测中的应用

目的应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-Ms）技术检测急性重症胰腺炎不同预后相关蛋白质谱，探讨急性重症胰腺炎轻重程度及预后评估的新方法。方法用SELDI-TOF-MS方法检测浙江省人民医院2008年3月至2010年10月23例急性重症胰腺炎患者的蛋白质谱，按是否发生器官功能衰竭、胰腺脓肿、腹内压异常、死亡将全部患者分组进行蛋白指纹图谱比较。结果蛋白质峰谱特征显示，在1094U、2751U、5904U处并发胰腺脓肿（13例）的重症胰腺炎患者峰值（13．21±3．73，45．62±10．31，48．37±9．24）明显高于未并发胰腺脓肿组（70例）（4．33±1．79，8．87±3．21，4．45±1．59），差异有统计学意义，均P〈0．05。在635U并发器官功能衰竭组（11例）峰值（8．56±3．21）明显低于未并发器官功能衰竭组（12例）（37．82±12．65）；而在4103U、4187U处并发器官功能衰竭组（21．63±8．23，9．81±2．32）峰值则高于未并发器官功能衰竭组（3．32±1．29，1．14±0．49）。在4173U处并发腹内压增高组（10例）峰值（8．94±3．58）明显高于无腹内压增高组（13例）（1．97±0．73）；而在5635U处并发腹内压增高组峰值（0．62±0．23）则低于无腹内压增高组（15．78±6．34）。2例死亡患者蛋白指纹表现为血清蛋白全面合成功能减退，峰值降低。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记蛋白，为急性重症胰腺炎并发症的早期诊断与治疗提供了新的路径，对急性重症胰腺炎预后评估具有重要意义。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在血液系统疾病中的应用

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术是当前临床蛋白质组学研究中比较理想的技术平台,文章介绍该技术在评价铁代谢紊乱性疾病与Hepcidin之间关系和戈谢病与CCL18之间关系方面的应用,以及该技术在发现、诊断、治疗管理、病情判定、预后评估血栓性血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性移植物抗宿主病等多种血液系统疾病中的应用。

应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型

目的比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型。结果非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术及其在系统性红斑狼疮诊断中的研究进展

表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术(SELDI-TOF-MS)是近期发展起来的针对蛋白质组学检测和研究的新技术。该技术具有高通量、高灵敏度、高效率等特点,在基础研究和临床应用方面发展迅速。系统性红斑狼疮(SLE)是最常见的自身免疫性疾病之一。临床上多采用自身抗体检测来作为SLE的辅助诊断,但尚无一种自身抗体检测同时具有高的敏感性和特异性。SELDI-TOF-MS的出现弥补了SLE早期辅助诊断的不足。本文就其原理和目前在系统性红斑狼疮早期诊断中的研究进展作一综述。

SELDI-TOF-MS技术建立早期肝硬化患者血清蛋白质谱筛选模型

目的:比较早期肝硬化患者和健康人的血清蛋白质谱并建立相关血清诊断模型。方法:用表面增强激光解吸电离—飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及CM10蛋白芯片对50例早期肝硬化患者、50例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析。结果:早期肝硬化患者与健康人对照组共有25个差异有统计学意义的蛋白质峰;建立诊断模型的灵敏度为96%(48/50),特异度为90%(45/50),准确率为93%(93/100)。结论:两组人的蛋白质谱有明显的差异,建立的诊断模型能够区分早期肝硬化患者与健康人,SELDI-TOF-MS技术在诊断及特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

应用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱对结肠癌组织蛋白质的初步分析

[目的]检测结肠癌组织与正常结肠黏膜组织中差异蛋白质的表达,寻找与结肠癌相关的肿瘤标记物。[方法]采用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF MS)对42例结肠癌组织及其配对的正常结肠黏膜组织进行蛋白质指纹图谱检测。[结果]结肠癌与正常对照共有38种蛋白质质谱峰强度差异有统计学意义(P<0.01),有分类意义的蛋白质有7种,质核比(M/Z)为M1678.47、M2182.19、M3358.44的蛋白质在大肠癌组织中低表达,M/Z为M1688.43、M2718.72、M3241.60、M3893.13的蛋白质在大肠癌组织中高表达。[结论]利用SELDI-TOF MS技术筛选出的具有分类意义的7种蛋白质,有可能成为大肠癌诊断及预后判断的一组生物学指标。

