表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在急性重症胰腺炎预后相关蛋白质谱检测中的应用

目的应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-Ms）技术检测急性重症胰腺炎不同预后相关蛋白质谱，探讨急性重症胰腺炎轻重程度及预后评估的新方法。方法用SELDI-TOF-MS方法检测浙江省人民医院2008年3月至2010年10月23例急性重症胰腺炎患者的蛋白质谱，按是否发生器官功能衰竭、胰腺脓肿、腹内压异常、死亡将全部患者分组进行蛋白指纹图谱比较。结果蛋白质峰谱特征显示，在1094U、2751U、5904U处并发胰腺脓肿（13例）的重症胰腺炎患者峰值（13．21±3．73，45．62±10．31，48．37±9．24）明显高于未并发胰腺脓肿组（70例）（4．33±1．79，8．87±3．21，4．45±1．59），差异有统计学意义，均P〈0．05。在635U并发器官功能衰竭组（11例）峰值（8．56±3．21）明显低于未并发器官功能衰竭组（12例）（37．82±12．65）；而在4103U、4187U处并发器官功能衰竭组（21．63±8．23，9．81±2．32）峰值则高于未并发器官功能衰竭组（3．32±1．29，1．14±0．49）。在4173U处并发腹内压增高组（10例）峰值（8．94±3．58）明显高于无腹内压增高组（13例）（1．97±0．73）；而在5635U处并发腹内压增高组峰值（0．62±0．23）则低于无腹内压增高组（15．78±6．34）。2例死亡患者蛋白指纹表现为血清蛋白全面合成功能减退，峰值降低。结论蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记蛋白，为急性重症胰腺炎并发症的早期诊断与治疗提供了新的路径，对急性重症胰腺炎预后评估具有重要意义。

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术在血液系统疾病中的应用

表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术是当前临床蛋白质组学研究中比较理想的技术平台,文章介绍该技术在评价铁代谢紊乱性疾病与Hepcidin之间关系和戈谢病与CCL18之间关系方面的应用,以及该技术在发现、诊断、治疗管理、病情判定、预后评估血栓性血小板减少性紫癜、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性移植物抗宿主病等多种血液系统疾病中的应用。

应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型

目的比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型。方法用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型。结果非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70)。结论建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术及其在系统性红斑狼疮诊断中的研究进展

表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术(SELDI-TOF-MS)是近期发展起来的针对蛋白质组学检测和研究的新技术。该技术具有高通量、高灵敏度、高效率等特点,在基础研究和临床应用方面发展迅速。系统性红斑狼疮(SLE)是最常见的自身免疫性疾病之一。临床上多采用自身抗体检测来作为SLE的辅助诊断,但尚无一种自身抗体检测同时具有高的敏感性和特异性。SELDI-TOF-MS的出现弥补了SLE早期辅助诊断的不足。本文就其原理和目前在系统性红斑狼疮早期诊断中的研究进展作一综述。

基质辅助激光解析电离——飞行时间质谱仪的研制及在临床微生物鉴定中的应用

目的探究基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪在临床微生物鉴定中的应用,为真菌微生物的鉴定提供临床技术支持。方法选取于2015年3月到2017年2月我院临床采集的真菌作为实验标本,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种进行鉴定,分析基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对菌种鉴定的检查效果。结果300株真菌中有290株(96.67%)经鉴定后可以正确归类到种水平,6株(2%)未能给出鉴定成果,4株(1.33%)鉴定结果出现错误,且正确率与传统方法相比差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪稳定性高,可重复性好,并且具有快速准确的优点,是临床鉴定微生物种类的一种快速可靠的高通量方法,可以为临床的微生物鉴定提供一定的技术支持。

