蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原的研究进展

贾第虫病被认为是一种再现的传染性疾病,特别是贾第虫在艾滋病患者中造成致死性腹泻已引起艾滋病工作者的重视。近年来的研究表明,贾第虫表面抗原的变异与致病作用有关,现就贾第虫表面抗原的特性、变异抗原基因结构与功能及变异机制方面的研究现状作一综述。

贾第虫表面变异抗原基因的克隆与序列测定(英文)

目的 :对比分析编码 90 k Da的表面变异蛋白 ( VSP)基因与已发表的其它 VSP基因。方法 :应用聚合酶链反应 ( PCR)技术、PCR产物的克隆技术和插入基因片段的序列测定。结果 :从贾第虫 0 2 - 4 A1基因组中将编码 90 k Da的表面变异蛋白几乎全长的基因调出 ,经序列分析 ,此基因长度为 2 0 19bp,编码 654个氨基酸 ,具有一个开放阅读框架。推导出的氨基酸序列的半脱氨酸含量丰富 ( 11.8mol% ) ,而且多数的半脱氨酸以 CXXC基序重复出现 2 6次。苏氨酸含量为 11.3mol% ,甘氨酸为 10 .9mol% ,丙氨酸为 10 .1mol%。序列分析发现有 2个天冬酰氨连接的糖基位点。结论 :象其他 VSPs一样 ,CRISP90具有一个高度保守疏水性 C末端。经同源性比较发现 ,与 CRP72有 56%的同源性。这一结果对研究贾第虫株的表面变异抗原基因的表达具有一定的意义。

蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因的克隆与序列测定(英文)

目的克隆并测定中国人源蓝氏贾第鞭毛虫滋养体SUCH/89/BTMRI/2(C2)的表面变异抗原基因序列。方法提取蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增表面变异抗原基因片段。将PCR产物连接到pMD19-T载体, 并转化至大肠埃希菌JM109中进行序列测定。通过NTI9.0软件对该基因的核苷酸和氨基酸序列进行分析,同时与基因库中已发表的蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因进行同源序列比对。结果中国人源蓝氏贾第鞭毛虫基因全长为2142bp,编码1条长为713个氨基酸残基的多肽链,含有一个简单的开放阅读框 (ORF)。这一推测的多肽链序列富含半胱氨酸(11.8 mol%),且以CXXC模基序重复出现29次、GGCY四肽模基序出现1次及NXS重复3次在N端连接糖基化位点中。此外,这条多肽链还富含苏氨酸 (10.2 mol%) 、甘氨酸(12.1mol%)和丙氨酸(10.1 mol%)。同其他已确定的表面变异抗原(VSPs)一样,中国人源蓝氏贾第鞭毛虫 SUCH/89/BTMRI/2 (C2) 株的表面变异抗原也含有高度保守的疏水性 C 末端。该表面变异抗原基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同GenBank中Gillin发表的TSA417序列的同源性均高达 99%。结论中国人源蓝氏贾第鞭毛虫滋养体表达的表面变异抗原基因具有与已鉴定的蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原基因同样的特性。

人源蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原部分基因的克隆及序列分析

目的获取蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)表面变异抗原基因的部分核苷酸序列,并对其进行序列分析。方法根据贾第虫VSP已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增VSP基因的部分核苷酸序列,将PCR产物纯化后连接到pMD19-TSimple Vector,转化至感受态细胞JM109,扩增目的片段。扩增的片段测序后进行生物信息学分析。结果成功克隆了编码贾第虫VSP的一分子质量为1486bp的基因片段。该片段富含半胱氨酸(12.8%),且含有26个-CXXC-模体,所得序列与GenBank中Gillin(1990)公布的TSA417基因序列同源性为99%。结论我国人源贾第虫北京株(BEIJ88/BTMR1/1)中表面变异抗原部分基因已测序完成。

伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

试验旨在建立一种能鉴定水牛临床感染伊氏锥虫的方法。试验以纯化的伊氏锥虫3D7腹水单抗作为包被抗体,HRP标记的伊氏锥虫5B9单抗作为第2抗体,建立了检测伊氏锥虫变异表面糖蛋白(variant surface glucoprotein,VSG)抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行了灵敏度、特异性试验及初步检测应用试验。结果显示,用该法检测阳性血清,1∶3200稀释时其D450nm值仍大于阴阳临界值;交叉反应试验结果显示,其不与泰勒虫、弓形虫、衣原体、大片吸虫等抗原发生交叉反应,表明该法具有良好的检测特异性;用该法检测了当地82份水牛血清,阳性率为9.76%。结果表明本研究建立的伊氏锥虫VSG抗原双抗体夹心ELISA方法检测灵敏度高、特异性好,能作为检测水牛临床感染伊氏锥虫的有效方法,对于临床伊氏锥虫病的诊断和防控具有重要意义。

乙型肝炎病毒S基因变异与表面抗原变异株

乙型肝炎病毒(HBV)以具有3．2kb的部分单连的双链DNA基因组为特征。在感染的肝细胞中HBV主要以RNA为中间体逆转录复制，由于其逆转录酶缺乏校正活性，所以其基因的突变率较一般DNA病毒为高。据估计，嗜肝DNA病毒的突变率近于2×10^-4／位/年^[1],这比RNA病毒低1～2个数量级，但却比一般的DNA病毒高出4个数量级^[2].

乙肝表面抗原变异株的检测（下）

（接上期） 表面抗原的变异株 最初关于HBsAg变异株的报道是一位HBV阳性母亲所生儿童在感染上的反弹。该儿童尽管接种了疫苗并接受了对HBV的被动免疫但还是垂直感染了这种病毒。对反弹的病毒株进行了DNA测序并发现在HBsAgaa位点145处发生了甘氨酸替代精氨酸（Gly／Arg145）。尽管对野生型病毒具有保护性的抗．HBs滴度，该儿童随后保持了这种Gly／Arg145变异株的DNA和HBsAg阳性达12年。

乙肝表面抗原变异株的检测（上）

过去的十年中，乙肝病毒（HBV）的变异株在疾病诊断中对于未知疾病流行率的转变因素产生了重要的影响，HBV感染已对全球的健康状态产生主要的作用：超过世界三分之一以上人口曾受到感染；约3．5亿人口存在现行感染。由于该病毒具有独特的分子生物学特性世界范围的感染库可作为HBV变异株产生的基础。自从80年代晚期以来，我们已发现该病毒在选择性压力的作用下整个HBV基因组都出现了变异，这种选择性压力诸如接种疫苗和抗病毒治疗。

煤焦老板与博士团队联手破解乙肝病毒变异难题——为民间资本投资解决公共卫生困扰课题树立榜样

山西省太原市清徐县煤焦老板潘幸业先后拿出160多万元，与留美归国博士等专家，联手对困扰人类的乙肝表面抗原变异株诊断的世界检测难题进行攻关取得突破性进展：即用自制的乙肝病毒变异株诊断试剂可检测出14种变异病毒。为在世界范围内发现潜藏的乙肝患者及病毒携带者走出了一条新路。

核苷（酸）类似物耐药与乙型肝炎病毒表面抗原变异

HBsAg变异是HBV研究的热点之一，但既往研究主要关注HBsAg变异与疫苗乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）逃逸、HBsAg诊断试剂以及隐匿性HBV感染的关系等。实际上，在HBV基因组中，HBsAg的编码序列与反转录酶（Rt）的编码序列完全重叠，因此Rt变异有可能造成HBsAg的相应变异。

采用ELISA差减分析法探讨武汉地区中老年患者IEM HBsAg的携带状态

目的探讨武汉地区中老年患者血清免疫逃逸变异表面抗原(IEM HBsAg)携带状态。方法以2种不同抗HBsmAb包被,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对1641例中老年既往HBV感染者的血清标本进行检测,并以中和实验及广谱IEMHBsAg试剂对单一阳性者血清HBsAg检测的特异度进行验证。结果所建立的G6-ELISA与E2-ELISA具有大致相同的稳定性、特异度与灵敏度,对该组血清检测的阳性率分别为29.37%、29.01%。6例G6-ELISA单一阳性血清中,抗HBs、抗HBe、抗HBc、HBeAg及HBV DNA阳性例数分别为3、1、6、1、2例,抗HBs中和实验阳性率为100.00%,平均中和率81.14%。雅培化学发光试剂复核此6例均为阳性结果。结论结合文献与该课题组既往研究分析,该组中老年患者中存在少量呈优势表达的IEMHBV感染者。