表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术的质量控制与标准化

表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDITOFMS)技术是近年兴起的蛋白质组学研究前沿技术,其标准化和质量控制是其顺利应用到临床的关键。我们对SELDITOFMS检测样本采集与制备、试剂的选择与保存、实验仪器的校准与维护;实验结果重复性验证与分析;数据处理与分析的标准化方法的选择、SELDITOFMS技术系统标准化进行探讨和评价。

SELDI-TOF-MS技术筛选鼻咽癌血清肿瘤标志物

目的筛选鼻咽癌患者血清蛋白差异表达并建立诊断模型,分析不同临床特征患者的血清蛋白质谱差异。方法应用SELDI技术分析102例鼻咽癌患者及118例健康对照的血清样本,Bio-marker Wizard和Biomarker Pattern软件分析两组之间的差异,建立分类树诊断模型并进行盲筛验证;进一步分析鼻咽癌不同临床分型及EB病毒感染状态对患者血清蛋白质表达谱的影响。结果发现鼻咽癌与健康对照之间有25个血清蛋白质谱峰差异有统计学意义(P<0.01),13个蛋白峰表达下调,12个蛋白峰表达上调。经Biomarker Pattern软件建立分类树模型,盲法验证其敏感度为97.56%,特异性为88.89%,准确率达92.63%;上行型和下行型鼻咽癌之间发现M/Z为10286Da、7569Da及8149Da的3个血清蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05);EB阳性和EB阴性鼻咽癌间M/Z为9354Da及4596Da的2个血清蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SELDI-TOF-MS技术可筛选出鼻咽癌差异性蛋白并建立鼻咽癌诊断的分类树模型,有望成为鼻咽癌早期诊断的辅助指标;并且用SEDLI技术可以发现一些与鼻咽癌临床特征相关的血清蛋白差异峰。

SELDI-TOF-MS技术筛查预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物

目的:应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)比较乳腺癌曲妥珠单抗治疗耐药患者与非耐药患者血清蛋白质谱的差异,筛选预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的标志蛋白。方法:选择福建省肿瘤医院2008年1月至2009年10月曲妥珠单抗治疗的乳腺癌患者35例,以临床界定标准将患者分为耐药组(11例)和非耐药组(24例)。应用SELDI-TOF-MS技术检测两组患者外周血蛋白质表达谱的差异,以差异蛋白峰值比1.5为耐药的蛋白界定标准,以此标准判定患者耐药与否。分析该蛋白界定标准评判曲妥珠单抗耐药的灵敏度、特异度以及阳性预测值、阴性预测值。结果:以临床界定标准评判的曲妥珠单抗耐药的发生与患者年龄、分期、腋窝淋巴结转移和ER/PR双阴无关。临床耐药组和非耐药组患者外周血蛋白质表达谱比较显示,耐药患者的蛋白质峰7971Da、9284Da显著降低(P<0.05)。以蛋白界定标准评判患者曲妥单抗耐药与非耐药,7971Da评判时的灵敏度为81.82%(9/11)、特异度为83.33%(20/24)、阳性预测值为69.23%(9/13)、阴性预测值为90.91%(20/22);以9284Da评判时的灵敏度为72.73%(8/11)、特异度为79.17%(19/24)、阳性预测值为61.54%(8/13)、阴性预测值为86.36%(19/22)。结论:应用SELDI-TOF-MS技术检测的差异蛋白质峰7971Da、9284Da似可作为预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物。