应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测结直肠癌肝转移

目的寻找与结直肠癌肝转移相关的蛋白质，建立结直肠癌肝转移的血清蛋白质指纹图谱诊断预测模型。方法应用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI—TOF—MS）技术，对36例结直肠癌无肝转移患者和36例结直肠癌伴肝转移患者的术前空腹外周静脉血标本，进行蛋白质指纹图谱测定，运用Biomarker Wizard软件，建立结直肠癌肝转移的诊断预测模型。用44例结直肠癌患者和44例结直肠癌伴肝转移患者，对所建立的诊断预测模型进行盲法验证。结果比较36例结直肠癌无肝转移患者和36例结直肠癌伴肝转移患者的血清蛋白质，得到10个差异蛋白峰（P〈0．05），质荷比分别为2398、2814、4084、4289、4465、6422、6619、11482、11649和13714。若以P〈0．01为标准，则有3个蛋白质峰差异有统计学意义，质荷比分别为2398、2814和13714。建立终末节点数为9的诊断预测模型，其敏感性为91．7％，特异性为97．2％。验证结果显示，敏感性为75．0％，特异性为81．8％。结论运用SELDI—TOF—MS技术所建立的血清蛋白指纹图谱模型，在预测结直肠癌肝转移中具有非常高的敏感性与特异性，可望成为预测诊断工具。

应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术筛选特发性肺纤维化的差异蛋白

工学校目的筛查特发性肺纤维化（IPF）患者支气管肺泡灌洗液（BALF）和血清中的差异蛋白，以期发现对诊断有价值的生物标志物。方法应用表面加强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术对34例IPF患者（IPF组）和25例非吸烟健康者（对照组）血清和BALF进行检测获得蛋白质指纹图谱，用生物标志物模式软件、生物标志物导向软件对测得的数据进行处理。结果BALF中共检测出247个蛋白峰，与对照组比较，IPF组13个蛋白质峰差异有统计学意义，其中7个标志物峰强度显著增加，质荷比分别为2240．57、3459．32、3501．78、4146．50、4516．51、4615．88、5651．26（均P〈0．01）；6个标志物峰强度显著下降，质荷比分别为4989．91、5043．68、6968．76、11687．70、11782．10、14733．30（均P〈0．01）。血清中共检测出142个蛋白峰，与对照组比较，IPF组9个蛋白质峰差异有统计学意义，且9个标志物峰强度均显著增加，质荷比分别为3382．59、3453．39、4608．28、5825．48、8936．76、9164．27、11525．30、11689．40、11886．00（P〈0．05或P〈0．01）。结论SELDI—TOF—MS技术用于IPF患者BALF和血清蛋白质谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白，为进一步发现对IPF诊断有价值的生物标志物提供了实验基础。

应用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱对结肠癌组织蛋白质的初步分析

[目的]检测结肠癌组织与正常结肠黏膜组织中差异蛋白质的表达,寻找与结肠癌相关的肿瘤标记物。[方法]采用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱仪(SELDI-TOF MS)对42例结肠癌组织及其配对的正常结肠黏膜组织进行蛋白质指纹图谱检测。[结果]结肠癌与正常对照共有38种蛋白质质谱峰强度差异有统计学意义(P<0.01),有分类意义的蛋白质有7种,质核比(M/Z)为M1678.47、M2182.19、M3358.44的蛋白质在大肠癌组织中低表达,M/Z为M1688.43、M2718.72、M3241.60、M3893.13的蛋白质在大肠癌组织中高表达。[结论]利用SELDI-TOF MS技术筛选出的具有分类意义的7种蛋白质,有可能成为大肠癌诊断及预后判断的一组生物学指标。

运用表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术建立结直肠癌预测诊断模型

目的寻找与结直肠癌相关的蛋白质并建立结直肠癌血清蛋白指纹图谱诊断预测模型。方法随机选取结直肠癌病例36例（结直肠癌组）和疝或行胆囊择期手术的患者36例（对照组），术前静脉采血，采用弱阳离子交换蛋白质芯片（CM10），经表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱（SELDI—TOF—MS）技术测定，建立结直肠癌的血清蛋白指纹图谱诊断预测模型；选取88例结直肠癌患者和44例正常对照进行盲法验证。结果通过两组比较，得到5个差异蛋白峰，并以此建立诊断预测模型，其敏感性为100％，特异性为97．2％。盲法验证显示敏感性为71．6％，特异性为72．7％。其中质荷比为8908与13707的蛋白均存在于结直肠癌组和正常组的比较中，提示上述蛋白质与结直肠癌相关。结论运用SELDI—TOF—MS技术建立的血清蛋白指纹图谱模型对诊断结直肠癌具有较高的敏感性与特异性。质荷比为8908与13707的蛋白可能成为结直肠癌的肿瘤标记物。

SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质,从而找出更好的生物标记物,用于检测胃炎。方法用SELDI-TOF-MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱,建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者,灵敏度为96.66%(29/30),特异性为93.55%(29/31)。2个蛋白质峰(5910和6440m/z)组合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96.6%(29/30),特异性为90.9%(30/33)。结论SELDI-TOF-MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌遗传性血清蛋白标志物

目的:采用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption inhibition time of flight ionization mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)检测肝癌易发家系患者和无癌家系患者血清蛋白生物标志物,比较两者间的蛋白差异,建立筛选血清蛋白质图谱模型并初步验证.方法:选择30例肝癌易发家系患者,30例无癌家系患者,应用SELDI-TOF-MS技术及相应的计算机软件进行比较分析,检测肝癌易发家系患者血清蛋白质的特异性生物标志,建立肝癌易发家系患者的筛选模型,并对其进行了双盲法验证.结果:肝癌易发家系组与对照组共有20个蛋白质差异有显著性,以其中4个蛋白标志物(9645.48、3960.65、7895.66和5916.07 kDa),建立的筛选模型检测灵敏度为93%(28/30),特异性为90%(27/30),准确率为92%(55/60).盲法验证,灵敏度为92%(23/25),特异性为90%(18/20).结论:SELDI-TOF-MS技术具有高灵敏度和特异性,在肝癌易发家系的血清蛋白特异性生物标志物的筛选等方面具有较好的应用前景.

SELDI-TOF-MS筛选微小病变型肾病综合征尿液生物标志物

目的探讨应用优化的表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)进行微小病变型肾病综合征(minimal-changed nephrotic syndrome,MCNS)大鼠尿液生物标志物筛选的意义。方法 SD大鼠30只随机分为正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)和强的松治疗组(n=10)。除正常对照组外,其余大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素5.5mg/kg复制MCNS模型,造模10d后分别予以强的松和蒸馏水灌胃治疗。21d后收集大鼠尿液,经弱阳离子交换芯片CM10捕获蛋白质,应用SELDI-TOF-MS获取3组大鼠的尿液蛋白质指纹图谱,采用Biomarker wizard软件比对分析差异蛋白。结果优化实验条件后获得较理想的尿液蛋白质指纹图谱,质控峰强度的平均CV值为18.0%(7.50%～35.89%)。在模型对照组与正常对照组之间检测到不同质荷比处有33个具统计学意义的差异蛋白峰(P<0.05),其中21个蛋白表达上调,12个蛋白表达下调。在正常对照组、模型对照组与强的松治疗组之间有6个蛋白质表达存在差异(P<0.05),这些差异蛋白峰在模型对照组中高表达,而在强的松治疗组中蛋白表达下调,峰强度接近正常对照组。结论通过优化实验条件并实行质量控制,SELDI-TOF-MS可为MCNS大鼠尿液生物标志物的筛选提供一个可行的检测途径。所获得的差异性蛋白峰对MCNS的早期诊断、治疗监测和寻找药物治疗的靶目标具有重要的意义。