应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测结直肠癌肝转移

目的寻找与结直肠癌肝转移相关的蛋白质，建立结直肠癌肝转移的血清蛋白质指纹图谱诊断预测模型。方法应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI—TOF—MS）技术，对36例结直肠癌无肝转移患者和36例结直肠癌伴肝转移患者的术前空腹外周静脉血标本，进行蛋白质指纹图谱测定，运用Biomarker Wizard软件，建立结直肠癌肝转移的诊断预测模型。用44例结直肠癌患者和44例结直肠癌伴肝转移患者，对所建立的诊断预测模型进行盲法验证。结果比较36例结直肠癌无肝转移患者和36例结直肠癌伴肝转移患者的血清蛋白质，得到10个差异蛋白峰（P〈0．05），质荷比分别为2398、2814、4084、4289、4465、6422、6619、11482、11649和13714。若以P〈0．01为标准，则有3个蛋白质峰差异有统计学意义，质荷比分别为2398、2814和13714。建立终末节点数为9的诊断预测模型，其敏感性为91．7％，特异性为97．2％。验证结果显示，敏感性为75．0％，特异性为81．8％。结论运用SELDI—TOF—MS技术所建立的血清蛋白指纹图谱模型，在预测结直肠癌肝转移中具有非常高的敏感性与特异性，可望成为预测诊断工具。

SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质,从而找出更好的生物标记物,用于检测胃炎。方法用SELDI-TOF-MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱,建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者,灵敏度为96.66%(29/30),特异性为93.55%(29/31)。2个蛋白质峰(5910和6440m/z)组合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96.6%(29/30),特异性为90.9%(30/33)。结论SELDI-TOF-MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌遗传性血清蛋白标志物

目的:采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption inhibition time of flight ionization mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)检测肝癌易发家系患者和无癌家系患者血清蛋白生物标志物,比较两者间的蛋白差异,建立筛选血清蛋白质图谱模型并初步验证.方法:选择30例肝癌易发家系患者,30例无癌家系患者,应用SELDI-TOF-MS技术及相应的计算机软件进行比较分析,检测肝癌易发家系患者血清蛋白质的特异性生物标志,建立肝癌易发家系患者的筛选模型,并对其进行了双盲法验证.结果:肝癌易发家系组与对照组共有20个蛋白质差异有显著性,以其中4个蛋白标志物(9645.48、3960.65、7895.66和5916.07 kDa),建立的筛选模型检测灵敏度为93%(28/30),特异性为90%(27/30),准确率为92%(55/60).盲法验证,灵敏度为92%(23/25),特异性为90%(18/20).结论:SELDI-TOF-MS技术具有高灵敏度和特异性,在肝癌易发家系的血清蛋白特异性生物标志物的筛选等方面具有较好的应用前景.

应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术筛选特发性肺纤维化的差异蛋白

工学校目的筛查特发性肺纤维化（IPF）患者支气管肺泡灌洗液（BALF）和血清中的差异蛋白，以期发现对诊断有价值的生物标志物。方法应用表面加强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术对34例IPF患者（IPF组）和25例非吸烟健康者（对照组）血清和BALF进行检测获得蛋白质指纹图谱，用生物标志物模式软件、生物标志物导向软件对测得的数据进行处理。结果BALF中共检测出247个蛋白峰，与对照组比较，IPF组13个蛋白质峰差异有统计学意义，其中7个标志物峰强度显著增加，质荷比分别为2240．57、3459．32、3501．78、4146．50、4516．51、4615．88、5651．26（均P〈0．01）；6个标志物峰强度显著下降，质荷比分别为4989．91、5043．68、6968．76、11687．70、11782．10、14733．30（均P〈0．01）。血清中共检测出142个蛋白峰，与对照组比较，IPF组9个蛋白质峰差异有统计学意义，且9个标志物峰强度均显著增加，质荷比分别为3382．59、3453．39、4608．28、5825．48、8936．76、9164．27、11525．30、11689．40、11886．00（P〈0．05或P〈0．01）。结论SELDI—TOF—MS技术用于IPF患者BALF和血清蛋白质谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白，为进一步发现对IPF诊断有价值的生物标志物提供了实验基础。