利用SELDI-TOF MS筛选不同中医证型胃癌的差异蛋白

目的探讨利用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)比较不同中医证型胃癌患者的血清蛋白指纹图谱并筛选其差异蛋白。方法选取本院收治的36例胃癌患者,依据中医证型的不同分为虚证组19例与实证组17例。针对两组样本均应用SELDI TOF-MS检测其血清的蛋白指纹图谱,并通过相关数据处理软件进行分析。结果实证组与虚证组患者中4 620 m/z的蛋白质峰具有显著差异,其原始判别中特异度为94.1%(16/17),灵敏度为94.7%(18/19),准确率为94.4%(34/36)。结论应用SELDI-TOF MS检测胃癌患者的蛋白指纹图谱对其中医辨证分型具有可靠的筛选作用,能够对中医治疗起到一定的指导作用。

SELDI-TOF-MS技术建立早期肝硬化患者血清蛋白质谱筛选模型

目的:比较早期肝硬化患者和健康人的血清蛋白质谱并建立相关血清诊断模型。方法:用表面增强激光解吸电离—飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及CM10蛋白芯片对50例早期肝硬化患者、50例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析。结果:早期肝硬化患者与健康人对照组共有25个差异有统计学意义的蛋白质峰;建立诊断模型的灵敏度为96%(48/50),特异度为90%(45/50),准确率为93%(93/100)。结论:两组人的蛋白质谱有明显的差异,建立的诊断模型能够区分早期肝硬化患者与健康人,SELDI-TOF-MS技术在诊断及特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值。

应用SELDI-TOF-MS技术研究急性胰腺炎特异性血清标志物

目的 应用蛋白芯片表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）术揭示胰腺炎患者血清蛋白指纹特征,查找病情特异性血清标志物,探讨急性重症胰腺炎的早期诊断及评估的新方法.方法 收集急性胰腺炎患者血清标本52份,其中急性重症胰腺炎患者24份（SAP组）,急性轻型胰腺炎28份（MAP组）,同期健康人群血清52份（正常对照组）,应用SELDI检测急性胰腺炎患者及健康人群的蛋白质谱,按照临床胰腺炎分级,获得不同临床级别胰腺炎和健康人群的血清蛋白指纹图谱,应用计算机软件分析处理所有峰谱.结果 在质荷比（M/Z）1 000~20 000检出到127个蛋白峰,其中MAP组与正常对照组比较5个峰差异有明显统计学意义（P＜0.05）,MAP组与SAP组比较3个峰值差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 用SELDI-TOF-MS蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对急性胰腺炎的诊断以及病情轻重的评估提供了新的路径.

应用SELDI-TOF-MS技术筛选人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白

【目的】通过SELDI-TOF-MS技术筛选体外培养人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白。【方法】采用体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性;SELDI-TOF-MS技术结合CM-10芯片检测Bel-7402与Bel-FU蛋白质指纹图谱。【结果】细胞Bel-FU对于5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6倍、3.9倍、37.2倍、16.5倍、3.7倍。在质荷比(M/Z)2 000～50 000的范围内,Bel-FU与Bel-7402间共检测到8个差异蛋白(P<0.05),其中上调蛋白有3个,下调蛋白有5个。【结论】SELDI-TOF-MS技术为筛选肝癌MDR蛋白标志物提供了一个简便、有效的方法。

胶质瘤脑脊液蛋白质指纹图诊断模型的建立及其在临床诊断中的应用

目的SELDI-TOF建立和评估区分脑胶质瘤与非脑肿瘤、脑胶质瘤与脑良性肿瘤的脑脊液蛋白指纹图诊断模型。方法收集脑胶质瘤、脑良性肿瘤和轻度脑外伤患者的脑脊液共75份,其中50份胶质瘤和非脑肿瘤脑脊液标本,随机分为训练组33份(17例胶质瘤,16例非脑肿瘤)和盲法测试组17份(5例胶质瘤,12例非脑肿瘤),检测结合在H4蛋白芯片上的蛋白质,获得脑肿瘤和非脑肿瘤的蛋白表达质谱图,用matlab操作平台的人工神经网络分析收集的数据,建立了区分脑胶质瘤与非脑肿瘤的脑脊液蛋白指纹图诊断模型。脑胶质瘤和脑良性肿瘤47份标本,随机分为训练集31份(13例胶质瘤,18例脑良性肿瘤)和盲法测试集16份(9例胶质瘤,7例脑良性肿瘤),运用同样方法分析收集的数据,建立了区分脑胶质瘤与脑良性肿瘤的蛋白指纹图诊断模型。同时运用支持向量机对上述人工神经网络的结果进行验证,二者结果非常相似。结果1建立了区分胶质瘤与非脑肿瘤的脑脊液蛋白指纹图诊断模型,盲法测试胶质瘤诊断的敏感性和特异性分别为100%和91.7%。2建立了区分胶质瘤与脑良性肿瘤的脑脊液蛋白指纹图诊断模型,盲法测试胶质瘤诊断的敏感性和特异性分别为88.9%和100%。结论研究建立的诊断模型为胶质瘤的临床诊断尤其是定性诊断提供了一条崭新的途径。