应用SELDI-TOF-MS技术建立SLE患者血清蛋白质指纹图谱筛选模型

目的筛选系统性红斑狼疮(SLE)血清蛋白质指纹图谱模型,并探讨其意义。方法用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SEIDI-TOF-MS)技术获得SLE、类风湿关节炎患者(RA组)、健康人群(对照组)血清中的蛋白质谱,用计算机软件比较分析,建立SLE血清蛋白质指纹图谱筛选模型,并验证该模型诊断SLE的灵敏度和特异性。结果SLE组与非SLE组共有11种蛋白质表达有显著性差异;以其中4个蛋白质生物标志物(5 739 Da、10 832 Da、4 650 Da、15 797 Da)组建的筛选模型,经双盲法验证其灵敏度为84.4%,特异性为90.3%。结论应用SEIDI-TOF-MS技术建立的血清蛋白质指纹图谱模型在SLE的早期诊断中具有一定价值。

SELDI-TOF-MS筛选微小病变型肾病综合征尿液生物标志物

目的探讨应用优化的表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)进行微小病变型肾病综合征(minimal-changed nephrotic syndrome,MCNS)大鼠尿液生物标志物筛选的意义。方法 SD大鼠30只随机分为正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)和强的松治疗组(n=10)。除正常对照组外,其余大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素5.5mg/kg复制MCNS模型,造模10d后分别予以强的松和蒸馏水灌胃治疗。21d后收集大鼠尿液,经弱阳离子交换芯片CM10捕获蛋白质,应用SELDI-TOF-MS获取3组大鼠的尿液蛋白质指纹图谱,采用Biomarker wizard软件比对分析差异蛋白。结果优化实验条件后获得较理想的尿液蛋白质指纹图谱,质控峰强度的平均CV值为18.0%(7.50%～35.89%)。在模型对照组与正常对照组之间检测到不同质荷比处有33个具统计学意义的差异蛋白峰(P<0.05),其中21个蛋白表达上调,12个蛋白表达下调。在正常对照组、模型对照组与强的松治疗组之间有6个蛋白质表达存在差异(P<0.05),这些差异蛋白峰在模型对照组中高表达,而在强的松治疗组中蛋白表达下调,峰强度接近正常对照组。结论通过优化实验条件并实行质量控制,SELDI-TOF-MS可为MCNS大鼠尿液生物标志物的筛选提供一个可行的检测途径。所获得的差异性蛋白峰对MCNS的早期诊断、治疗监测和寻找药物治疗的靶目标具有重要的意义。

SELDI-TOF-MS技术用于结直肠癌诊断意义的分析

目的探讨SELDI蛋白芯片技术在结直肠癌患者中的诊断价值。方法应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪和CM10芯片检测结直肠癌患者和构成比相似的对照组外周血清,筛选出结直肠癌特异蛋白峰并初步建立诊断模型。通过盲筛进一步验证诊断模型。同时收集上述结直肠癌患者根治术后7d的55例血清,观察手术前后有无差异蛋白峰。结果筛选出的特异蛋白峰质荷比为3 413,4 101,4 191,4 306,4 366,6 453,6 645,8 586,8 709,13 786,13 996,5 647,7 993和15 960Da,初步建立诊断模型。利用该模型对结直肠癌进行盲法验证,诊断的准确率为91.11%,灵敏度为88.89%,特异度为93.33%。根治术前后未发现差异蛋白峰。结论 SELDI技术可以筛选出结直肠癌患者血清特异蛋白并建立诊断分类树模型,有望成为结直肠癌早期诊断的辅助指标。