血清蛋白质指纹图谱结合生物信息学在大肠癌早期诊断中的应用

目的:应用SELDI质谱仪建立大肠癌血清蛋白质指纹图谱的诊断模型。方法:测定182例血清标本(其中55例大肠癌、35例大肠腺瘤、92例健康人)的蛋白质指纹图谱,结合人工神经网络及支持向量机对这些数据进行处理,建立相应的指纹图谱诊断模型。结果:运用生物信息学方法从大肠癌与健康对照中筛选出了4个质荷比位于5 911 Da、8 922 Da、8 943 Da、8 817 Da(M/Z)峰,用它们建立的诊断模型的特异性为93.3%,敏感度为90.9%,Youden指数为0.84242。从大肠癌与大肠腺瘤中筛选出7个质荷比位于17 247 Da、18 420 Da、5 911 Da、9 294 Da、4 654 Da、21 694 Da、21 742 Da的峰值,建立模型的特异性为83.2%,敏感度为89.3%,Youden指数为0.72484。结论:该方法在大肠癌的诊断中较传统方法具有更高的敏感性和特异性。

河南林州食管癌高发区食管癌和癌前病变患者血清蛋白质质谱

背景与目的:食管癌和癌前病变组织中部分分子改变可在血液中反映出来,但这些指标的灵敏度和特异性较低,临床应用受到限制。血清蛋白质质谱分析技术有助于筛选癌变密切相关蛋白。本研究通过探讨食管癌高发区人群食管正常粘膜(normal,NOR)、食管上皮基底细胞过度增生(basalcellhyperplasia,BCH)、不典型增生(dysplasia,DYS)和食管癌(esophagealcarcinomc,EC)患者的血清蛋白质质谱的变化特征,为筛选和建立早期诊断和高危人群检测的血清学指标提供理论依据。方法:采用弱阳离子结合芯片(WCX2)及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测EC高发区无症状普查人群130人(NOR63人、BCH40人、DYS27人)和高发区EC30人的血清蛋白质质谱进行分析。应用BiomarkerPattern软件建立决策树分类模型,经10倍交叉验证得到该分类模型进行验证,测试组病变人群的诊断率和特异性(排除率)。结果:BCH组质荷比(M/Z)为M9306.61u的一种、DYS组M/Z为M13765.90u的一种及EC组M/Z为M2942.15u和M15953.40u的两种蛋白质分别建立决策树分类模型,训练组BCH、DYS和EC的敏感性(检出率)分别为57.5%(23/40)、88.8%(24/27)和96.6%(29/30),特异性分别为96.8%(61/63)、63.4%(40/63)和92.0%(58/63);测试组BCH、DYS和EC敏感性分别为57.5%(23/40)、66.6%(18/27)和60.0%(18/30),特异性为95.2%(60/63)、71.4%(45/63)和84.1%(53/63)。结论:M/Z为M9233.09u、M13657.15u、M2918.91u和M15827.37u的4种蛋白质可能包含有可用于食管癌高发区人群筛查的血清标记物,血清蛋白质质谱检测为食管癌和癌前病变的诊断和筛查提供了新的手段。