SELDI-TOF-MS技术筛选鼻型NK/T细胞淋巴瘤血清分子标志物的研究

目的本文将SELDI-TOF-MS技术应用于鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者与健康人的血清蛋白质图谱的建立,寻找血清差异表达蛋白并建立诊断初步模型,分析可能的肿瘤诊断标志物。方法采用SELDI质谱技术,将血清蛋白质结合于弱阳离子芯片上,建立30例鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者以及58例健康对照人群的血清蛋白质图谱,应用Biomarker Wizard和Biomarker Pattern软件分析2组图谱之间的差异,通过差异峰建立分类树诊断模型,随机选取21例NK/T细胞淋巴瘤和25例健康对照进行盲筛。结果在鼻型NK/T细胞淋巴瘤和健康对照人群的血清蛋白质峰中有41个峰表达差异有统计学意义(P<0.05),经Biomarker Pattern软件和分类回归树的统计原理筛选出最佳的组合模型,联合其中的2个质荷比为5 641、27 427的差异蛋白峰建立淋巴瘤诊断模型,此分类树模型可正确划分93.10%(27/29)的淋巴瘤患者和96.30%(52/54)的健康人。盲筛验证的敏感性为95.24%(20/21),特异性为100.00%(25/25)。结论 SELDITOF-MS技术可用于鉴别鼻型NK/T细胞淋巴瘤,其建立的分类树模型有望成为诊断鼻型NK/T细胞淋巴瘤的辅助指标。

运用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术建立结直肠癌预测诊断模型

目的寻找与结直肠癌相关的蛋白质并建立结直肠癌血清蛋白指纹图谱诊断预测模型。方法随机选取结直肠癌病例36例（结直肠癌组）和疝或行胆囊择期手术的患者36例（对照组），术前静脉采血，采用弱阳离子交换蛋白质芯片（CM10），经表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI—TOF—MS）技术测定，建立结直肠癌的血清蛋白指纹图谱诊断预测模型；选取88例结直肠癌患者和44例正常对照进行盲法验证。结果通过两组比较，得到5个差异蛋白峰，并以此建立诊断预测模型，其敏感性为100％，特异性为97．2％。盲法验证显示敏感性为71．6％，特异性为72．7％。其中质荷比为8908与13707的蛋白均存在于结直肠癌组和正常组的比较中，提示上述蛋白质与结直肠癌相关。结论运用SELDI—TOF—MS技术建立的血清蛋白指纹图谱模型对诊断结直肠癌具有较高的敏感性与特异性。质荷比为8908与13707的蛋白可能成为结直肠癌的肿瘤标记物。

表面加强激光解析电离蛋白质谱技术在乳腺癌血清学诊断中的应用

目的探讨血清表面加强激光解析电离（SELDI）蛋白质谱技术在乳腺癌诊断方面的应用。方法用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）及WCX2蛋白获得病理确诊的101例乳腺癌患者手术前和45名健康人的血清蛋白指纹图谱，用Biomarker Wizard和BPS软件分析差异蛋白，建立乳腺癌的分类树诊断模型，并对其进行盲法验证。结果乳腺癌组与健康对照组共有49个蛋白质差异有统计学意义（P〈0．05）；以其中3个蛋白质生物标志物（M／Z：5627、8124和2864）组建的诊断模型检测正确率为95％（139／146）。经盲法验证，其灵敏度为97％（98／101），特异度为91％（4l／45）。结论SELDI蛋白质谱技术可以有效的区分乳腺癌患者和健康人，其灵敏度和特异性高。SELDI—TOF—MS在乳腺癌的诊断及乳腺癌特异性的生物标志物分子的筛选方面具有一定的应用价值。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白

【目的】通过SELDI-TOF-MS技术筛选体外培养人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白。【方法】采用体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性;SELDI-TOF-MS技术结合CM-10芯片检测Bel-7402与Bel-FU蛋白质指纹图谱。【结果】细胞Bel-FU对于5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6倍、3.9倍、37.2倍、16.5倍、3.7倍。在质荷比(M/Z)2 000～50 000的范围内,Bel-FU与Bel-7402间共检测到8个差异蛋白(P<0.05),其中上调蛋白有3个,下调蛋白有5个。【结论】SELDI-TOF-MS技术为筛选肝癌MDR蛋白标志物提供了一个简便、有效的方法。